屎腸球菌對(duì)21 日齡AA 肉雞小腸發(fā)育和消化酶活力的影響

■胡真真 毛俊舟 董 麗 喻禮懷

（揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇揚(yáng)州225009）

屎腸球菌（Enterococcus faecium）屬乳酸菌類。肉雞小腸是吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的主要場(chǎng)所，絨毛是小腸黏膜的特殊結(jié)構(gòu)，十二指腸及空腸中絨毛分布最密[1]，屎腸球菌進(jìn)入肉雞腸道后，會(huì)較快地黏附腸道黏膜，抑制病原菌的黏附、維持腸道微生態(tài)平衡；降低腸道pH 值、改善動(dòng)物生理狀態(tài)。同時(shí)參與肉雞生長(zhǎng)、促進(jìn)新陳代謝、促進(jìn)非特異性免疫[2-3]。研究結(jié)果表明，屎腸球菌生長(zhǎng)繁殖性能較好，且抗逆性強(qiáng)，具有無污染、無殘留、無毒等特點(diǎn)，對(duì)動(dòng)物免疫功能和消化功能有促進(jìn)作用，因此它將是綠色的抗生素替代品的較好選擇[4]。但是目前關(guān)于屎腸球菌對(duì)幼齡肉雞小腸發(fā)育等的相關(guān)研究較少。故本試驗(yàn)基于前人已有的研究成果，進(jìn)一步探究不同劑量水平的屎腸球菌對(duì)21 日齡AA 肉雞小腸發(fā)育及部分消化酶活力的影響，尋求能夠替代抗生素的屎腸球菌最佳添加劑量及功能特點(diǎn)，以達(dá)到在肉雞前期生長(zhǎng)過程中的合理應(yīng)用。

1 材料和方法

1.1 材料

屎腸球菌NCIMB10415，有效含量1.0×1010CFU/g；試驗(yàn)選取600 只1 日齡AA 肉雞（公雞），試驗(yàn)時(shí)間為2016年6月～2016年7月，試驗(yàn)地點(diǎn)為江蘇省家禽研究所儀征試驗(yàn)基地。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及分組

試驗(yàn)選取600只1日齡AA肉雞（公雞），隨機(jī)分為5 組，每組6 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20 只雞，試驗(yàn)期21 d。對(duì)照組（CON 組）飼喂基礎(chǔ)日糧，抗生素組（Ant 組）在基礎(chǔ)日糧中添加0.1%金霉素，低（LEF 組）、中（MEF組）、高（HEF 組）劑量屎腸球菌組分別在基礎(chǔ)日糧中添加50、100、200 mg/kg屎腸球菌。

1.3 試驗(yàn)日糧與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)前對(duì)雞舍和器皿滅菌消毒，調(diào)節(jié)室溫為22 ℃，光照強(qiáng)度30 lx，適當(dāng)通風(fēng)。試驗(yàn)階段動(dòng)物采取網(wǎng)上平養(yǎng)，自由采食和飲水。定期清理糞便，消毒。按常規(guī)模式進(jìn)行免疫。

參照NRC（1994）配制基礎(chǔ)日糧。1～21 d 基礎(chǔ)日糧的組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.4 樣品采集

于試驗(yàn)第21 d 08：00 采樣，采樣前12 h 停止飼喂，每組隨機(jī)抓取6只雞，每個(gè)重復(fù)1只。頸靜脈放血處死，采血，脫毛，打開腹腔。先分離出空腸，取空腸中段3 cm，用PBS沖洗腸道，取0.5 cm左右腸段2塊，放入多聚甲醛固定液中保存。再分離出十二指腸、空腸，采集各腸段食糜分別移入冷凍離心管中，裝滿凍存管2/3，樣品全部放置于液氮中保存，后轉(zhuǎn)移至-80 ℃冰箱中凍存，用于消化酶活力的測(cè)定。

1.5 指標(biāo)測(cè)定與方法

測(cè)定21 日齡肉雞空腸發(fā)育指標(biāo)，測(cè)定腸道形態(tài)指標(biāo)為絨毛高度、隱窩深度、絨毛寬度及絨隱比。取出固定液中的腸段，處理后用石蠟包埋，后用切片機(jī)將組織蠟塊切片，再根據(jù)蘇木精-伊紅染色法將切片染色并制成永久切片用于組織學(xué)觀察，用光學(xué)顯微鏡觀察組織切片，并從每個(gè)腸道切片選出10根完好的絨毛和隱窩，測(cè)量絨毛高度、隱窩深度和絨毛寬度。

測(cè)定21 日齡肉雞十二指腸、空腸黏膜酶活力指標(biāo)，分別為糜蛋白酶（Chymotrypsin，CAS）（貨號(hào)：A080-3）、麥芽糖酶（Maltase）（貨號(hào)：A082-3）、脂肪酶（Lipase，LPS）（貨號(hào)：A054-1）、胰蛋白酶（Trypsin）（貨號(hào)：A080-2）、乳糖酶（Lactase）（貨號(hào)：A082-1）。具體操作方法見試劑盒說明書，試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

采用Excel 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行初步處理，用SPSS 18.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，采用one-way ANOVA 進(jìn)行單因素方差分析，采用Duncan's 法進(jìn)行多重比較，以P＜0.05 為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 屎腸球菌對(duì)21 日齡AA 肉雞空腸腸道結(jié)構(gòu)的影響

