TTC法測(cè)定山豆根種子生活力條件的優(yōu)化

(1.貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，貴陽(yáng) 550025；2.紫云自治縣長(zhǎng)萌農(nóng)業(yè)科技開(kāi)發(fā)有限責(zé)任公司，貴州 安順 561000)

山豆根原植物為豆科植物越南槐(Sophoratonkinensis)[1]。山豆根為臨床常用藥，屬清熱解毒藥[2]。同時(shí)，山豆根又是多種藥品的原材料[3]。由于近年來(lái)市場(chǎng)需求逐年增大，野生資源采挖嚴(yán)重，各地積極開(kāi)展人工種植，且無(wú)論是自然繁殖還是人工繁殖手段，都主要依靠種子[3]。種子的生活力檢測(cè)是預(yù)判種子是否具有繁殖價(jià)值的重要手段，本研究采用正交試驗(yàn)、單因素試驗(yàn)和Central Composite Design響應(yīng)面試驗(yàn)對(duì)TTC法測(cè)定山豆根種子生活力的條件進(jìn)行優(yōu)化，以期為后續(xù)的研究和生產(chǎn)提供指導(dǎo)。

注：a為0.3%×30 ℃×2 h；b為0.3%×35 ℃×4 h；c為0.3%×40 ℃×3 h。圖1 正交試驗(yàn)

注：d為0.5 %×35 ℃×3 h；e為0.5%×30 ℃×4 h；f為0.5%×40 ℃×2 h。圖2 正交試驗(yàn)

1 材料與方法

1.1 材 料

山豆根種子于2018年9月30日采自安順市紫云縣貓營(yíng)鎮(zhèn)山豆根種繁基地，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院檀龍顏副教授鑒定為豆科植物越南槐(Sophoratonkinensis)的種子。室內(nèi)陰干后，于4 ℃保存?zhèn)溆谩y(cè)定試劑為氯化三苯基四氮唑(TTC)。

1.2 方 法

1.2.1種子處理

種子浸泡：將去除雜質(zhì)，種皮無(wú)破損的山豆根種子置于燒杯中浸泡24 h后，剝掉種皮，從2片子葉中間切斷，每50片子葉置于直徑12 cm的培養(yǎng)皿中。

種子染色：每個(gè)培養(yǎng)皿分別加入不同濃度的TTC溶液，避光置于不同溫度條件下染色，相應(yīng)的對(duì)照培養(yǎng)皿中的種子置于沸水浴10 min后染色，每組3個(gè)重復(fù)。

1.2.2正交試驗(yàn)

選取TTC濃度(A)(0.3%、0.5%、0.7%)、染色溫度(B)(30 ℃、35 ℃、40 ℃)、染色時(shí)間(C)(2 h、3 h、4 h)為指標(biāo)，每組50片子葉，設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)。

1.2.3單因素試驗(yàn)

染色溫度試驗(yàn)：取50片山豆根子葉，TTC濃度設(shè)置為0.5%，時(shí)間設(shè)置為3 h，溫度設(shè)置25 ℃、30 ℃、35 ℃、40 ℃和45 ℃等5個(gè)水平。……