不同生長年限黃連不同部位中生物堿類次生代謝產物積累規律研究

【摘 ?要】本研究通過測定不同生長年限（一年生、二年生、三年生、四年生）黃連不同部位（葉、莖、根、根莖）中生物堿類次生代謝產物（非洲防己堿、藥根堿 、表小檗堿、黃連堿、巴馬汀、小檗堿）的相對含量，揭示藥材黃連的主要藥用成分在不同部位中隨時間的變化規律，研究發現：在所有年生黃連的所有部位中，均是小檗堿含量最高，且葉、莖、根、根莖中小檗堿含量均呈遞增趨勢;6種主要生物堿中，除了藥根堿，均是在四年生黃連根莖中含量達到最高，藥根堿在三年生根中的含量最高;四年生根莖（黃連藥用部位）中，生物堿含量由高到低依次為小檗堿、黃連堿、巴馬汀、表小檗堿、非洲防己堿，藥根堿。此研究對黃連中生物堿類資源的開發和黃連的科學化種植提供了一定的指導意義。

【關鍵詞】黃連;不同生長年限;不同部位;生物堿;相對含量

【中圖分類號】R969.1 ? ? ?【文獻標識碼】A ? ? ?【文章編號】1004-7484（2019）03-0207-01

黃連為毛茛科黃連屬多年生草本藥用植物，始載于《神農本草經》，位列上品，有清熱燥濕，瀉火解毒之功效，主含小檗堿，黃連堿，巴馬汀等異喹啉類生物堿，藥理作用有抗菌，抗病毒，抗潰瘍，降血糖，降血脂等。黃連栽培周期較長，一般5-9年采收，傳統采收時間為秋季，也有春季采收，黃連僅少量根莖藥用，其余部分均廢棄，造成了藥材資源的浪費。本研究通過測定不同生長年限黃連不同部位中生物堿類次生代謝產物的含量[1-2]，揭示中藥材黃連藥用成分的積累規律，為中藥材規范化種植和采收提供科學依據和指導。

1 材料與方法

1.1材料

供試材料為一到四年生黃連新鮮藥材，種植于陜西省鎮坪縣，經鑒定為 Coptic chinensis。

1.2 儀器與試藥

儀器： SHIMADZU公司高效液相色譜儀（日本·島津）;SPD-20A檢測器;Sartorius BSA124S電子天平（Sartorius公司，中國）;Sartorius BT125D電子天平（Sartorius 公司，中國）;KH-500DB超聲儀（昆山禾木超聲儀器有限公司，中國）;CT-6021A 筆式pH計（深圳市柯迪達電子有限公司，中國）

試藥：乙腈（色譜級，Tedia，USA，LOT16045020）;純凈水（娃哈哈集團有限公司;磷酸（AR 南京化學試劑有限公司，中國）;甲醇（色譜級，江蘇漢邦試劑有限公司，中國）;磷酸二氫鉀（AR，隴西化工股份有限公司，中國）;十二烷基硫酸鈉（AR，上海阿拉丁生化科技股份有限公司，中國）

1.3方法

1.3.1提取條件

將不同年生的新鮮黃連藥材洗凈，烘干至恒重，分別取不同年生黃連藥材的不同部位（1～3年生取根、莖、葉，4年生取根、莖、葉、根莖）研磨至粉末狀，取藥材粉末約0.1g （過60目篩），精密稱定，置于200ml錐形瓶中，精密加入125 ml甲醇-鹽酸 （ 100：1，v/v ）的混合溶液，密塞，稱定質量，超聲提取30 min。提取結束后放冷，再次稱定質量，用甲醇-鹽酸（100：1，v/v）的混合溶液補足失重，搖勻，經0.45 μm微孔濾膜過濾，取續濾液作為供試品溶液，精密吸取10 μl注入液相色譜儀，測定峰面積[3]。

1.3.2色譜條件

流動相：以乙腈-0.05 mol/L 磷酸二氫鉀溶液（40：60）（每1L中加入十二烷基硫酸鈉1g，再以磷酸調節pH值為4.0）;色譜柱：Agilent ZORBAX SB C18（4.6×250 mm，5.0 μm）;檢測器：VWD，345 nm;柱溫：25℃;流速：1.0 ml/min;進樣體積：10 μl 。

