2型糖尿病患者血小板參數及血小板表面相關膜糖蛋白和線粒體膜電位表達的臨床意義*

余司文， 武強， 王艷華， 賀樂奇， 沈芳

(復旦大學附屬上海市第五人民醫院 檢驗科， 上海 200240)

隨著生活水平的提高及生活習慣的改變，高熱量食物攝入增加、人口老齡化加劇及運動量減少，2型糖尿病(非胰島素依賴型糖尿病，type 2 diabetes mellitus，T2DM)已成為繼心血管病、腫瘤后第3大流行非傳染疾病[1-3]。目前研究顯示，2型糖尿病的發病機制不僅與家族遺傳、生活方式、內分泌干擾物、腸道菌群等因素有關，還可能與血小板異常有關[4-5]，但此方面研究較少。本研究擬通過檢測T2DM患者血小板計數(blood platelet count，PLT)、血小板平均體積(mean platelet volume，MPV)、血小板壓積(thrombocytocri，PCT)、血小板分布寬度(platelet distribution width，PDW)、血小板聚集功能(platelet aggregation tes，PAgT)、血小板表面相關膜糖蛋白(CD41b、CD61和CD62P)及線粒體膜電位(Δψm)的變化，探討血小板異常對T2DM患者的臨床意義及與T2DM發病機制的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年5月-2018年5月收治的符合中國2型糖尿病防治指南(2013 年版)糖尿病診斷及分型標準[6]的T2DM住院患者75例(男性45例，女性30例)，平均52.3歲；選取同期健康體檢人群50例作為對照組，無高血壓、糖尿病、心、肝、腎及血液等疾病(男性20例，女性30例)，平均45.6歲。所有參與者均簽署知情同意書。

1.2 檢測指標

所有被檢測人員(T2DM患者和對照組)在受檢前2周內均不能服用對血小板功能有影響的藥物，保持正常飲食和生活規律，避免劇烈運動，空腹8 h[7]后于第2天清晨空腹抽取肘靜脈血 2 mL、15%乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝，用日本Sysmex XN9000全自動血球分析儀檢測PLT、MPV、PCT及PDW；(2)肘靜脈血1.8 mL、3.2%枸櫞酸鈉抗凝，用Model 700型全血血小板聚集儀(Chrono-log公司)檢測PAgT；(3)肘靜脈血1.8 mL、3.2%枸櫞酸鈉抗凝，用FACSCalibur型流式細胞儀(美國BD公司)檢測CD41b、CD61、CD62P和Δψm的熒光陽性百分率。所有檢測指標均要求4 h內完成檢測。

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 PLT、MPV、PCT、PDW和PAgT

與對照組比較，T2DM組被檢者PLT計數降低，但差異無統計學意義(P>0.05)；PDW及MPV 顯著升高，差異有統計學意義(P<0.05) ; 兩組被檢者PCT比較，差異無統計學意義(P>0.05) ; 與對照組比較，T2DM組患者的PAgT升高，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組被檢者 PLT、MPV、PCT、PDW及PAgT比較Tab.1 The PLT, MPV, PCT, PDW and PAgT of the two groups

2.2 Δψm和CD62P、CD41b和CD61

與對照組比較，T2DM組的CD62P、CD41b表達水平均升高，差異有統計學意義(P<0.05);Δψm的含量降低，差異有統計學意義(P<0.05);CD61的表達水平升高但差異無統計學意義(P>0.05)。見表2，圖1、2。

表2 兩組被檢者 CD41b、CD61、CD62P和Δψm比較Tab.2 Comparison of CD41b, CD61, CD62P and Δψm between the two groups

