UPLC-MS/MS法測定蜂蜜中4種喹諾酮類藥物殘留

譚順中 程燕 譚美齡

摘 要：本研究旨在建立UPLC-MS/MS法測定蜂蜜中4種喹諾酮類藥物殘留。方法：蜂蜜樣品用80%甲醇水溶解，經Prime HLP固相萃取柱凈化，超高效液相電噴霧串聯四級桿質譜檢測，外標法定量。結果：本方法在10、25、50 ng/mL添加水平的回收率為為72.48%～103.22%，RSD均不大于10.00%。結論：在最佳色譜條件下，本研究建立的UPLC-MS/MS法具有較好的線性、回收率和精密度，可用于測定蜂蜜中4種喹諾酮類藥物殘留。

關鍵詞：Prime HLP;喹諾酮類;UPLC-MS/MS

蜂蜜是蜜蜂從開花植物的花中采得的花蜜在蜂巢中經過充分釀造而成的天然甜物質，具有豐富的營養價值和較高的藥用價值。喹諾酮類藥物為人工合成的一類廣譜抗菌藥，具有抗菌譜廣、價格低、無交叉耐藥性等優點，不僅在臨床有著極其廣泛的應用，還被廣泛應用在獸藥領域。由于喹諾酮類藥物在預防和治療過程中的不規范使用，許多動物源性食品常存在該類藥物的殘留[1]。我國農業部為保障動物產品質量安全和公共衛生安全也于2015年決定在食品動物中停止使用洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星4種原料藥的各種鹽、酯及其各種制劑。

本研究擬通過建立UPLC-MS/MS法對50批蜂蜜中洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星4種喹諾酮類藥物殘留進行測定，對我國在食品動物中停止使用這4種藥物以來，蜂蜜中這四種藥物的殘留情況進行小范圍的調查研究。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Thermo TSQ Quantum Access Max超高效液相色譜質譜聯用儀、IKA? MS 3 digital渦旋振蕩器，Biotage Tulbovap ? LV 氮吹濃縮儀。

洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星混合標準溶液（均為100 μg/mL），諾氟沙星-D5對照品（10μg/mL）;甲醇（色譜純）、乙酸銨（優級純）、超純水。

1.2 方法

1.2.1 液相色譜和質譜條件

Waters BEH C18柱（100 mm×2.1 mm，1.7μm）。流動相：A.5 mmol/L乙酸銨溶液（含0.1%甲酸水溶液），B.甲醇。梯度洗脫：0～2.0 min，流動相A為90%并保持，2.0～3.5 min，流動相A從90%線性變至10%，并保持至4.5 min。6.5～6.6 min，流動相B從90%線性回至10%，并保持至10 min。流速：0.20 mL/min。進樣量：5 μL。柱溫：40 ℃。質譜條件見表1。

1.2.2 樣品采樣

蜂蜜樣品來至重慶市3個區縣（萬州、云陽、開州），采樣環節主要為超市、小賣店、農貿市場等流通環節以及蜜蜂養殖戶等生產環節，主要品種為洋槐蜜、油菜花、椴樹、棗花蜜等10種蜂蜜，共計50份樣品。

1.2.3 工作曲線的繪制

準確移取適量的喹諾酮混合標準溶液，用甲醇稀釋并配制成標準工作溶液（1μg/mL）。用空白樣品基質溶液配制濃度為1.0、5.0、10、20、50 ng/mL 的基質工作曲線，其中諾氟沙星D5內標濃度為20 ng/mL，均以內標法定量。

1.2.4 樣品處理

稱取2.0 g蜂蜜樣品于50 mL離心管中，加入 200 μL 1.0 μg/mL的內標溶液（諾氟沙星D5），加入10 mL 80%甲醇水溶解，振蕩混勻，過prime HLB柱凈化，流出液在40 ℃氮吹濃縮至近干。用1 mL 初始流動相復溶，渦旋過0.22 μm濾膜，待測。

2 結果與討論

2.1 固相萃取柱的選擇

查閱相關文獻，本研究選擇了MCX

陽離子交換固相萃取小柱、HLB、PRiME HLB三種固相萃取柱進行凈化，通過加標回收比較[2]。從回收率來看，HLB固相萃取柱和PRiME HLB萃取柱的回收率差不多，而MCX陽離子交換柱的回收率偏低。從過柱過程來看，HLB固相萃取柱和MCX陽離子交換柱均存在易堵塞凈化柱，速度慢，需經過活化-淋洗-洗脫等步驟，耗時較長，重現性不理想等問題。而Oasis PRiME HLB 固相小柱是在Oasis HLB 固相小柱技術基礎上開發的新一代反相固相萃取柱，屬于過濾性除去雜質固相小柱，可以有效地吸附樣品中蛋白質和磷脂類物質，較以往HLB固相萃取柱具有更簡單、更快速優勢[3]。

因此本研究前處理采用PRiME HLB一步法提取和凈化蜂蜜樣品，前處理簡單，并且基質干擾較小、靈敏度較高，能得到較為滿意的效果。

2.2 方法學考察

2.2.1 線性范圍、定量限和檢出限

以峰面積對對照品濃度（ng/mL）進行回歸分析，在濃度范圍為

1.0 ng/mL～50 ng/mL，4種化合物曲線線性良好，相關系數為0.996～0.999。按S/N=3計算檢出限，檢出限均為：

1.0 μg/kg。

2.2.2 回收率和精密度

在經測定不含洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星4種喹諾酮類藥

物陰性樣品中進行回收率和精密度試驗。在陰性樣品中添加低中高3個水

平的標準溶液，按本方法進行實驗，回收率范圍為72.48%～103.22%，RSD均不大于10.0%。

2.3 實際樣品的測定

應用本方法對50批蜂蜜進行了分析測定，樣品種類洋槐蜜、油菜花、椴樹、棗花蜜等10種蜂蜜。50批樣品中均未檢出洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星4種喹諾酮類藥物[4]。

3 結論

本文建立了UPLC-MS/MS法測定蜂蜜中4種喹諾酮類藥物殘留，蜂蜜樣品用80%甲醇水溶解，經PrimeHLB固相萃取柱凈化，超高效液相電噴霧串聯四級桿質譜檢測，內標法定量。經方法學驗證，該方法前處理簡單，且基質干擾較小、靈敏度較高，能得到較為滿意的結果。50批蜂蜜樣品測定結果表明洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星4種喹諾酮類藥物在本次抽檢的區域控制情況良好。

參考文獻

[1]闞廣磊，王小娟，魏洪濤，等.液相色譜-串聯質譜法檢測蜂蜜中15 種喹諾酮類和17 種磺胺類藥物殘留[J].食品安全質量檢測學報，2017，9（8）：3571-3578.

[2]張婧，潘娟，嚴鳳，等.基于PRiME HLB 前處理技術的雞蛋中四環素類藥物的快速篩選方法研究[J].中國獸藥雜志，2018，52（3）：52-57.

[3]李磊，周貽兵，張權，等.QuEChERS 凈化超高效液相色譜-串聯質譜法快速測定雞蛋中13 種喹諾酮類抗生素[J].現代預防醫學，2018，45（24）.

[4]候美玲，周純潔，黃思瑜，等.固相萃取-超高效液相色譜/串聯質譜同時檢測雞蛋中的10 種喹諾酮類藥物殘留[J].分析科學學報，2018，34（6）：795-800.

作者簡介：譚順中（1990—），男，漢族，重慶人，本科，工程師。研究方向：食品與藥品檢測與分析。