羅平小黃姜中6-姜辣素含量測定的方法學研究

楊瀚 白雪飛 楊嬌 李麗超 馬娜 郭利群

摘要：目的 建立羅平小黃姜6-姜辣素的含量測定方法。方法 高效液相色譜法，色譜柱ZORBAX-SB-C18（規格：4.6*150 5-Micron）;流動相為乙腈：水=45：55溶液;流速為1.0 mL·min-1;進樣量：10 μL;柱溫：35℃;檢測波長280 nm。結果 標準曲線回歸方程Y=0.55535 X-7.15104（R =0.99999）進樣量在107～8025 ng范圍內，線性關系良好。準確度試驗RSD為3.8%（n=9），平均回收率為97.7%，精密度試驗RSD為0.18%，重復性試驗RSD為2.9%。結論 本實驗方法穩定可靠、簡便可行、具有較好的重現性，為羅平小黃姜的質量評價提供了依據。

關鍵詞：羅平小黃姜、6-姜辣素、高效液相色譜法、含量測定

中圖分類號：R927.2?? 文獻標志碼：A?? 文章編號：1007-2349（2019）09-0065-03

【Abstract】Objective：To establish a method for the determination of 6-gingerin in Luoping Small Yellow Ginger. Methods：High performance liquid chromatography was used. Column was ZORBAX-SB-C18（specification：4.6*150 5-Micron），mobile phase was acetonitrile，water was 45：55 solution，flow rate was 1.0 mL·min-1，injection volume was 10 μL，column temperature was 35℃ and detection wavelength was 280 nm. Results：The standard curve regression equation was Y=0.55535 X-7.15104（R=0.99999）injection volume in the range of 107 to 8025 ng，and the linear relationship is good. The accuracy test RSD was 3.8%（n=9），the average recovery was 97.7%，the precision test RSD was 0.18%，and the repeatability test RSD was 2.9%. Conclusion：This method is stable，reliable，simple and feasible，and has good reproducibility and can provide a basis for the quality evaluation of Luoping small yellow ginger.

【Key words】Luoping small yellow ginger，6-gingerol，HPLC，content determination

羅平小黃姜為姜科（Zingiberaceae）姜屬（Zingiber Boehm）植物姜（Zingiber officinale Rosc）的塊莖，干姜：本品為姜科植物姜的新鮮根莖[1]。秋、冬二季采挖，除去須根和泥沙。生姜：本品為姜科植物姜的干燥根莖，冬季采挖除去須根和泥沙，曬干或低溫干燥。趁鮮切片曬干或低溫干燥者稱為 “干姜片”[2]。秋冬季挖取姜的根莖，洗凈，刮取外層栓皮，曬干。主要栽培于云南省曲靖市羅平縣。根莖供藥用，“干姜”主治心腹冷痛，吐瀉，肢冷脈微，寒飲喘咳，風寒濕痹[3-5]。“生姜”主治感冒風寒，嘔吐，痰飲，喘咳，脹滿;解半夏、天南星及魚蟹、鳥獸肉毒[6-7]。又可作烹調配料或制成醬菜、糖姜。莖、葉、根莖均可提取芳香油，用于食品、飲料及化妝品香料中[8]。6-姜辣素為羅平小黃姜中主要的指標成份。本實驗以6-姜辣素含量為指標，采用高效液相法測定羅平小黃姜中6-姜辣素的含量。本實驗旨在為羅平小黃姜質量評價提供依據。

羅平小黃姜樣品由云南現代民族藥工程技術研究中心總工程師郭毅新鑒定，標本存放于云南現代民族藥工程技術研究中心標本室，標本號：CDYN-HS-00111。

1 儀器與材料

儀器：Agilent 1260高效液相色譜儀，電子天平（賽多利斯 SI-224，d=0.1 mg），超聲波清洗器（天津恒奧科技 HU-15-005），甲醇 GR（上海星可）批號：1866507 650，乙腈 GR（默克）批號：10885130 717，6-姜辣素對照品，購于上海安譜實驗科技股份有限公司，批號：H5730010，標示含量：98.2%，水（純凈水）;小黃姜（干姜），購于云南羅平（2017年12月10日采購）。