3 討論

T2DM患者最具有特異性的并發癥是微血管病變，這增加了缺血性心血管事件的風險[8]，因此及早發現、及時處理血管性病變，對延緩其并發癥進程及改善預后顯得尤為重要。目前，T2DM微血管病變在常規體檢中難以發現，大部分患者都得不到及時、有效的處理[9]。因此，臨床上對T2DM微血管病變的早期篩查，已成為一項迫在眉睫的難題。本研究結果表示，T2DM患者外周血中血小板Δψm降低(P<0.05)，PLT數量降低，PAgT、PDW、MPV水平升高(P<0.05)。有學者研究表明，血小板要避免不被激活、黏附、聚集，本身就要具有一定的能量，線粒體是血小板產生能量的最主要場所，而血小板線粒體膜電位的高低反映血小板能量儲備力的大小[10]。有不少學者發現T2DM患者血小板MPV、PDW均大于對照組[8]，PLT數量下降[11]；Kroemer還發現血小板Δψm表達降低是細胞早期凋亡的重要反映指標[12]，MPV、PDW 的增高不僅與糖尿病密切相關，還是其微血管病變的一個高危因素[13]，PAgT含量越高，血小板更易發生黏附和聚集，血栓形成的可能性越大[14]。因此，本研究有理由認為，T2DM 患者可能長期處于內分泌紊亂的狀態，導致血小板自身能量消耗(PLT減少)，血小板提早凋亡(Δψm減低)，刺激機體骨髓本身生產大血小板代償(MPV和PDW升高)，血小板聚集功能加強(PAgT升高)，更易粘附，使血管形成微血栓。眾所周知，血小板表面相關膜糖蛋白由質膜糖蛋白(GPⅡb-Ⅲa、GPⅠa-Ⅱa 和GPⅠb-Ⅸ-Ⅴ等)和顆粒膜糖蛋白(CD62P和CD63)組成，參與血小板粘附、聚集和活化等一系列的反應，在血栓性疾病的發生與發展中起著重要作用[15]。其中CD62P是僅表達于靜息血小板a顆粒膜表面的一種蛋白[16]，正常情況下不表達或低水平表達[17]，而CD41b、CD61是以活性狀態存在于未被激活的血小板上，并不與黏附蛋白結合[18]。本研究結果顯示，T2DM組CD41b和CD62P表達水平均高于與正常對照組(P<0.05)，但CD61表達量與對照組比較差異無統計學意義(P>0.05)，可以認為T2DM患者機體受到高糖刺激，血小板a顆粒內的Weibel-palade小體迅速與細胞膜融合，使CD62P在短時間內高表達，促使血小板活化[19]，誘導血小板內質膜釋放增加及GPⅡb/Ⅲa (CD41b、CD61)復合物表達增加[20]。GPⅡb/Ⅲa 復合物表達增加介導血小板大量粘附在內皮細胞上，改變CD41b/CD61立體構型，促使GPIIb/IIIa與黏附蛋白結合，從而誘導血小板粘附、聚集和釋放等活化功能增強，形成血栓[21]，但其具體機制有待于進一步研究。另外，本研究血小板參數均采用檢測者的外周血，方便采集且檢測時間較短，大大減少體外人為因素對血小板的激活，可以快速、準確地得到檢測結果，因此建議臨床上可以將PLT計數、MPV、PDW、PAgT、Δψm、CD41b及CD62P等指標作為評估T2DM患者血管并發癥風險的早期指標，同時還可以對其病程進行及時的監控。

圖1 兩組被檢者ΔψmFig.1 Δψm in the two groups

注：A、B為CD62P，C、D為CD41b，E、F為CD61；A、C及E為對照組，B、D及F為T2DM組。圖2 兩組被檢者CD62P、CD41P及CD61Fig.2 ΔCD41b, CD61 and CD62P of the 2 groups

綜上所述，本研究結果表明血小板參數、血小板表面相關膜糖蛋白、線粒體膜電位表達異常可能參與了T2DM 的發生發展，但其具體機制有待于深入研究。同時，可將此類檢測指標作為T2DM血管并發癥風險的早期指標，值得在臨床上進一步推廣應用。