藥品生產(chǎn)企業(yè)無菌檢驗(yàn)方法驗(yàn)證的探討

王曉龍 陶飛

【摘 要】我國在建立市場經(jīng)濟(jì)體制之后，逐漸出現(xiàn)了較多藥品生產(chǎn)企業(yè)，也相應(yīng)加劇了藥品生產(chǎn)企業(yè)的市場競爭力。為了確保藥品生產(chǎn)質(zhì)量，必須反復(fù)檢驗(yàn)藥物安全性和治療效果，無菌檢驗(yàn)方法能夠?qū)λ幤焚|(zhì)量安全進(jìn)行驗(yàn)證。此次研究主要是探討分析藥品生產(chǎn)企業(yè)無菌檢驗(yàn)方法，希望能夠?qū)ο嚓P(guān)人員起到參考性價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】藥品生產(chǎn)企業(yè);無菌檢驗(yàn)方法;驗(yàn)證方法

【中圖分類號】R256.21【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1005-0019（2019）23--01

1、無菌檢驗(yàn)的樣品與設(shè)備

準(zhǔn)備左氧氟沙星樣品，在準(zhǔn)備之前需要對檢驗(yàn)設(shè)備進(jìn)行消毒處理，包括振蕩儀、HTY-K性培養(yǎng)器皿、智能集菌儀，保證檢驗(yàn)設(shè)備的無菌效果和性能穩(wěn)定性，滿足無菌檢驗(yàn)的要求，嚴(yán)格控制整個試驗(yàn)過程，以此維護(hù)檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，之后需要控制樣品規(guī)格和質(zhì)量，確保滿足試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)要求。在采集和存儲樣品時應(yīng)當(dāng)滿足相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，之后準(zhǔn)備試驗(yàn)菌株[3]。在選擇試驗(yàn)菌株時應(yīng)當(dāng)考慮到藥品，確保試驗(yàn)菌株的有效性和針對性。同時，為了確保整個實(shí)驗(yàn)操作的有效性，必須確保檢驗(yàn)操作人員具備專業(yè)化知識與技能，能夠確保整個實(shí)驗(yàn)操作的科學(xué)性。

2、制備試驗(yàn)菌液

現(xiàn)階段，在驗(yàn)證無菌檢驗(yàn)方法時主要應(yīng)用白色念珠菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、生孢梭菌等。對于以上菌株的制備方法主要有接種新型菌株培養(yǎng)物至培養(yǎng)基中，在30攝氏度溫度下培養(yǎng)20h左右，選取1ml培養(yǎng)物，添加9ml無菌氯化鈉溶液（0.9%），稀釋至1ml菌株含量低于100CFU的菌懸液。對于白色念珠菌來說，接種新型菌株培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中，在30攝氏度溫度下培養(yǎng)20h左右，添加9ml無菌氯化鈉溶液（0.9%），稀釋至1ml菌株含量低于100CFU的菌懸液。但是生孢梭菌的制備方法比較特殊，需要選取新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基中，在30攝氏度溫度下培養(yǎng)20h左右[4]。選取1ml培養(yǎng)物添加9ml無菌氯化鈉溶液（0.9%），稀釋至1ml菌株含量低于100CFU的菌懸液。

3、驗(yàn)證方法與驗(yàn)證結(jié)果/

3.1 驗(yàn)證方法 按照薄膜過濾法將左氧氟沙星放置于管內(nèi)，并且泵入培養(yǎng)基中，將100CFU試驗(yàn)菌置入于管內(nèi)，作為試驗(yàn)管Ⅰ組;之后按照薄膜過濾法將樣品置入到另外一管中，清洗劑氯化鈉-蛋白緩沖液，進(jìn)行三次沖洗，每次泵入100ml，并且在兩管內(nèi)接入100CFU試驗(yàn)菌作為試驗(yàn)管Ⅱ組。按照薄膜過濾法將樣品過濾到另一管中，使用氯化鈉-蛋白緩沖液進(jìn)行五次沖洗，泵入100ml于培養(yǎng)基中，將相同培養(yǎng)基分別與管進(jìn)行連接，在兩管內(nèi)接入100CFU試驗(yàn)菌作為試驗(yàn)管Ⅲ組，選取改良馬丁培養(yǎng)基與硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基，將另外兩管集菌器泵入至培養(yǎng)基中，將其作為陰性對照組，以上試管都需要培養(yǎng)3d以上。