2 方法與結果

2.1 測定條件 Agilent 1260檢測器高效液相色譜儀，色譜柱：ZORBAX-SB-C18（規格：4.6*150 5-Micron），檢測波長：280nm，柱溫：35℃，流速：1.0 mL/min，進樣量：10 μL，檢測波長280 nm，分析時間：15 min，流動相：（乙腈：水=45：55）。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品儲備溶液配制：精密稱取6-姜酚對照品0.0107 g，于10 mL容量瓶中，用流動相溶液稀釋至刻度，搖勻即得。（濃度：1.07 mg/mL）

2.2.2 對照品上機溶液配制 量取對照品儲備溶液 1mL至10 mL容量瓶中，用流動相溶液稀釋至刻度，搖勻即得。（濃度：0.107 mg/mL）

2.2.3 對照品加標溶液的配制 精密稱取6-姜辣素對照品0.0216 g，于5 mL容量瓶中，用流動相溶液稀釋至刻度，搖勻即得。（濃度：4.32 mg/mL。）

2.2.4 樣品溶液的制備 稱取過2號篩的試樣約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇20 mL，稱定重量，超聲處理40 min，放冷，再稱定重量，用75%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取濾液，即得。

3 方法學考察

3.1 線性關系與線性范圍考察 取配置好的對照品溶液，分別進樣1 μL、5 μL、10 μL、25 μL、50 μL、75 μL。以峰面積為縱坐標、進樣（ng）量為橫坐標，得到標準曲線回歸方程Y=0.55535X-7.15104（r=0.9999），進樣量107～8025ng范圍內，線性關系良好。結果見表1.

3.2 精密度試驗 取對照品上機溶液連續進樣6針，記錄峰面積，結果見表2。

3.3 重復性試驗 參照樣品溶液的配制方法，制備8份樣品溶液，分別依次進樣10 μL。記錄6-姜辣素的保留時間和相應的峰面積，并計算6-姜辣素的含量，結果見表3

3.4 穩定性試驗 參照樣品溶液的配制方法，制備2份樣品溶液，每隔2 h、6 h、8 h、24 h分別依次進樣10 μL。記錄6-姜辣素的保留時間和相應的峰面積，結果見表4。

3.5 準確度試驗 全程加標，加標量分別為所測樣品含量的50%、100%、150%（每個梯度3次平行），參照樣品溶液的配制，樣品含量為0.76%，結果見表5。

3.6 專屬性試驗 參照對照品溶液、供試品溶液的配制方法，配制對照品溶液、供試品溶液各1份，用配制對照品的溶劑作為溶劑空白溶液，分別進樣，在對照品主要成分保留時間左右的位置，空白溶液相對應的時間應無雜質干擾峰。

4 系統適應性

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈-甲醇-水（45：55）為流動相;檢測波長為280nm。理論板數按6-姜辣素峰計算應不低于5000。本品按干燥品計算，含6-姜辣素不得少于0.30%。

5.討論

本研究建立了羅平小黃姜6-姜辣素的含量測定方法，對線性范圍、精密度、準確度等各方面進行考察，發現該方法專屬性好、實用性強，結果穩定可靠。

參考文獻：

[1]盧傳堅.姜的化學成分分析研究概述[J].中藥新藥與臨床藥理，2003（3）：215-217.

[2]楊建，王兆進，李海偉，等.不同干燥方法對生姜6-姜酚含量的影響[J].中國食品添加劑，2012（6）：111-114.

[3]營大禮.干姜化學成分及藥理作用的研究[J].中國藥房，2008，19（18）：1435-1436.

[4]王嘯.生姜活性部位與成分研究進展[J].中醫研究，2009，22（2）：53-55.

[5]孫永全.生姜藥理作用研究進展[J].現代中西醫結合雜志，2007，16（4）：561-566.

[6]黃雪松.姜酚測定方法研究[J].中 國 調 味 品，2002，（2）：31-35.

[7]張雪紅，劉紅星.姜酚的研究進展[J].廣西師范學院學報：自然科學版，2009，26（1）：110-113.

[8]黃雪松，晏日安，吳建中.姜酚的生物活性述評[J].暨南大學學報：自然科學版，2005，26（3）：434-439.

（收稿日期：2019-07-11）