表2 屎腸球菌對(duì)21日齡AA肉雞空腸腸道結(jié)構(gòu)的影響

由表2可知，21日齡肉雞各處理組間空腸絨毛寬度及絨隱比均無顯著差異（P＞0.05）。相比于CON組，LEF 組肉雞空腸中絨毛高度有顯著性增加（P＜0.05），Ant 組肉雞空腸中隱窩深度也有顯著性增加（P＜0.05），其他各處理組間差異不顯著（P＞0.05）。

2.2 屎腸球菌對(duì)21日齡AA肉雞小腸酶活的影響

表3 屎腸球菌對(duì)21日齡AA肉雞十二指腸消化酶活性的影響（U/mg prot）

表4 屎腸球菌對(duì)21日齡AA肉雞空腸消化酶活性的影響

由表3 可知，各處理組間21 日齡AA 肉雞十二指腸酶活中糜蛋白酶、胰蛋白酶及乳糖酶無顯著差異（P＞0.05）。與CON 組相比，HEF 組和Ant 組麥芽糖酶活性顯著提高（P＜0.05）。LEF 組、HEF 組及Ant 組脂肪酶活性顯著低于CON組（P＜0.05）。

由表4 可知，各處理組相比，脂肪酶和胰蛋白酶影響不顯著（P＞0.05）。相比于CON 組，LEF 組、HEF組和Ant 組肉雞空腸中糜蛋白酶活性顯著降低（P＜0.05），HEF 組和Ant 組麥芽糖酶活性顯著提高（P＜0.05）。與CON組相比，Ant組和HEF組肉雞空腸中乳糖酶活性顯著提高（P＜0.05）。

3 討論

3.1 屎腸球菌對(duì)AA肉雞小腸發(fā)育的影響

正常的小腸絨毛呈柱狀、細(xì)長(zhǎng)且排列整齊緊密，當(dāng)小腸內(nèi)微環(huán)境失去平衡時(shí)，絨毛組織會(huì)表現(xiàn)出絨毛歪斜、倒伏及短粗等受損現(xiàn)象[1]。小腸形態(tài)結(jié)構(gòu)的完整性保證了小腸的吸收消化功能，且小腸絨毛高度、隱窩深度和絨隱比（絨毛高度/隱窩深度）起著更為關(guān)鍵的作用[5]。玄家潔[6]發(fā)現(xiàn)，3%屎腸球菌復(fù)合物可顯著提高肉雞空腸和十二指腸絨毛高度和絨隱比。李樹鵬等[7]證實(shí)，屎腸球菌可使肉雞回腸絨毛顯著增長(zhǎng)、變粗。Awad 等[8]發(fā)現(xiàn)，肉雞飼糧中添加屎腸球菌后，小腸絨毛高度及絨隱比都顯著提高。本試驗(yàn)結(jié)果表明，相比于CON組，LEF組21日齡肉雞空腸中絨毛高度有顯著性增加，Ant 組肉雞空腸中隱窩深度也有顯著性增加，其他各處理組間差異不顯著，這與玄家潔及Awad的研究結(jié)果一致。添加屎腸球菌增加了小腸的絨毛高度，表明屎腸球菌增強(qiáng)了腸道的消化吸收功能；而抗生素的添加使隱窩深度有所增加，從而使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收功能降低。綜合分析比較，21 日齡肉雞日糧中添加50 mg/kg屎腸球菌可增加小腸絨毛高度，這可能與添加劑量有關(guān)，具體確切原因還有待進(jìn)一步研究。

3.2 屎腸球菌對(duì)AA肉雞小腸酶活的影響

動(dòng)物的消化道內(nèi)，蛋白酶等的分泌量會(huì)受到多種因素的影響，而且消化酶的分泌狀況會(huì)直接影響營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化率[9-10]。脂肪酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶等共同參與完成家禽體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化過程，麥芽糖酶活性與淀粉降解有著密切關(guān)系[5，9-10]。Jin等報(bào)道在飼糧中添加屎腸球菌可顯著提高肉雞小腸內(nèi)胰蛋白酶活性[11-12]。潘木水等[13]研究表明在肉雞飼糧中添加屎腸球菌可分別提高小腸蛋白酶和糜蛋白酶的活性15%和18%。王志祥等提出添加0.25%的屎腸球菌可顯著提高斷奶仔豬十二指腸食糜脂肪酶活性。李華麗[14]發(fā)現(xiàn)灌喂1.0 ml/kg 乳酸菌抑制了肉雞小腸脂肪酶活性。本試驗(yàn)結(jié)果中，添加屎腸球菌能顯著提高AA 肉雞十二指腸、空腸中麥芽糖酶活性以及空腸中乳糖酶活性，胰蛋白酶活性無顯著變化，空腸中糜蛋白酶活性以及十二指腸中脂肪酶活性均降低。葛龍等[15]發(fā)現(xiàn)屎腸球菌能分解乳糖、麥芽糖等，故肉雞小腸中麥芽糖酶和乳糖酶活性的提高的一個(gè)原可能是屎腸球菌對(duì)麥芽糖和乳糖的分解作用產(chǎn)生的。糜蛋白酶以及脂肪酶活性的降低與潘木水和王志祥的結(jié)論相反，但與李華麗的結(jié)論一致，這可能與屎腸球菌的添加劑量有關(guān)，具體原因還有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，在21日齡AA肉雞基礎(chǔ)日糧中添加200 mg/kg 屎腸球菌在一定程度上提高了AA 肉雞十二指腸、空腸腸道內(nèi)麥芽糖酶和乳糖酶活性，添加50 mg/kg屎腸球菌可增加AA肉雞空腸腸道絨毛高度。故添加屎腸球菌可改善肉雞小腸絨毛發(fā)育及活性，提高肉雞生長(zhǎng)性能，但與添加劑量有關(guān)。