微柱凝膠法檢測孕婦血清IgG抗體效價參考值的臨床研究

盛曉星

（南京市六合區人民醫院檢驗科，江蘇 南京 211500）

新生兒溶血病主要因胎兒同母體的血型不相符所造成，且癥狀表現同母體抗體的效價值存在密切聯系。新生兒溶血病的患病概率會伴隨孕婦抗A、B水平的提升而增高。患兒輕則可能發生水腫、貧血、肝腫大等情況，嚴重者可能出現核黃疸，乃至發生新生兒死亡。那么，對夫婦血型不合的情況需重點關注，并定時篩查，便于及時發現并處理。本文以我院收治ABO血型不合的O型血孕婦500例為例，探究微柱凝膠法檢測的臨床應用價值，具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月～2018年12月我院收治ABO血型不合的O型血孕婦500例作為研究對象，其中，年齡22～35歲，平均年齡（28.5±1.2）歲，孕周短則17周，長則40周，平均孕周（24.1±1.3）周，167例O型血孕婦丈夫血型為A型，168例O型血孕婦丈夫血型為B型，165例O型血孕婦丈夫血型為AB型。本次研究經倫理委員會許可，全體孕婦及家屬均自愿參與，簽署同意書。

1.2 納入/排除標準

納入標準：（1）全體孕婦僅屬于ABO血型不合情況，孕婦血型均為O型；（2）全體孕婦年齡22～35歲。

排除標準：（1）排除Rh血型陰性血孕婦；（2）排除患血液系統疾病的孕婦；（3）排除有輸血史的孕婦。

1.3 方法

本次選用設備包括：抗人球蛋白檢測卡、0.2 mol/L2-ME應用液、不規則抗體檢測試劑等。

全體孕婦均接受微柱凝膠法檢測，具體過程為：通過抗人球蛋白檢測卡對不規則抗體進行篩查，注意嚴格遵照說明書進行操作與讀取。取孕婦空腹靜脈血3 mL，經沉淀、離心處理后獲得400 uL血清樣本，將其同400 uL濃度0.2 mol/L的2-ME應用液混勻，于試管口貼好密封膜，放入恒溫37℃的箱內靜止1小時，保證血清內免疫球蛋白M抗體充分裂解。選擇12個容量為10 mm×60 mm的試管進行標記，最后標記為12的試管內放入生理鹽水為陰性對照，將經2-ME裂解后的血清通過生理鹽水稀釋至不同倍數，濃度分別為：1：2、1：22、1：23……1：210、1：211，通過鹽水法確定1：2的稀釋度管IgM抗體被損壞。通過母體IgG抗體效價檢測卡檢測抗體效價，并做好標記。分別于胃管內添加50 uL與孕婦丈夫血型相同的濃度0.8%的紅細胞懸濁液，順次加入處理過稀釋不同梯度的血清及對照生理鹽水各50 uL，放入恒溫37℃的孵化箱內孵化15分鐘，通過離心機對微管進行離心處理，離心速度調制900轉/min離心2 min，后調制1500轉/min離心3 min。以發生1+凝集強度的血清最高稀釋度作為判定陽性的標準，以血清稀釋的倒數作為效價參考值。

2 結果

500例孕婦中，IgG抗體效價參考值超過256的患者約229例，占比45.80%，其中丈夫A型血84例，丈夫B型血94例，丈夫AB型血51例，見表1。

表1 孕婦IgG抗體效價分布

3 討論

新生兒在出生時可能產生多種先天性疾病，其中溶血病是一類嚴重的新生兒疾病。其主要是因為母體血液當中所含的免疫球蛋白G（IgG）抗體經由胎盤、臍帶運輸到胎兒體內，與胎兒血液紅細胞中遺傳父親的抗原相結合，由于抗體和抗原的異源性，導致胎兒血液中的紅細胞壽命嚴重縮短，引發溶血性病變。根據現代醫學數據統計顯示，由于孕婦和胎兒之間的ABO血型不合產生的新生兒溶血病癥的概率最高，而IgG抗體也是孕婦血液中唯一能夠通過胎盤——臍帶系統進入胎兒血液中的抗體物質，在與異源抗原結合后就會破壞其紅細胞，在新生兒出生時產生溶血性病變，包括黃疸、早產、早期流產、貧血等，嚴重時甚至會導致新生兒死亡[1]。因此可見ABO血型溶血病癥的發生與孕婦本身的IgG抗體中的A、B型效價有著直接的關系，在孕婦懷孕期間的孕檢中需通過檢測IgG抗A效價和B效價的方式對新生兒溶血病癥進行預判，從而盡早采取預防措施，在新生兒出生后能夠立即進行各種治療，以確保其生命健康。

人類最早對孕婦IgG抗體進行檢查時采用的是試管法，利用抗人球蛋白直接對ABO血型進行交配確認，操作相對簡便，但對于血型中亞型的判斷不夠準確。隨后醫學工作者又制備出了具備抗IgG抗體的抗人免疫球蛋白抗體，從而直接可在生理鹽水環境下直接觀察紅細胞的凝集反應，從而使血型檢測工作更加方便和直觀，而該技術也直接使用了抗體制備者——Coombs的名字。該技術也進一步確定了新生兒溶血病癥的發病原因和IgG抗體有直接關系，同樣對于部分輸血性溶血病的發病原因也給出了解釋[2]。

而在上個世紀末，國外醫學研究者提出了一種全新的檢測方式，被命名為微柱凝膠法，至此Coombs檢驗法便被取代，微柱凝膠法則逐漸成為了部分國家血液配型和溶血病檢測中的常規方式[3]。該方法主要是將凝膠分子的篩查技術與傳統的抗原-抗體凝集反應向結合，將凝集反應的環境轉移至微柱凝膠介質當中，在該介質下仍可以用肉眼直接對凝集情況進行觀察。同時微柱凝膠法在實際應用中也不需要使用傳統檢驗技術中的“三洗”步驟，血樣的孵化時間被縮短至15min，操作步驟和孵化時間的減少避免了不可控因素對檢測結果的影響，而且也降低了操作難度，最重要的是檢測結果可直接用凝膠保存[4]。因此該技術能夠被更廣泛地應用在新生兒溶血病的檢測當中，且敏感性更高，給醫療工作者的數據更加準確，可更好地保障新生兒的生命健康。

總之，孕婦血清IgG抗體效價參考值以微柱凝膠法檢測效果較佳，正常參考值可定位低于256，對臨床預防、治療新生兒溶血病有重要的參考價值。