重癥急性胰腺炎患者外周血Th22細胞水平變化及臨床意義

焦 艷 張永輝

急性胰腺炎(AP)是臨床常見的急腹癥，有研究報道顯示，有15%～20%的AP患者可進展為重癥急性胰腺炎(SAP)，進一步導致多器官功能障礙，病情兇險，病死率極高[1]。隨著基礎與臨床研究的深入，SAP的發病機制及相關臨床診斷已取得了較大進展，但早期診斷率仍較低。因此，明確SAP發病機制，針對SAP病情的準確評估與治療，是提高該病治療效果及預后的關鍵。近年來，已有研究表明，SAP的發生與機體免疫系統介導的炎性反應的激活密切相關[2,3]，SAP的免疫防治作為重要的治療手段而備受關注。輔助型T細胞是免疫炎性反應的重要組成部分，在炎癥性疾病的發生、發展過程中扮演著重要的作用[4,5]。其中，Th22細胞作為重要的亞群之一，其特異性的分泌促炎細胞因子IL-22，可激活下游炎性通路，放大炎性反應[6]。然而，在SAP患者體內外周血Th22細胞與疾病發生、發展的相關性如何，目前尚未闡明。本研究通過觀察SAP患者外周血Th22細胞及相關細胞因子水平，探討外周血Th22細胞對SAP的臨床診斷價值。

資料與方法

1.研究對象:選取2015年1月～2018年12月于筆者醫院就診住院的SAP患者100例作為觀察組，其中男性55例，女性45例，患者年齡34～78歲，中位年齡54.5歲。致病原因：膽囊及膽管結石(62例)、暴飲暴食及酒精性(14例)、高脂血癥(8例)、藥物性(5例)、其他(11例)，所有患者均符合SAP診斷與治療指南[7]。排除標準：合并惡性腫瘤、全身嚴重感染的患者；合并嚴重肝、腎功能不全的患者；存在其他自身免疫性疾病和免疫缺陷的患者；近半年使用免疫抑制劑的患者。同時選取同期100例普通輕型AP患者為對照組，所有對照組患者均滿足AP診斷及治療指南，同時需排除符合SAP診斷的患者。記錄患者一般臨床資料如年齡、性別、基礎疾病等，同時記錄患者入院12h的修正CT嚴重指數評分(MCTSI)、Ranson評分及APACHEⅡ評分。各組間在性別、年齡、致病原因、基礎疾病等方面比較差異無統計學意義(P>0.05)。本研究獲得了陸軍軍醫大學第一附屬醫院倫理學委員會的批準并征得了患者家屬書面知情同意。

2.主要設備及試劑：(1)主要設備：流式細胞分析儀(美國BD公司)；酶標儀(美國Emax公司)。(2)主要試劑：人淋巴細胞分離液、RPMI 1640細胞培養液、佛波酯、離子霉素、莫能菌素、細胞固定液及細胞破膜劑(美國Sigma公司)；鼠抗人CD4單抗及鼠抗人IL-22單抗(美國eBioscience公司)；人血清IL-22和IL-1β酶聯免疫吸附(ELISA)試劑盒(中國博士德公司)；AMY、內毒素的 ELISA試劑盒(中國南京建成生物公司)。

3.流式細胞術檢測外周血Th22細胞水平：分別抽取兩組患者清晨空腹靜脈血3ml，經肝素抗凝后，加入淋巴細胞分離液，震蕩混勻，經離心后提取單核細胞。取6孔細胞培養板，將上述提取的單核細胞接種于該培養板，同時加入等體積的RPMI-1640培養基。隨后加入相關抗菌素(50μl佛波酯，16μl離子霉素及16μl莫能菌素)后，吹打混勻，孵育箱孵育6h。加入抗人CD4單抗10μl，吹打混勻后，室溫避光孵育1h，隨后加入100μl細胞固定液，經離心后，加入100μl破膜液及5μl IL-22單抗。混勻后加入染色固定液200μl，最后經流式細胞儀檢測Th22細胞水平。

4.外周血相關因子及炎性指標的檢測:取兩組患者清晨空腹靜脈血3ml，離心后收集上清，采用ELISA法測定各組間外周血IL-1β、IL-22、AMY及內毒素水平，具體操作依據試劑盒說明書進行。

結 果

1.外周血Th22細胞及相關炎性指標比較:與對照組比較，觀察組患者外周血Th22細胞、IL-22、IL-1β、AMY及內毒素水平顯著升高，差異有統計學意義(P>0.05)，詳見表1及圖1。

