大豆替代豆粕對(duì)中華絨螯蟹生長(zhǎng)、消化酶活力和抗氧化能力的影響

陳興邦 ，陳冉 ，邵俊杰 ，蔣先金 ，張美琴 ，萬(wàn)金娟

（1.宿遷益佰飼料有限公司，江蘇 宿遷 223800；2.江蘇省淡水水產(chǎn)研究所，江蘇 南京 210017）

中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis），俗稱河蟹，是我國(guó)重要的養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)蟹類,在我國(guó)水產(chǎn)業(yè)中占據(jù)十分重要的地位[1]。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示,至2017年,我國(guó)中國(guó)中華絨螯蟹的總產(chǎn)量已達(dá)到750 945 t，占蟹類總產(chǎn)量的75%左右[2]。在河蟹飼料中，魚粉用量通常達(dá)30%～40%，是蟹飼料成本中最大的組成部分。近年來(lái)，魚粉資源越來(lái)越匱乏，魚粉的價(jià)格逐年上漲,且我國(guó)優(yōu)質(zhì)魚粉主要依賴進(jìn)口，極大的限制了河蟹配合飼料和河蟹養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，也使得植物性蛋白替代魚粉的研究成為一個(gè)熱點(diǎn)問(wèn)題[3-5]。其中，豆粕因其蛋白含量高、價(jià)格相對(duì)低廉，被廣泛用來(lái)作為替代魚粉的飼料蛋白源[6-7]。而目前，大豆價(jià)格僅為豆粕的60%左右，且在宿遷地區(qū)，大豆產(chǎn)量豐富，就地取材便捷；因此用大豆替代一部分豆粕，不但可以緩解豆粕資源緊缺,還可以降低飼料成本。關(guān)于中華絨螯蟹飼料蛋白源的研究，國(guó)內(nèi)外已有一些報(bào)道[8-9]，但尚未見(jiàn)大豆作為主要蛋白源對(duì)蟹的生長(zhǎng)及免疫影響的相關(guān)研究。因此，該研究旨在考察不同比例大豆替代豆粕飼喂中華絨螯蟹幼蟹對(duì)其生長(zhǎng)性能、消化酶活性和抗氧化能力的影響，以期為高性價(jià)比河蟹幼蟹飼料提供參考依據(jù)。

1 材料與制作

1.1 試驗(yàn)飼料

該試驗(yàn)共設(shè)4個(gè)組，即對(duì)照組（基礎(chǔ)飼料，D0），分別以大豆替代基礎(chǔ)飼料中40%、60%、80%豆粕的試驗(yàn)組（D1、D2、D3），試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。飼料原料經(jīng)過(guò)粉碎80目篩，經(jīng)2次混合、制粒、熟化冷卻等工序，顆粒風(fēng)干冷卻后過(guò)篩，貯存?zhèn)溆谩?/p>

表1 飼料配方組成及營(yíng)養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)/%）

1.2 試驗(yàn)用蟹及飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)用的河蟹蟹苗購(gòu)自江蘇省南通市，蟹苗在試驗(yàn)的養(yǎng)殖環(huán)境條件下暫養(yǎng)1周，然后選擇附肢完整、健康無(wú)患病并處于脫皮期間的蟹苗2 000尾[平均體質(zhì)量為（5.34±0.19）g]進(jìn)行養(yǎng)殖試驗(yàn)，隨機(jī)分為4組。養(yǎng)殖塘口為12個(gè)，面積為10×667 m2。每天的投喂量根據(jù)蟹苗體質(zhì)量5%，按實(shí)際攝食情況進(jìn)行調(diào)整。每天分2次投喂，時(shí)間為07：00和17：00，飼養(yǎng)周期為5個(gè)月。

1.3 生長(zhǎng)性能測(cè)定

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，測(cè)定河蟹的增重率和存活率，按以下公式進(jìn)行計(jì)算：

增重率（%）=100×（Wt-W0）/W0；

飼料系數(shù)=（Wt-W0）/F；

存活率（%）=100×Nt/N0。

式中，W0為平均初始體質(zhì)量，W為平均終末體質(zhì)量，F(xiàn)為飼料投喂量，N0為初始尾數(shù)，Nt為終末尾數(shù)。

1.4 樣品采集與測(cè)定

河蟹進(jìn)行計(jì)數(shù)并稱重后，每個(gè)塘口隨機(jī)挑選3只蟹，取其肝胰腺，用生理鹽水（0.85%NaCl）沖洗干凈并用濾紙擦去水分，然后加入9倍體積的同濃度生理鹽水，在冰浴中進(jìn)行勻漿（工作時(shí)間5 s，間歇時(shí)間5 s，共反復(fù)3次），以10 000 r/min離心10 min，取上清液待測(cè)。肝胰腺的胰蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶以及總抗氧化能力、超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶。肝胰腺各指標(biāo)水平均采用南京建成生物工程研究所試劑盒測(cè)定。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件，對(duì)數(shù)據(jù)作單因素方差分析，若組間差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，則做ANOVA多重比較，不同的小寫字母表示各組之間比較差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；試驗(yàn)結(jié)果顯示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SE）。

