自制血液分析高濃度樣品進行血液分析儀檢測線性范圍的驗證

陳靜 段小勇 王晟

443002三峽大學第三臨床醫學院 葛洲壩集團中心醫院檢驗科1，湖北宜昌

443002三峽大學第三臨床醫學院 葛洲壩集團中心醫院急診醫學科2，湖北宜昌

臨床檢驗的質量對患者的診斷、治療和預后有直接影響。檢驗程序對于檢驗結果的質量保障有重要意義[1]。根據CNAS-CL02準則進行判定，其通過了中國合格評定國家認可委員會的評定。2012年《醫學實驗室質量和能力認可準則》明確指出：實驗室應在設備安裝和使用前驗證其性能可達到標準，并符合相關檢驗的要求[2-3]。CNAS-CL43：2012同時指出：血液分析儀的性能驗證內容至少應包括精密度、可報告范圍(線性范圍)、正確度等，宜參考WS/T 406-2012《臨床血液學檢驗常規項目分析質量要求》[4]。關于檢測線性范圍第4版《全國臨床檢驗操作規程》這樣解釋，線性是指所用分析方法在給定范圍內獲取與樣品中分析物濃度/活性成正比的試驗結果的能力。檢驗方法的準確度是隨著所測定的含量范圍而發生變化的。超過一定的范圍，準確度就會受到影響[5]。本研究所進行的檢測線性范圍的驗證就是確認廠家聲明檢測線性范圍內結果的準確度能達到行業標準的要求。

資料與方法

材料：①全自動五分類血液分析儀。②篩選合適的新鮮日常血液分析樣品4份。③離心機、可調式微量移液器及一次性耗材。

圖1 WBC線性結果

表1 WBC線性結果(109/L)

圖2 RBC線性結果

表2 RBC線性結果(1012/L)

方法：①選取當日檢測結果分別為WBC＞20× 109/L、 RBC≈4.00× 1012/L、HGB≈125 g/L、PLT＞500×109/L且HCT≤0.4的EDTA-K2抗凝靜脈全血樣品各1例。②將上述4例樣品置于離心機內，進行3 500 r/min，離心10 min，而后盡量將其血漿吸盡，將這些樣品分離成血漿和少漿血。③參照EP6-A2文件用血漿(血小板使用稀釋液)作為低濃度樣品(L)，少漿血作為高濃度樣品(H)[6]，將低濃度和高濃度樣品按比例混合，即按4∶0、3∶1、2∶2、0∶4的比例混合可得到5份線性試驗樣品[7]。各樣品的預期濃度按以下式計算：樣品預期濃度=(C1V1+C5V5)/(V1+V5)，V1代表所取1號低濃度樣品體積，C1代表1號低濃度樣品濃度，C5代表5號高濃度樣品濃度，V5代表所取5號高濃度樣品體積。根據實驗樣品配制的稀釋關系，對各實驗樣品內含分析物的濃度進行計算，得出的即為樣品的預期值。再經測定方法檢測，獲得5個檢測值。按以上實驗要求，重復測定每個樣品3次，取平均值，它們和預期值形成5對預期值及實測平均值。采用直線回歸方程統計數據，實測值為縱坐標，橫坐標定位預期值，得直線回歸y=ax+b(b設定為零)。若線性回歸方程的斜率在(1±0.03)范圍內，相關系數r≥0.975，或r2≥0.95[8]，則認為該項目在此儀器線性范圍通過驗證。

結 果

WBC、RBC、HGB、PLT項目的線性驗證的結果均符合《WS/T 406-2012臨床血液學檢驗常規項目分析質量要求》的要求，其線性范圍驗證通過。由于WBC、PLT符合廠家提供的儀器線性范圍的高濃度樣品非常難以獲得，而經過對以往數據的統計確認此次實際驗證范圍已覆蓋日常工作中99.9%以上的樣品濃度范圍，故以此次驗證檢測線性范圍可滿足日常工作需要。WBC、RBC、HGB、PLT線性結果，見圖1～圖4和表1～表4。

討 論

作為檢驗科最常用的一種分析儀器，其檢測結果的準確性直接影響了臨床醫師對疾病的診斷和治療[9]。因此在使用分析儀前首先要保證該儀器的系統誤差在臨床可接受范圍內，因此在儀器新安裝和投入臨床使用前，除了要求滿足與檢測相關的規格外，還需要達到所需的性能[10]，即進行性能驗證。由于在性能的線性范圍驗證過程中需用到高濃度樣本，而該樣本較難獲得，實驗室的質量管理工作會因為等待臨床高濃度樣本而處于被動地位，影響了行業標準在實際工作的具體實施[11]，如果用離心濃縮的方式自制少漿全血作為高濃度樣品，將較易獲得適合濃度的高濃度樣品，再將其血漿(稀釋液)作為低濃度樣本，即符合衛健委標準的要求，又避免了各種不相容的情況，使檢測結果與預期結果有非常好的相關性，從而能夠快速地完成血液分析儀的線性范圍驗證，縮短了驗證周期，提高了工作效率，同時也使檢驗結果的準確性有了數據的支撐。

圖3 HGB線性結果

表3 HGB線性結果(g/L)

圖4 PLT線性結果

表4 PLT線性結果(109/L)

自制血液分析的少漿全血高濃度樣品順利地通過了線性范圍驗證，同時滿足了高效與質量保證的兩大要素，對血液分析儀的線性范圍驗證具有一定的參考意義。故在此將血液分析儀的線性范圍驗證方法進行總結，若有不足敬請批評指正。