表1 兩組患者外周血Th22細胞及相關炎性指標水平比較

圖1 外周血 Th22細胞的流式細胞分析圖A.對照組；B.觀察組

2.病情嚴重程度評分比較：與對照組比較，觀察組病情嚴重程度評分(MCTSI評分、Ranson評分及APACHEⅡ評分)均顯著升高(P<0.05)。

表2 兩組患者病情嚴重程度評分比較(分，

3.相關性分析:SAP患者外周血Th22細胞與IL-22、IL-1β、AMY及內毒素水平呈顯著正相關(r=0.930，P=0.000；r=0.825，P=0.000；r=0.782，P=0.007；r=0.803，P=0.002；r=0.680，P=0.012)；同時與病情嚴重程度評分(MCTSI評分、Ranson評分及APACHEⅡ評分)呈顯著正相關(r=0.820，P=0.000；r=0.830，P=0.000；r=0.747，P=0.009)。

4.外周血Th22細胞水平對SAP患者早期診斷價值的ROC曲線分析:通過以外周血Th22細胞水平來評估SAP患者早期診斷價值，繪制ROC曲線。外周血Th22細胞水平的曲線下面積(AUC)為0.908(95% CI: 0.839～0.976)，其最佳工作點(OOP)分別為3.08，提示按此最佳工作點對SAP患者進行早期診斷預測，其敏感度和特異性分別為87.88%和80.00%，見圖2。

圖2 外周血Th22細胞對SAP患者早期診斷價值的ROC曲線分析

討 論

近年來，SAP的發生率及病死率均呈上升趨勢，雖然相關基礎與臨床研究對SAP的發病機制及診斷、治療取得了一定進展，但病死率仍居高不下[8]。主要原因為胰酶激活，導致機體炎性因子過度釋放，常并發多器官功能障礙，造成病情進行性惡化[9]。相關研究顯示，早期診斷SAP，可有效的減少并發癥及患者病死率[10]。SAP患者機體炎性反應進行性放大的具體機制尚不完全清楚，但隨著近年來炎癥免疫研究的進展，輔助型T細胞介導的炎性反應在多種自身免疫及炎性疾病中的作用，越來越受到關注[11,12]。特別是以Th22細胞為代表的新型輔助型T細胞亞群，通常情況下，機體Th22細胞處于抑制狀態，當受促炎細胞因子如IL-6、TNF-α的刺激作用下，可由CD4+T淋巴細胞轉化而來，分泌IL-22，隨后激活下游炎性通路，產生炎性級聯反應[13,14]。相關研究已顯示，外周血Th22細胞參與了炎性疾病的發生、發展過程[15,16]。SAP作為炎性疾病之一，外周血Th22細胞可能在SAP的早期診斷及病情變化的評估過程中，具有重要的臨床價值。

相關研究顯示，急性胰腺損傷時，體內炎性通路可顯著激活，輔助型T細胞如Th17細胞可顯著激活，進一步導致下游IL-17及TNF-α水平顯著升高，抑制Th17細胞激活，可顯著降低急性胰腺炎模型大鼠體內炎性反應，減輕胰腺損傷[17,18]。作為一類新型的輔助型T淋巴細胞亞群，外周血Th22細胞是否參與了SAP的發生，同時與病情嚴重程度關系如何，目前尚不清楚。本研究結果顯示，SAP患者外周血Th22細胞及相關下游炎性因子如IL-22、IL-1β等顯著升高，表明SAP患者體內存在持續的炎性狀態，其可能參與并促進了SAP的發展過程。

為進一步分析外周血Th22細胞與SAP體內炎性細胞因子及病情嚴重程度的關系，通過相關性分析顯示，外周血Th22細胞與IL-22、IL-1β、AMY及內毒素水平呈顯著正相關，提示外周血Th22細胞的激活，可進一步導致相關炎性細胞因子表達增加；同時SAP患者體內外周血Th22細胞水平還與病情嚴重程度評分(MCTSI評分、Ranson評分及APACHEⅡ評分)呈顯著正相關，提示外周血Th22細胞可一定程度反映SAP患者病情嚴重程度，可能對SAP患者病情嚴重程度的評估，具有一定的臨床運用價值。通過ROC曲線分析外周血Th22細胞水平對SAP患者早期診斷的評估價值，其結果顯示，ROC曲線下面積較大，預測價值較高。外周血Th22細胞是炎性反應發起及進一步放大的重要環節，有研究顯示，通過有效的抑制體內Th22細胞的激活，可顯著降低炎性反應的級聯放大，改善炎癥性疾病的預后[19,20]。因此，外周血Th22細胞水平不僅可作為評估SAP患者早期診斷的可靠指標，還可能成為其治療的有效靶標。

綜上所述，外周血Th22細胞參與了SAP患者的炎性反應，但有關Th22細胞在SAP發生、發展中的調節機制還有待于進一步研究。