乳腺癌組織中microRNA表達情況對乳腺癌患者臨床預后的影響

孫菊琴 樓敏君 張莉霞

乳腺癌是常見的惡性腫瘤，其發病率居女性惡性腫瘤的第1位[1-2]，隨著醫療技術的進步和早期篩查的普及，目前乳腺癌患者的生存率已得到明顯提高[3-4]。乳腺癌治療的主要方法是行乳腺癌根治術，輔以術后放化療，以徹底殺滅腫瘤細胞，在現有技術下，進一步降低乳腺癌患者術后復發率的根本在于早期發現和早期治療[5-6]。但不同生物學特性的腫瘤細胞生長和轉移能力不同，即使在早期，也可有部分乳腺癌患者術前存在微小轉移灶，這種微小轉移灶難以通過手術根除，這也是乳腺癌患者術后復發的主要原因。現有研究表明，microRNA與各種腫瘤細胞的生長和轉移能力有關，其表達失衡是導致腫瘤易感性增加、腫瘤細胞生長和轉移的影響因素之一[7-10]。本研究探討乳腺癌組織中microRNA表達情況對乳腺癌患者臨床預后的影響，為臨床防治乳腺癌提供參考。

1 對象和方法

1.1 對象 回顧2014年1月至2016年1月我院行改良乳腺癌根治術的乳腺癌患者154例，術后隨訪2年，根據術后2年內是否復發，將患者分為復發組42例和對照組112例。納入標準：（1）乳腺癌經病理檢查確診；（2）TNM 分期為Ⅱ期或Ⅲ期；（3）年齡 18～65 歲；（4）臨床病歷資料齊全；（5）患者知情同意，且簽署知情同意書。排除標準：（1）乳腺癌復發；（2）遠處轉移；（3）全身性感染；（4）術前行新輔助放化療等特殊治療；（5）肝、腎、心、腦、肺等臟器功能不全；（6）轉移性乳腺癌或合并其他惡性腫瘤；（7）研究期間放棄治療、轉院、不配合治療或失訪。兩組患者術前一般資料均無統計學差異（均P＞0.05）。見表1。本研究經本院倫理委員會批準患者及家屬知情同意。

表1 兩組患者一般資料的比較

1.2 方法 兩組患者均行乳腺癌根治術，術中留取乳腺癌組織標本1mm×1mm×1mm，去除血液和其他組織，提取組織中總RNA：1mlTrizol試劑中將乳腺癌組織剪碎，均漿機上均漿，直至組織完全溶解于Trizol試劑中，轉移至1.5mlEP管中，加入0.2ml氯仿，混勻后離心（12 000r/min，15min），取上清液 500μl置于另一 EP 管中，加入等體積異丙醇，混勻后靜置10min，繼續離心（12 000r/min，10min），棄上清液，倒置 EP 管，濾紙吸去水分，加入75%乙醇1ml洗滌沉淀，離心（12 000r/min，5min），棄上清液，去乙醇，風干見白色固體，DEPC水溶解，混勻，NANODrop200測定相應RNA濃度和吸光度。實時熒光定量測定相應RNA基因表達量：將RNA逆轉錄為cDNA，進行熒光定量測量，U6為內參，采用2-ΔCt計算相應microRNA相對表達量，包括miR-183-5p、miR-194-5p、miR-4718、miR-1285-5p、miR-205-5p、miR-100-5p。

1.3 統計學處理 采用SPSS 22.0統計軟件。計量資料以表示，組間比較采用t檢驗；計數資料組間比較采用χ2檢驗。采用多因素logistics回歸分析探討microRNA對乳腺癌術后復發的影響。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者乳腺癌組織中microRNA表達水平的比較 與對照組比較，復發組miR-183-5p、miR-194-5p、miR-4718 均明顯增高（均P＜0.05）；miR-1285-5p、miR-205-5p、miR-100-5p均明顯降低（均P＜0.05）。見表2。

2.2 micro RNA表達水平對乳腺癌患者術后復發的影響進一步多因素logistics回歸分析顯示miR-183-5p、miR-194-5p、miR-4718增高以及miR-1285-5p、miR-100-5p降低是乳腺癌患者術后復發的危險因素（均P＜0.05）。見表3。

3 討論

micro RNAs是非編碼的調控RNAs，是內生的小分子，長度為20～24個氨基酸，目前在各類癌癥中是一個研究的熱點，有望為各類腫瘤的早期診斷、預后評估提供新的標志物。micro RNAs主要通過對目標mRNA降解、翻譯抑制騎著轉錄后負調控作用，從而調控腫瘤細胞增殖、分化、腫瘤血管生成和腫瘤轉移的過程。為探討microRNAs在乳腺癌患者中的作用，筆者設計本研究，結果發現在術后復發的乳腺癌患者中miR-183-5p、miR-194-5p和miR-4718顯著增高，miR-1285-5p、miR-205-5p 和 miR-100-5p 顯著降低，miR-183-5p、miR-194-5p、miR-4718增高以及miR-1285-5p、miR-100-5p降低均是乳腺癌患者術后復發的危險因素（均P＜0.05）。

micro RNAs廣泛存在于生物體中，參與了眾多蛋白質的轉錄和轉錄后的調控，在人體的正常發育中發揮重要作用。最近研究顯示micro RNAs還可以作為癌基因和抑癌基因，參與腫瘤的形成。miR-183-5p是miR-183家族中的一員，有研究顯示miR-183下調，可以抑制乳腺癌細胞的生長和遷移能力[11]，而高表達的miR-183可以促進乳腺癌細胞的生長和轉移[12]。miR-194-5p是miR-194家族成員的一員，在乳腺癌患者中的研究也已經證實miR-194-5p的高表達與乳腺癌細胞的生長和轉移有關，miR-4718的高表達增強乳腺癌細胞的轉移能力也同樣被證實[13]。目前關于miR-1285-5p在乳腺癌患者中的研究尚缺乏，但在原發性肝細胞癌患者中的研究顯示miR-1285-5p可以通過下降的表達，從而抑制腫瘤細胞的生長和轉移[14]。miR-1285-5p在早期肺磷癌患者中的研究顯示miR-1285-5p低表達，可以作為肺磷癌的一個早期預測指標[15]，miR-1285-5p可能是通過調節p53的功能從而調控腫瘤細胞的生長和轉移[16]。miR-100-5p至miR-100的家族成員，研究顯示miR-100-5p與其他惡性腫瘤的藥物耐藥性、轉移和侵襲能力均有關聯[17-19]。劉一諾等[20]研究也顯示miR-100家族可以抑制乳腺癌細胞的生長和轉移。綜上表明，micro RNAs的失衡（miR-183-5p、miR-194-5p、miR-4718增高、miR-1285-5p、miR-100-5p降低）共同參與了乳腺癌細胞的生長和轉移過程，從而導致乳腺癌患者術后復發率增高。但目前相關研究尚缺乏，尤其是國內。

表2 兩組患者乳腺癌組織中microRNA表達水平的比較

表3 micro RNA表達水平對乳腺癌患者術后復發的影響

綜上所述，乳腺癌組織中microRNA表達失衡，與術后復發有關。但目前尚不清楚micro RNAs對乳腺癌細胞化療藥物耐藥性的影響，急需進一步研究證實。