3.2 試驗(yàn)結(jié)果 試驗(yàn)管Ⅰ組結(jié)果：霉菌生長，金黃色葡萄球菌、細(xì)菌、銅綠假單胞菌以及枯草芽孢桿菌不能正常生長。提示樣品乙酯效果會影響無菌檢查結(jié)果判斷，此時需要應(yīng)用清洗劑將干擾消除。試驗(yàn)管Ⅱ組結(jié)果：銅綠假單胞菌在48h內(nèi)正常生長，金黃色葡萄球菌于5d后生長，生孢梭菌、枯草芽孢桿菌均無法正常生長，提示樣品抑菌效果未徹底消除，還需要增加清洗劑使用劑量。試驗(yàn)管Ⅲ組結(jié)果：按照試驗(yàn)溫度進(jìn)行培養(yǎng)，樣品試驗(yàn)管均清澈，且陽性管呈良好生長態(tài)勢，供試品滿足相關(guān)規(guī)定[5]。根據(jù)實(shí)驗(yàn)方法所建立的無菌檢驗(yàn)方法驗(yàn)證，能夠作為左氧氟沙星的無菌檢查方法。

4、微生物酶發(fā)酵

利用微生物技術(shù)，通過高度工程化的新型綜合技術(shù)，以利用微生物反應(yīng)過程為基礎(chǔ)，依賴于微生物機(jī)體在反應(yīng)器內(nèi)的生長繁殖及代近程來合成一定產(chǎn)物，通過分離納進(jìn)行提取精制，并最終制劑成型來實(shí)現(xiàn)藥物產(chǎn)品的生產(chǎn)各種酶制劑糖化酶、-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等天冬酰胺酶：抗癌;納豆激酶、鏈激酶：治療血栓青霉素酰化酶：青霉素生產(chǎn)需要誘導(dǎo)或遭受阻遏、抑制等調(diào)控作用，在菌種選育、培養(yǎng)基配制以及發(fā)酵條件等方面需注意。

5、藥品生產(chǎn)企業(yè)無菌檢驗(yàn)方法驗(yàn)證的實(shí)例分析

本次研究主要是圍繞甘草提取物粉微生物限度檢查方法為案例進(jìn)行分析討論。

5.1 儀器與材料 選擇高壓滅菌器、細(xì)菌培養(yǎng)箱、生物安全柜、微波爐以及生化培養(yǎng)箱為主要操作儀器。試劑包括甘草提取物粉。培養(yǎng)基：膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基、膽鹽乳糖增菌液、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基等試驗(yàn)用菌種：金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉菌、大腸埃希菌。

5.2 方法 第一，制備試驗(yàn)菌株菌液。分別選擇1ml枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌，添加至9ml氯化鈉溶液（0.9%）中進(jìn)行稀釋，制作菌懸液。選取1ml白色念珠菌培養(yǎng)物，添加至9ml氯化鈉溶液（0.9%）中進(jìn)行稀釋，制作菌懸液。選取黑曲霉菌培養(yǎng)物，添加至4ml氯化鈉溶液（0.9%）中進(jìn)行洗滌，之后置入空管內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)比濁處理之后，選取1ml溶液于9ml氯化鈉溶液（0.9%）中進(jìn)行稀釋，制作菌懸液。第二，制備供試液。選取10g樣品，添加至100ml緩沖液中，制作為1：10濃度的供試液。第三，常規(guī)法。選取1ml供試液，加入75cfu試驗(yàn)菌，之后注入到20ml培養(yǎng)基中，制備兩個平皿，待至培養(yǎng)基凝固后置于常溫進(jìn)行培養(yǎng)觀察，菌落數(shù)計(jì)算結(jié)果為實(shí)驗(yàn)組，將相應(yīng)添加的菌數(shù)作為菌液組，供試品作為對照組，對回收率進(jìn)行計(jì)算。第四，培養(yǎng)基稀釋法。選取供試液，添加75cfu試驗(yàn)菌，按照“常規(guī)法”開展試驗(yàn)。結(jié)果如表1所示。

7、結(jié)束語

綜上所述，對于藥品生產(chǎn)企業(yè)來說，必須在無菌環(huán)境下觀察藥物的抑菌活性效果，通過驗(yàn)證無菌檢驗(yàn)方法，可以有效驗(yàn)證此種檢驗(yàn)方法的效果和結(jié)論，充分展現(xiàn)出試驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性，加強(qiáng)醫(yī)療檢驗(yàn)的科學(xué)性。使用無菌檢驗(yàn)法對藥物質(zhì)量與藥效進(jìn)行檢驗(yàn)，能夠有效提升藥品安全性。同時有助于加強(qiáng)藥品生產(chǎn)企業(yè)的競爭實(shí)力，規(guī)范整個藥品生產(chǎn)行業(yè)，增加藥物治療效果。

參考文獻(xiàn)

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