雌激素受體基因多態性與雷洛昔芬對絕經后女性骨質疏松癥療效的關系

陳娟　郭凱　李惠莉　孫靈通

[摘要] 目的 分析雌激素受體基因多態性與雷洛昔芬對絕經后女性骨質疏松癥聯系，并明確是否療效與基因型存在聯系。 方法 回顧性分析本院2015年1月～2017年12月絕經后女性骨質疏松癥患者57例，所有患者均接受雷洛昔芬和鈣爾奇治療，治療持續12個月，同時檢測患者基因型。對比治療前后患者骨密度、骨鈣素、Ⅰ型膠原C端肽水平，分析療效與基因型聯系。 結果 治療后患者骨密度明顯高于治療前，骨鈣素和Ⅰ型膠原C端肽水平明顯低于治療前，差異有統計學意義（P<0.05）。治療前，對校正年齡、體質指數、絕經年限等影響因素進行協方差分析，發現基因位點與骨密度、骨鈣素和Ⅰ型膠原C端肽水平差異均無統計學意義（P>0.05）;治療后，對校正年齡、體質指數、絕經年限等影響因素進行協方差分析，發現ESRI基因上rs3844508位點純合突變型和雜合基因型（G/C、G/A）股骨頸骨密度水平有所上升，且高于純合野生型（A/A），差異有統計學意義（χ2=18.474，P<0.05）。其余位點與其他位置骨密度、骨鈣素和Ⅰ型膠原C端肽水平差異無統計學意義（P>0.05）。 結論 通過雷洛昔芬治療，絕經后女性骨質疏松癥患者各項生理指標得到改善，而且ESRI基因上rs3844508位點與絕經后女性骨質疏松癥有一定關聯。

[關鍵詞] 雌激素受體基因多態性;雷洛昔芬;絕經后女性骨質疏松癥

[中圖分類號] R711? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2019）23-0008-03

[Abstract] Objective To analyze the relationship between estrogen receptor gene polymorphism， raloxifene and efficacy in postmenopausal women with osteoporosis， and to determine whether the efficacy is related to genotype. Methods 57 patients with postmenopausal women with osteoporosis from January 2015 to December 2017 were retrospectively analyzed. All patients were treated with raloxifene and caltrate. The treatment lasted for 12 months and the patient's gene type was detected. The bone mineral density， osteocalcin and type Ⅰ collagen C-terminal peptide levels were compared before and after treatment， and the correlation of therapeutic effect and genotype was analyzed. Results The bone mineral density of patients after treatment was significantly higher than that before treatment. The levels of osteocalcin and type Ⅰ collagen C-terminal peptide after treatment were significantly lower than before treatment， and the difference was statistically significant（P<0.05）. Before treatment， covariance analysis was performed on the influencing factors such as adjusted age， body mass index and menopausal age. It was found that there was no statistical significance between gene locus and bone mineral density， osteocalcin and type I collagen C-terminal peptide（P>0.05）. After treatment， covariance analysis was performed on the influencing factors such as adjusted age， body mass index and menopausal age. It was found that the rs3844508 locus homozygous mutant and heterozygous genotype（G/C， G/A） in the ESRI gene had increased bone mineral density. The percentage increased and was higher than the percentage of homozygous wild type （A/A）， and the difference was statistically significant（χ2=18.474， P<0.05）. There were no significant differences in bone mineral density， osteocalcin and type I collagen C-terminal peptide levels between the remaining sites and other locations（P>0.05）. Conclusion The physiological indicators of postmenopausal women with osteoporosis are improved by raloxifene treatment， and the rs3844508 locus on ESRI gene is associated with postmenopausal women with osteoporosis.

[Key words] Estrogen receptor gene polymorphism;Raloxifene;Postmenopausal women osteoporosis; Clinical study

骨質疏松癥是常見代謝類疾病，臨床表現較多，而且骨折風險升高，臨床上治療方式較多[1]。絕經后女性骨質疏松癥發病率有一定上升，臨床一般通過服用雷洛昔芬進行治療。雷洛昔芬可以調節人體雌激素受體水平，強化人體骨密度，減少骨折風險。隨著研究持續深入，發現雌激素受體存在兩種亞型，ESR1和ESR2，且兩種亞型結構類似，雷洛昔芬通過和雌激素受體兩種亞型結合，發揮根本作用[2]。結合雷洛昔芬本身作用機制，發現ESR1和ESR2基因遺傳變異與雷洛昔芬抗骨質疏松癥療效有直接關聯[3]。我院對雌激素受體基因多態性與雷洛昔芬對絕經后女性骨質疏松癥聯系展開研究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

回顧性分析本院2015年1月～2017年12月絕經后女性骨質疏松癥患者57例，所有患者均接受雷洛昔芬和鈣爾奇治療。其中，所有女性均自然絕經，且絕經年數>2年。患者年齡52～77歲，平均（64.1±5.2）歲，平均體質指數（22.9±2.3）kg/m2，平均絕經年齡（48.8±6.5）歲。

納入標準：（1）所有研究對象均符合絕經后女性骨質疏松癥診斷標準[4];（2）年齡>50歲;（3）無其他婦科疾病;（4）所有研究對象及其家屬均知曉本項研究，并在同意書上簽字;（5）該實驗經醫院倫理委員會批準實施;（6）資料健全者;（7）無其他臟器系統病變者。排除標準：（1）患有骨礦疾病;（2）肝、腎功能不健全;（3）服用類固醇或抗驚厥藥物[5];（4）惡性腫瘤;（5）雙側卵巢被切除[6];（6）精神障礙;（7）中途退出/轉院者或不愿加入本次研究且不予合作者。