2 結果與分析

不同年限黃連不同部位生物堿類次生代謝產物相對含量 如圖1所示，從不同年限的角度分析，得出：（1）所有年生黃連的所有部位中，均是小檗堿含量最高。而且，除了三年生，葉、莖、根、根莖中小檗堿含量均呈遞增趨勢;（2）6種主要生物堿中，除了藥根堿，均是在四年生根莖中含量最高，藥根堿在三年生根中的含量最高。（3）四年生根莖（黃連藥用部位）中，生物堿含量由高到低依次為小檗堿、黃連堿、巴馬汀、表小檗堿、非洲防己堿，藥根堿。

從不同部位的角度分析，得出：（1）黃連莖中各生物堿含量隨年份變化不是很明顯;

（2）黃連葉中小檗堿前三年遞增，第四年下降。藥根堿正好相反，前三年遞減，第四年上升。黃連葉中均未檢測出表小檗堿，其余生物堿，除了在四年生葉中含量增加外，變化不大。（3）從黃連根中生物堿總量可以看出，明顯隨時間遞增。其中，表小檗堿、黃連堿、小檗堿隨時間含量遞增，而非洲防己堿、藥根堿、巴馬汀的含量卻在三年生根中最高。

從不同部位的角度分析，得出：非洲防己堿四年生根莖中含量顯著高于其它;藥根堿在根中含量均高于其他部位，三年生根中達到最大值;表小檗堿在葉中均不表達，在莖中隨時間變化不明顯，在根中隨時間遞增，四年生根中含量最大。黃連堿在葉中含量均很低。在莖中變化不大，四年生莖中含量最低。在根中遞增。四年生根莖中達到極值;巴馬汀在四年生根莖中含量顯著高于其他。在葉中遞增。莖中基本遞增;小檗堿在四年生根莖中含量顯著高于其他，在根中遞增，莖中基本遞增，葉中在三年生達到最大值。

3 討論

2015版中國藥典第一部對黃連中小檗堿、表小檗堿、黃連堿、巴馬汀等4種生物堿的含量作出以下規定：以干燥品計算，以鹽酸小檗堿計，含小檗堿不得少于5.5 %，表小檗堿不得少于0.8 %，黃連堿不得少于1.6 %，巴馬汀不得少于1.5 %。藥材黃連的應用非常廣泛，而黃連對生長環境要求非常嚴格，性喜陰寒而多生長于高寒、陰蔽、濕潤的山區，生長極為緩慢，常需要5-7年才能采收。黃連栽培成本比較高，如果能將黃連生產副產物（包括黃連葉、黃連葉柄、黃連須等）也充分利用，不僅更有效地利用了資源，也可以降低生產成本。近年研究證明，黃連須、葉、莖均含有不同程度的黃連生物堿，黃連須根含3%的生物堿，現代藥理研究表明，黃連主要有效成分生物堿類不僅具有抗菌、抗病毒的功效，還具有降血糖、降血脂、抗血小板[4]。在黃連收獲時，黃連地需要“亮棚”（去掉遮蔭棚），強光直接照射到植株上，黃連植株中所含的營養成分等將向根蓮轉移[5]。黃連葉、莖和須根中生物堿在什么時候如何分布，以及眾多產區中哪一產區的黃連副產物中生物堿含量高，這些都值得我們去深入研究。

參考文獻

[1]耿志鵬， 鄭海杰， 張藝， 羅維早， 瞿顯友.RP-HPLC 測定不 同產地黃連中 6 種生物堿的含量[J].中國中藥雜志， 2010，35（19）：2576-2580. Sato

[2]Yan D， Jin C， Xiao XH，etal. Antimicrobial properties of berberines alkaloids in Coptis chinensis Franch by microcalorimetry[J].Journal of Biochemical and Biophysical Methods，2008，70（6）： 845-849.

[3]于玥，張考飛，李軍，等. 保健食品中添加小檗堿的檢測方法研究 [J]. 藥物分析雜志，2013，36（9）：1551-1554.

[4]Sato FK， Nobuhiko D， Morishige T， et al Molecular characterization of isoquinoline alkaloidbiosynthesis in Coptis japonica cells[ J] . J Biol Chem ， 2002， 277：830-835.

[5]劉丹，吳田澤，孟祥霄，崔寧，汪波，劉霞.無公害黃連栽培技術體系探討[J].中國現代中藥，2018，20（11）：1396-1403+1410.

作者簡介：

劉卉，女，1979-07，漢，江蘇海安，職稱：主管中藥師，職位：藥劑科副主任，研究方向：中藥資源的開發與利用。