肺癌診斷中血漿中多基因聯合甲基化檢測的價值

黨紅　楊金宇　郭炫

【摘 要】 目的：探討肺癌診斷中血漿中多基因聯合甲基化檢測的價值。方法：選取80例肺癌患者的資料作為研究組，選取80例健康體檢者為對照組，比較兩組多基因檢測及甲基化狀態。結果：肺癌組織的CDH13、RASSF1A、RUN3基因甲基化率高于癌旁組織甲基化率（P<0.05）。研究組患者的CpG島甲基化表型陽性率高于對照組（P<0.05）。結論：血漿中多基因聯合甲基化檢測在肺癌早期診斷中有重要意義。

【關鍵詞】 多基因;甲基化;肺癌;聯合檢測;臨床價值

肺癌是臨床常見的惡性腫瘤，有著較高發病率及死亡率，肺癌患者來院就診時，大多是中晚期;若取患者的肺癌組織標本，會對患者的身體造成一定的影響[1]。因此，臨床急需一種有效且無創的檢測手段，提高對于該疾病的診斷率。有臨床研究表明：肺癌發生與抑癌基因啟動子區CpG島甲基化相關。因此，本文為了分析血漿中多基因聯合甲基化檢測在肺癌診斷中的價值，選取本院收治的80例肺癌患者進行分析，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

80例肺癌患者來源于本院2015年3月至2018年3月收治，男57例，女23例;年齡40～86歲，平均年齡（58.42±2.45）歲;根據WHO肺癌組織學分類，鱗癌45例，腺癌20例，小細胞癌15例。選取同期來院體檢的80例健康者為對照組，男56例，女24例;年齡40～84歲，平均年齡（59.23±1.56）歲。兩組性別、年齡無顯著差異（P>0.05），可比較。

1.2 方法

1）采集血液標本。兩組受試者均于治療前清晨空腹抽取2mL靜脈血，EDTA抗凝，按照500r/min離心血清10min，獲得無血細胞成分的血漿，置于-80℃溫度下待測，嚴格按照試劑盒說明書來操作。2）血漿DNA的提取。采用QIAamp DNA Mini Kit提取，嚴格按照說明操作。采用Epi Tect Whole Bisulfitome Kit 擴增試劑盒對修飾過后的血漿DNA進行基因組擴增。3）甲基化特異性PCR及電泳檢測。采用EZ DNA MethylationGold Kit對提取的血漿DNA進行亞硫酸氫鈉修飾，將DNA序列中未甲基化的胞嘧啶（C）轉變為尿嘧啶（U），以20μL AE緩沖液洗脫DNA，置于-20℃保存。在重亞硫酸鹽測序下設計外側引物，在甲基化特異性PCR條件下設計甲基化（M）與非甲基化（U）引物。4）判斷甲基化結果。甲基化：第一輪PCR出現條帶，第二輪PCR甲基化引物出現條帶，非甲基化引物未出現條帶，甲基化引物、非甲基化引物PCR均出現條帶，可判斷甲基化。未甲基化：甲基化引物未出現條帶，非甲基化引物出現條帶。

2 結果

2.1 引物序列、產物大小及退火溫度

以CDH13、RASSF1A、RUN3基因為例，其引物序列、產物大小及退火溫度詳細見下表1所示。

2.2 肺癌及癌旁組織中的基因甲基化情況

肺癌組織的CDH13、RASSF1A、RUN3基因甲基化率明顯高于癌旁組織甲基化率（P<0.05）。如下表2所示。

2.3 肺癌與正常健康體檢者的CpG島甲基化表型比較

肺癌患者的CpG島甲基化表型陽性率高于正常健康體檢者（P<0.05）。如下表3所示。

3 討論

肺癌的發生及發展是由多種因素促進的，通過原癌基因高表達、抑癌基因的低表達兩大途徑可產生癌癥。臨床多種癌癥疾病中可檢測到CDH13、RUNX3、DLEC1、RASSF1A、SEPT9基因高甲基化，但以上基因均未有在同一種癌癥標本中檢測。經聯合檢測多種基因可提高標志物的特異度及靈敏度[2]。在本次研究中，通過檢測CDH13、RASSF1A、RUN3基因聯合甲基化，可提高肺癌診斷價值。CDH13是一種編碼黏附分子，在細胞侵襲及轉移中有著重要作用。當CDH13表達下調時，可降低癌細胞粘附力，促進腫瘤生長及轉移。RASSF1A是臨床疾病較常見的抑癌基因，經阻斷細胞周期蛋白D1的積累，使得蛋白激酶失活，組織細胞分裂周期的進展，從而調控細胞周期。RUN3蛋白是TGF-β信號通路的重要參與者，其水平下調可影響該細胞信號通路的失調，促進腫瘤細胞發展[3]。

綜上所述，血漿中多基因檢測聯合甲基化檢測可提高肺癌診斷率。

參考文獻

[1] 駱江龍，李鯤，馮旭.p16、DAPK和APC基因甲基化在肺癌早期診斷中的價值[J].微創醫學，2018，（01）：12-16.

[2] 朱宇敏，李堅，俞立超，等.血漿APC和DCC基因啟動子甲基化測定在肺癌早期診斷中的應用[J].江蘇大學學報（醫學版），2015，25（01）：62-67.

[3] 解楨，李天月，劉洪建，等.聯合RASSF1A與FHIT基因甲基化檢測在非小細胞肺癌診斷中的應用[J].濱州醫學院學報，2017，40（04）：249-251.