2 結(jié)果

2.1 大豆替代豆粕對(duì)中華絨螯蟹幼蟹生長(zhǎng)性能的影響

經(jīng)過(guò)5個(gè)月養(yǎng)殖，各組蟹的增重率、成活率及飼料系數(shù)見(jiàn)表2。從表2中可見(jiàn)，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組幼蟹的生長(zhǎng)性能指標(biāo)十分接近，差異均不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。隨著大豆替代豆粕的比例提高，幼蟹的末體質(zhì)量、增重率和成活率呈上升趨勢(shì)，飼料系數(shù)呈下降趨勢(shì)。

2.2 大豆替代豆粕對(duì)中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺消化酶活性的影響

飼料中大豆替代豆粕對(duì)中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺消化酶活性的影響見(jiàn)表3。由表3可知，隨著飼料中大豆替代豆粕的比例增高，蟹肝胰腺胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶水平呈降低趨勢(shì)。其中，60%和80%組胰蛋白酶水平顯著低于豆粕組；40%、60%和80%組脂肪酶和淀粉酶水平均顯著低于豆粕組（P＜0.05）。

表2 大豆替代豆粕對(duì)中華絨螯蟹幼蟹生長(zhǎng)性能的影響

表3 大豆替代豆粕對(duì)中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺消化酶活性的影響

2.3 大豆替代豆粕對(duì)中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺抗氧化活力的影響

飼料中大豆替代豆粕對(duì)中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺抗氧化活力的影響見(jiàn)表4，由表4可知，各組蟹肝胰腺中超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶及總抗氧化活力的水平均差異不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表4 大豆替代豆粕對(duì)中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺抗氧化活力的影響

3 討論

近年來(lái)，大豆雖然可以作為水產(chǎn)動(dòng)物的優(yōu)質(zhì)蛋白源，但因其所含的大豆蛋白酶抑制因子、凝集素和植酸等抗?fàn)I養(yǎng)因子對(duì)機(jī)體有一定的影響[10]，未能在水產(chǎn)飼料中得到很好地利用。但隨著豆粕資源供應(yīng)日趨緊張、價(jià)格逐年上升，大豆這一當(dāng)?shù)毓?yīng)量大，價(jià)格低廉的蛋白源逐漸受到當(dāng)?shù)仫暳掀髽I(yè)的關(guān)注。該試驗(yàn)結(jié)果顯示，在飼料蛋白、脂肪水平相近的情況下，用大豆替代40%～80%的豆粕，河蟹的生長(zhǎng)、對(duì)飼料的利用情況及存活率未受影響。由于目前尚未見(jiàn)關(guān)于大豆替代豆粕對(duì)其他水生動(dòng)物生長(zhǎng)影響的報(bào)道，其具體影響機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

研究表明，影響甲殼動(dòng)物消化酶活性的因素可分為兩類，一類是內(nèi)在因素，例如蛻皮周期和生長(zhǎng)發(fā)育期等[7-8]，一類是外在因素，例如溫度和餌料等[11-12]。其中，餌料是影響甲殼動(dòng)物消化酶活性的關(guān)鍵因素，可以作為機(jī)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化利用的重要指標(biāo)[13]。江洪波等[14]研究了餌料蛋白質(zhì)對(duì)中華絨螯蟹仔蟹消化酶活性的影響，其研究結(jié)果指出蟹胰蛋白酶活性與飼料中蛋白質(zhì)水平呈一定的正相關(guān)，而淀粉酶則受到飼料蛋白質(zhì)的抑制。該試驗(yàn)中，各組飼料蛋白質(zhì)水平相近，但隨著飼料中大豆替代豆粕水平的增加，蟹肝胰腺胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶水平均呈降低趨勢(shì)（P＜0.05）；表明大豆替代豆粕對(duì)肝胰腺造成了一定的損傷，這可能是由于大豆中所含的大豆蛋白酶抑制因子、凝集素和植酸等抗?fàn)I養(yǎng)因子對(duì)機(jī)體造成了影響。

甲殼動(dòng)物的抗氧化防御系統(tǒng)由酶促和非酶促兩個(gè)體系組成，其中酶促體系包括超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶等抗氧化酶，它們可在不同水平上清除體內(nèi)多余的自由基，恢復(fù)機(jī)體正常的細(xì)胞代謝和功能；非酶促體系包括維生素、氨基酸、金屬蛋白等，這兩個(gè)體系在機(jī)體內(nèi)相互協(xié)作，使機(jī)體免受自由基的侵害[15-17]。在該研究結(jié)果表明，各組蟹肝胰腺中超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶及總抗氧化活力的水平差異均不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明大豆與豆粕在抗氧化能力無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異。

綜上所述，用大豆替代40%～80%的豆粕，對(duì)中華絨螯蟹的生長(zhǎng)、飼料利用率、存活率以及抗氧化能力無(wú)顯著影響，但對(duì)機(jī)體消化酶有一定的負(fù)面影響，在具體替代過(guò)程中應(yīng)綜合考慮，酌情添加。