回顧性分析環介導等溫擴增技術LAMP在肺結核患者痰標本中的應用

盧元全

【摘 ?要】目的 ：探討環介導等溫擴增技術（LAMP）在肺結核患者痰標本中的應用效果。方法 ：選取2018年2月-2018年11月本院接收的50份肺結核且抗結核治療涂片陽性患者痰標本、50份涂片陰性患者痰標本，每份痰標本同時利用LAMP法檢查檢核分枝桿菌復合群核酸、培養羅氏固體（L-J），分別對L-J培養及LAMP法陽性率計算。結果： 50份痰涂片抗酸染色陽性標本中，LAMP檢測陽性50份，L-J培養陽性42份，檢出率分別是100%和84.00%，差異顯著（P<0.05）;50份痰涂片抗酸染色陰性標本中，LAMP法與L-J培養陽性分別有15例和8例，相比于痰涂片陰性標本，LAMP陽性率較L-J培養陽性檢出率更高，差異有統計學意義（P<0.05）。結論： 環介導等溫擴增技術在肺結核痰標本診斷中應用效果顯著，而且該方法具有操作簡單、方便等特點。

【關鍵詞】肺結核;環介導等溫擴增技術（LAMP）;抗酸染色

【中圖分類號】R446.5 ? ? ?【文獻標識碼】A ? ? ? 【文章編號】1672-3783（2019）12-0108-01

結核病是常見慢性傳染病疾病之一，該病主要是因為結核分枝桿菌造成的，是三大傳染疾病之一。據有關資料顯示[1]，2015年全球大約有1049萬新發結核疾病，其中140萬左右死于結核病。早期研究顯示，活動性結核病在結核病傳播控制中具有重要作用。本次實驗針對環介導等溫擴增技術在肺結核患者痰標本中的應用效果進行分析，以下是具體報告。

1 研究資料與方法

1.1 研究資料

選取2018年2月-2018年11月本院接收的50份肺結核且抗結核治療涂片陽性患者痰標本、50份涂片陰性患者痰標本，其中，60例男性，40例女性;年齡18歲-82歲，均值（46.51±3.46）歲。

1.2 方法

恒溫熒光核酸擴增儀，型號LF-160;Loopam核酸快速提取試劑盒、Looamp結核分枝桿菌復合群核酸檢測試劑盒。

方法：

1.2.1 痰結核分枝桿菌鏡檢與涂片

通過直接圖片抗酸染色顯微鏡檢查，根據《中國結核病防治規劃?痰涂片鏡檢標準化操作及質量保證》對痰標本收集，并涂片鏡檢，每例送合格痰標本1份。

1.2.2 L-J結核分枝桿菌培養

取4倍體積的4%NaOH溶于鏡檢，并通過LAMP法對其他合格痰標本檢測，均勻搖晃、震蕩，并放置15分鐘，充分液化痰標本。利用一次性無菌吸管吸取2-3滴，并在2管酸性培養基斜面上、中、下位置滴注，蓋緊蓋子，后將標本置于37℃培養箱中培養，接種4周后，平均7日進行1次觀察。

1.2.3 LAMP法檢測結核分枝桿菌復合群

①樣本前處理：1）在樣本處理會館中分別放置40-60μL痰液及陰性對照;2）翻轉3-5次樣本處理試管，并將其置于恒溫熒光核酸擴增儀中加熱，加熱至90℃，時間為5分鐘;3）完成加熱后，將樣本處理試管取出，放置室溫中保存，時間為2分鐘，顛倒混合3-5次;4）將吸附試劑管蓋子取出，然后將樣本處理試管擰入;5）垂直用力震蕩吸附管10次，水平用力甩動10次。均勻混合，液體以淺黃色或者乳白色呈現出來;6）在注射帽上面環套吸附管，倒置吸附管，在吸附管中推注注射帽，旋緊固定;②樣本及試劑溶液混合：1）在加熱管架上方放置注射帽頂端帽環，使拍管架與眼睛呈水平方向，在反應管內垂直放入純化裝置尖端，開始加樣;2）對純化裝置吸附管持續擠壓，滴加反應液到兩刻度見，將反應蓋蓋子蓋緊，并標記;3）在所有樣本中均勻加入反應管后，將陽性對照管打開，取出1根毛細管，上端捏緊后，見陽性對照插入其中，吸取液體緩慢放松，一直到刻度線，然后將其擰入到LAMP反應管中，后將毛細血管丟棄，然后將反應管該蓋子、陽性對照管蓋好;4）緊握反應管底端，蓋子上甩入全部反應液，倒置2分鐘，充分混合反應液與干燥的LAMP試劑;③LAMP擴增反應：1）在反應液與待試劑均勻混合后，上下翻轉反應管5次，用力甩反應液至反應管底部，然后在恒溫熒光核算擴增儀前端反應模塊中放置反應管，將蓋子蓋好;2）在反應模塊溫度高達67℃后，打開右側計時開關，然后開始進行LAMP反應，時間設置為40分鐘;④檢測熒光目視：結束LAMP擴增反應后，將反應管取出，并置于恒溫熒光核酸擴增儀熒光檢測模塊，將熒光開關打開觀察。

1.3 觀察指標

分析痰液陽性標本中L-J培養分枝桿菌與LAMP法檢出結果、痰液標本中L-J培養與LAMP法陽性檢出率。

1.4 統計學方法

采取統計學軟件SPSS19.0對本次實驗數據準確分析，計數資料的表示方法與檢驗值分別是率（%）和x2，兩組對比，差異顯著（P<0.05）。

2 結果

2.1 對比痰液陽性標本中L-J培養分枝桿菌與LAMP法檢出結果

50份痰涂片抗酸染色陽性標本中，LAMP檢測陽性50份，L-J培養陽性42份，檢出率分別是100%和84.00%，差異顯著（P<0.05），如下表1：

2.2 對比痰涂陰標本中L-J培養與LAMP法陽性檢出率

在痰涂片陰性標本中，LAMP陽性率較L-J培養陽性檢出率更高，差異有統計學意義（P<0.05），見表2：

3 討論

有效、快速診斷結核疾病在結核疾病控制總具有重要作用。現階段，主要通過涂片抗酸染色、結核桿菌培養方式診斷結核病，但是，結核桿菌涂片抗酸染色具有較低的檢出率，一般是30-40%[2]。結核桿菌培養時間長，往往需要13-29天，無法達到及早診斷的目的。LAMP是一種分子診斷技術，其具有檢查快等特點，且價格適中3]。根據本次實驗分析，LAMP陽性檢出率較L-J培養陽性更優差異有統計學意義（P<0.05）。可見，LAMP檢查法具有較高的應用價值。

總而言之，痰液標本陽性檢出率方面，LAMP法較L-J更高，而且LAMP具有操作簡單、方便、快捷等特點，而且靈敏度和特異度較高，值得采納、推廣。

參考文獻

[1] 楊健， 張天華， 鮮小萍，等. 環介導等溫擴增技術在肺結核病診斷中的應用評價[J]. 中國實驗診斷學， 2018， 22（12）：57-60.

[2] 黃文焰， 劉開鉗， 陳伊，等. LAMP技術在基層結核病診療機構推廣應用研究[J]. 中國熱帶醫學， 2017， 17（12）：1264-1266.

[3] 劉亞東， 冷雪， 時坤，等. 環介導等溫擴增技術檢測方法的研究進展[J]. 中國人獸共患病學報， 2018， 34（5）：460-465.