HPLC法測定調經益母膠囊中原兒茶醛含量

姚世霞 朱旭江 李 欣

1.甘肅省藥品檢驗研究院，甘肅 蘭州 730070； 2. 甘肅省中藏藥檢驗檢測技術工程實驗室，甘肅 蘭州 730070

調經益母膠囊處方由益母草、冰糖草、丹參三味藥組成，具有調經活血，祛瘀生新的功效，用于月經不調，經期腹痛，產后瘀血不清，子宮縮不良[1]。現行標準號為YBZ16152005-2015Z，此標準中含量測定項選用丹參酮ⅡA作為測定指標。丹參酮ⅡA為唇形科植物丹參Salvia Miltiorrhiza Bge．的脂溶性成分，具有菲醌類的片狀剛性結構，在水中幾乎不溶，具有抗菌消炎、活血化瘀、抗皮膚衰老等作用[2-3]。調經益母膠囊制劑生產中原藥材均采用水煎煮提取，提取的多為水溶性物質。原兒茶醛是常用中藥丹參水溶性成分丹酚酸B降解的主要產物之一，具有抗動脈粥樣硬化、保護心肌、抗血栓等廣泛的藥理活性[4]。因此，選用丹參中的水溶性成分原兒茶醛作為測定指標，研究建立了調經益母膠囊中原兒茶醛含量的測定方法，可有效用于樣品的質量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters e2695型高效液相色譜儀；島津LC20A液相色譜儀；Agilent HC-18(4.6×250 nm，5 μm)色譜柱，資生堂 C-18(4.6×250 nm，5 μm)色譜柱，Agilent TC-18(4.6×250 nm，5 μm)色譜柱；Mettler ME-204電子天平；Mettler MS205DU電子天平(十萬分之一)。

1.2 試藥 原兒茶醛對照品(批號：110810-200506，中國藥品生物制品檢定所)；調經益母膠囊樣品(批號：S17010101、S17010102、S17010-103、S17010104、S17010105、S17010106、S17010-107、S17010108、S17010109、S17010110，甘肅皇普謐制藥有限公司)。流動相所用甲醇為色譜純(默克)，水為超純水，其它試劑均為分析純(國藥集團化學試劑有限公司)。

2 方法與結果

2.1 測定波長的選擇 以甲醇為溶劑，在190～400 nm波長內掃描，測得原兒茶醛紫外吸收圖譜，如圖1所示。可以看出原兒茶醛對照品最大吸收波長278.4 nm處，藥典中原兒茶醛測定波長為280 nm[3]，考慮與藥典一致，選擇280 nm處作為檢測波長。

2.2 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-磷酸(7:93)為流動相，柱溫30℃，流速：1.0 mL/min，進樣量：10 μL；原兒茶醛的檢測波長為280 nm。

2.3 溶液的制備

2.3.1 供試品溶液的制備 取本品20粒內容物，混勻，精密稱定，取約2.5 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入水50 mL，密塞，稱定重量，加熱回流2 h，放冷，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液25 mL，用乙酸乙酯萃取5次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉移至10 mL容量瓶中，過濾，即得。

2.3.2 對照品溶液的制備 精密稱定原兒茶醛對照品28.88 mg置50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，再精密量取儲備液2 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3.3 陰性溶液的制備 取處方中除去丹參的其他藥味，按照制法制備成不含丹參的樣品，取適量，按照供試品溶液制備方法同法制備。

2.4 專屬性考察 分別取上述3種溶液各10 μL，注入液相色譜儀，結果，在供試品色譜圖上，在原兒茶醛對照品溶液保留時間出現相同的色譜峰，紫外圖譜一致，分離度、拖尾因子符合要求，陰性溶液未見干擾。如圖2所示。

2.5 標準曲線 測定精密吸取對照品溶液2、5、10、15、20、30 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積積分值。以對照品溶液的進樣量(μg)為橫坐標(X)，峰面積積分值為縱坐標(Y)作圖，繪制標準曲線，計算回歸方程為Y=4×106X-2087.1，r=0.9999，結果表明，原兒茶醛在0.0452～0.6787 μg范圍內，峰面積與含量有良好的線性關系。

2.6 精密度試驗 取對照品溶液10 μL，重復進樣6次，記錄峰面積，測定結果經計算，RSD為 0.4%，表明儀器精密度良好。

2.7 重復性實驗 取同一批樣品，按“2.3”項下制備供試品溶液6份，精密量取供試品溶液10 μL，進行測定，計算含量。結果含量平均值為0.2403 mg/g，RSD為2.2%，重復性較好。

2.8 穩定性考察 取供試品溶液1份，分別在0、4、8、12、16、18 h記錄峰面積，結果RSD為1.3%，表明供試品溶液在18 h內穩定性均良好，。

2.9 回收率實驗 取已知含量的供試品9份，每份約1.25 g，精密稱定，至錐形瓶中，分別精密加入一定量的對照品溶液，按供試品溶液制備方法制備，測定，計算回收率見表1。

表1 回收率測定結果 (n=9)

2.10 樣品含量測定 結果 按照擬定的方法測定10批次樣品含量，結果見表2。

表2 樣品測定結果

3 討論

3.1 提取方法的選擇 原兒茶醛為丹參中的水溶性成分[5-6]，原兒茶醛測定方法已經比較成熟，大多采用超聲提取和回流提取兩種方法[7-8]。選擇了將樣品分別用水和甲醇溶解后采用超聲和回流后用乙酸乙酯萃取分離的方法制備供試品溶液，結果采用回流提取的樣品，含量明顯高于采用甲醇或水超聲提取的樣品，回流提取的樣品采用乙酸乙酯萃取后，樣品峰在對照品出峰位置無干擾，未萃取的樣品雜質較多，存在干擾，因此，經試驗，選擇將樣品用水回流后用乙酸乙酯萃取作為樣品的制備方法。

3.2 流動相的選擇 參考文獻[7-9]，分別對流動相進行考察，結果流動相甲醇-0.1%磷酸(7∶93)、甲醇-水(10∶90)、乙腈-水(5∶95)均能達到統適用性要求，甲醇-0.1%磷酸(7∶93)為流動相時分離度更高，因此作為測定用流動相。

通過以上實驗，采用擬定的方法測定調經益母膠囊中原兒茶醛含量的方法準確度、精密度、專屬性、線性關系及耐用性良好，可作為調經益母膠囊的質量控制方法。