1.2方法

1.2.1 治療方法? 所有患者均服用雷洛昔芬片（江蘇恒瑞醫藥股份有限公司，60 mg/片，國藥準字H20050899），1次/d，每次1片;同時服用鈣爾奇D（蘇州立達制藥有限公司，600 mg/片，國食健字G20050046），1次/d，每次1～2片。治療持續12個月。

1.2.2 實驗室檢查? 空腹清晨抽取患者靜脈血，離心獲取血清，使用電化學發光免疫分析法測定骨鈣素、Ⅰ型膠原C端肽水平。

1.2.3 骨密度檢查? 使用Hologic QDR 2000型雙能X線吸收儀，測定患者L2～4、左髖部和股骨頸骨密度。變異系數均為0.96%。

1.2.4 基因型測定? 通過丙醇法進行DNA提取，運用SNaPshot SNP分型技術檢測所有基因型。

1.3觀察指標

對比治療前后患者骨密度、骨鈣素、Ⅰ型膠原C端肽水平，分析療效與基因型聯系。

1.4 統計學方法

應用SPSS18.0統計學軟件對實驗結果進行分析，計數資料以百分比表示，采用χ2檢驗。計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 治療前后骨密度、骨鈣素和Ⅰ型膠原C端肽水平比較

治療后患者骨密度明顯高于治療前，骨鈣素和Ⅰ型膠原C端肽水平明顯低于治療前，差異具有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.2 基因多態性與治療前后骨密度、骨鈣素和Ⅰ型膠原C端肽水平關系

治療前，對校正年齡、體質指數、絕經年限等影響因素進行協方差分析，發現基因位點與骨密度、骨鈣素和Ⅰ型膠原C端肽水平差異均無統計學意義（P>0.05）;治療后，對校正年齡、體質指數、絕經年限等影響因素進行協方差分析，發現ESRI基因上rs3844508位點純合突變型和雜合基因型（G/C、G/A）股骨頸骨密度水平有所上升，而且高于純合野生型（A/A），差異具有統計學意義（χ2=18.474，P<0.05）。其余位點與其他位置骨密度、骨鈣素和Ⅰ型膠原C端肽水平差異無統計學意義（P>0.05）。見表2。

3 討論

雷洛昔芬是一種人工合成藥物，屬于非類固醇類、苯噻酚化合物，具有較高選擇性，可以與雌激素受體結合，強化絕經后女性骨骼[7]。在目前研究中[8-9]，已經知曉雷洛昔芬治療絕經后女性骨質疏松癥的作用機制，不同靶器官ESR1和ESR2表達以及ESR1和ESR2比例不同與之后生物學效應的產生有直接聯系，當通過雌激素效應通路時，候選基因轉化生長因子β途徑等活動會發揮雌激素激動劑作用，以介導阻斷的方式中斷AF-2基因轉錄，從而發揮雌激素拮抗劑樣作用。

但目前臨床上關于雷洛昔芬的研究報道相對較少，而且骨質疏松癥的治療是一個漫長過程，再結合不同基因型，會采用不同藥物進行治療，也是目前研究重點內容。研究表明，雌激素可以與膜受體結合誘導快速的細胞內反應，可調節多種細胞內磷酸化級聯途徑來發揮非核效應，這些效應包括激活腺甘酸環化酶（AC）、MAPK、磷脂酰肌醇 3-激酶（PI3K）或增加胞內鈣離子濃度等。結合本次實驗內容表明，ESR1基因存在Pvu Ⅱ和Xba Ⅰ多態性，而且通過純合子基因與雜合子基因比較，發現純合子基因骨密度上升更為明顯，而且相應生理指標下降幅度較大，二者間存在顯著差異。并且在隨后通過對外顯子、外顯子/內含子交界區以及5-啟動子等功能區域標簽SNPs進行分析，結合對各位點基因型中的骨密度以及股轉換指標進行分析，并未發現明顯差異。當持續用藥1年后再次對研究對象進行復查，會發現人體L2～4和股骨頸骨密度有所上升，并且股骨頸骨密度變化水平與ESR1的rs3844508位點基因型有邊緣相關關系，并且相對于純合野生型（A/A），結合突變型（G/G）和雜合基因型（G/A）更為明顯[10]。在骨轉換指標復查當中，會發現血液Ⅰ型膠原C端肽和骨鈣素水平有所下降，但各位點間骨轉換指標無差異。但本次實驗由于實驗樣本納入數量較少，所以實驗結果無法得到準確驗證，需擴大實驗對象納入范圍以及人數，進行大樣本研究，才可以確定雌激素受體基因多態性與雷洛昔芬之間的確切關聯。本研究的特色和創新之處：本研究對接受雷洛昔芬和鈣爾奇治療的絕經后女性骨質疏松癥患者景象雌激素受體基因檢驗，通過對比治療前后骨密度、骨鈣素和Ⅰ型膠原C端肽水平、基因多態性與治療前后骨密度、骨鈣素和Ⅰ型膠原C端肽水平關系，探討雌激素受體基因多態性與雷洛昔芬對絕經后女性骨質疏松癥聯系，并明確療效與基因型之間的聯系。項目風險分析與對策：病例數量不足：為盡可能準確性的以樣本估計總體，減小抽樣誤差，可提升樣本量。

綜上所述，通過雷洛昔芬治療，絕經后女性骨質疏松癥患者各項生理指標得到改善，且ESRI基因上rs3844508位點與絕經后女性骨質疏松癥有一定關聯。

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（收稿日期：2019-02-24）