關(guān)于血同型半胱氨酸測(cè)定方法與意義的概述

耿劍

【摘 要】本文概述了血同型半胱氨酸的幾種測(cè)定方法，并闡述了各自的原理、優(yōu)缺點(diǎn)及臨床應(yīng)用情況。同時(shí)，還介紹了Hcy的臨床意義，Hcy水平與多種疾病存在密切關(guān)系，因此對(duì)于Hcy的精準(zhǔn)檢測(cè)有助于相關(guān)疾病的診斷和治療。

【關(guān)鍵詞】Hcy;檢測(cè);臨床意義;危險(xiǎn)性

【中圖分類(lèi)號(hào)】R446 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1002-8714（2019）11-0293-01

血同型半胱氨酸（Homocysteine，簡(jiǎn)稱(chēng)Hcy）。血同型半胱氨酸是蛋氨酸和半胱氨酸代謝過(guò)程中產(chǎn)生的一種中間產(chǎn)物，其實(shí)質(zhì)是一種含硫氨基酸。Hcy本身并不參與蛋白質(zhì)的合成，但在蛋氨酸代謝中間充當(dāng)著重要角色。在血液中，部分Hcy是以同型半胱氨酸-半胱氨酸二硫化物的形式存在，少量以還原型同型半胱氨酸存在，大多數(shù)以二硫鍵與清蛋白結(jié)合的形式存在。Hcy有三種主要的代謝途徑，（1）蛋氨酸循環(huán)，Hcy再甲基化后重新形成蛋氨酸;（2）Hcy在細(xì)胞內(nèi)形成后排到血液中;（3）Hcy參與循環(huán)，與絲氨酸發(fā)生反應(yīng)生成胱硫醚，進(jìn)而生成胱氨酸和α-酮丁酸。Hcy自上世紀(jì)在尿液中首次被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)多種先無(wú)性代謝缺陷疾病與Hcy密切關(guān)，例如胱硫醚-β-合成酶缺乏能夠造成高性半胱氨酸尿癥，Hcy代謝異常可導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化、血栓、冠心病、靜脈栓塞、老年癡呆等疾病。因此準(zhǔn)確、高效地測(cè)定同型半胱氨酸的濃度，具有十分重要的臨床意義。

1 Hcy測(cè)定方法

Hcy的測(cè)定的主要方法有以下幾種：

1.1高效液相色譜法

高效液相色譜法是比較經(jīng)典的測(cè)定方法，該方法運(yùn)用的是柱前衍生化熒光檢測(cè)技術(shù)。其基本原理如下：（1）在還原劑的作用下，將血樣中各種形式的Hcy均轉(zhuǎn)換成還原形式;（2）用熒光試劑將其衍生程Hcy-熒光物質(zhì)復(fù)合物;（3）對(duì)衍生后的樣品進(jìn)行色譜分析。因色譜固定相在不同物質(zhì)上的吸附能力具有差異性，故流動(dòng)相將其洗脫下來(lái)的次序也各不相同。根據(jù)這一原理將樣品中的不同物質(zhì)進(jìn)行分離，再用熒光檢測(cè)器監(jiān)測(cè)洗脫下Hcy-熒光物質(zhì)復(fù)合物的熒光強(qiáng)度，并與標(biāo)準(zhǔn)品/內(nèi)標(biāo)的比值進(jìn)行比較與計(jì)算，就能夠測(cè)定血液中Hcy的水平。隨著檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展，因高效液相色譜法具有操作復(fù)雜、時(shí)間長(zhǎng)、穩(wěn)定性差等缺點(diǎn)，目前該方法已逐漸被取代。

1.2酶分析法

酶免疫分析法的基本原理：（1）將Hcy轉(zhuǎn)化為游離型;（2）在胱硫醚-β-合成酶（CBS）催化作用下，與絲氨酸反應(yīng)生成L-胱硫醚;（3）L-胱硫醚在胱硫醚-β-分解酶（CBL）的催化下又生成同型半胱氨酸、丙酮酸、NH3;用乳酸脫氫酶LDH和NADH檢測(cè)生成的丙酮酸，因NADH轉(zhuǎn)化成NAD+的速率與樣品中Hcy的含量成正比，故可以檢測(cè)到Hcy的水平。該方法具有操作方便、重復(fù)性好、數(shù)據(jù)可靠的優(yōu)點(diǎn)，因此該方法也是臨床上測(cè)定Hcy水平的常用方法。

1.3毛細(xì)管電泳法

毛細(xì)管電泳法的基本原理與高效液相色譜法基本類(lèi)似：（1）在還原劑的作用下，將血樣中各種形式的Hcy均轉(zhuǎn)換成還原形式;（2）用熒光試劑將其衍生程Hcy-熒光物質(zhì)復(fù)合物;（3）對(duì)衍生后的樣品進(jìn)行電泳分析。因不同物質(zhì)所帶電荷不同，其等電點(diǎn)也不相同，故在電場(chǎng)中的遷移速度也各不相同，將樣品置于10kV的高壓電場(chǎng)中，就能夠?qū)cy進(jìn)行分離，再用熒光檢測(cè)器監(jiān)測(cè)洗脫下Hcy-熒光物質(zhì)復(fù)合物的熒光強(qiáng)度，并與標(biāo)準(zhǔn)品/內(nèi)標(biāo)的比值進(jìn)行比較與計(jì)算，就能夠測(cè)定血液中Hcy的水平。該方法因具有操作復(fù)雜、耗時(shí)長(zhǎng)、數(shù)據(jù)不穩(wěn)定等缺點(diǎn)，僅應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室研究。

1.4離子色譜法

離子色譜法的基本原理也與高效液相色譜法基本一致，其不同點(diǎn)在于固定相采用的是離子交換物質(zhì)，根據(jù)其對(duì)不同離子的吸附能力的差異，從而將Hcy與其他物質(zhì)進(jìn)行分離測(cè)定。該方法在臨床上使用較少，主要應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室研究。

1.5全自動(dòng)熒光偏振免疫檢測(cè)法

全自動(dòng)熒光偏振免疫檢測(cè)法的基本原理是：（1）用還原劑將Hcy還原出來(lái);（2）用特異性S腺苷Hcy合成酶將Hcy催化成S腺苷Hcy類(lèi)似物;（3）對(duì)特異性的單克隆抗體進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，引起示蹤物偏光性的改變，進(jìn)而檢測(cè)出Hcy的濃度。該方法具有靈敏度高，速度快的特點(diǎn)，每小時(shí)可檢測(cè)20個(gè)樣本，但其費(fèi)用昂貴，不便普及。

2 Hcy的臨床意義

2.1 Hcy與腦血管疾病的關(guān)系：相關(guān)研究顯示，Hcy水平與腦梗死病發(fā)危險(xiǎn)性存在密切關(guān)系，當(dāng)Hcy濃度大于15umol/L時(shí)，發(fā)生腦梗死的危險(xiǎn)性是正常人的6倍，當(dāng)Hcy濃度大于20umol/L時(shí)，發(fā)生腦梗死的危險(xiǎn)性是正常人的10倍。

2.2 Hcy與動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)系：有研究表明，高Hcy血癥已成為冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素，當(dāng)Hcy濃度小于8umol/L時(shí)，斑塊較小，為0.17-0.76mm，當(dāng)Hcy濃度大于8umol/L時(shí)，斑塊明顯變大，為0.27-1.04mm，因此可以得出Hcy濃度水平與冠狀動(dòng)脈病變程度正相關(guān)。還有研究表明，Hcy能夠損傷血管，Hcy能夠刺激血管成纖維細(xì)胞的增值及活化，Hcy還能誘導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的血管平滑肌細(xì)胞增殖，從造成動(dòng)脈粥樣硬化。

2.3 Hcy與老年性癡呆的關(guān)系：大量相關(guān)資料顯示，Hcy水平的升高，能夠增大患病的危險(xiǎn)性。有研究表明，當(dāng)Hcy濃度大于14umol/L時(shí)，患老年性癡呆的危險(xiǎn)性能夠增加2倍，對(duì)阿爾茨海默癥和血管性癡呆癥患者血漿中Hcy的水平檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，兩組患者的血漿中Hcy的濃度明顯要高于正常人組，因此可以說(shuō)明，Hcy與老年性癡呆疾病有密切關(guān)系。

2.4 Hcy與糖尿病及并發(fā)癥的關(guān)系：國(guó)內(nèi)外大量研究結(jié)果表明，Hcy水平能夠作為2型糖尿病患者大血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。Hcy升高在糖尿病伴腎臟、視網(wǎng)膜及血管并發(fā)癥的患者更為嚴(yán)重，與無(wú)糖尿病但具有相同濃度的Hcy相比，糖尿病患者血漿總Hcy每增加5umol/L時(shí)，在未來(lái)五年的死亡率會(huì)增加三倍。另外，Hcy濃度大于14umol/L時(shí)還能夠?qū)е绿悄虿∥⒀懿l(fā)癥的發(fā)生與進(jìn)展。

2.5 Hcy與其他疾病的關(guān)系：Hcy與很多疾病都有關(guān)系，比如慢性腎功能衰竭患者普遍有高Hcy血癥，其發(fā)生率是正常人的33倍。Hcy還與產(chǎn)后抑郁癥、習(xí)慣性流產(chǎn)、肺血栓栓塞癥等有關(guān)。

3 結(jié)論

同型半胱氨酸作為多種疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素正被大眾廣泛接受，因此對(duì)于同型半胱氨酸檢測(cè)的需求和要求也越來(lái)越高，雖然目前檢測(cè)方法有很多，但是這些方法仍然存在很多弊端，有待進(jìn)一步優(yōu)化，高效穩(wěn)定的測(cè)定方法對(duì)于同型半胱氨酸水平相關(guān)疾病的診斷和質(zhì)量具有重要意義。

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