鯽魚腦孢子的早期檢測

祭仲石 朱建樓 韋 艷 王中清 厲成新

鯽魚腦孢子學(xué)名洪湖碘泡蟲，感染了洪湖碘泡蟲的鯽魚在咽喉部形成孢囊，孢囊內(nèi)存在大量孢子，隨著孢子蟲的繁殖，孢囊擴(kuò)大，咽喉部腫大，堵塞咽喉造成鯽魚吃食不便、體型消瘦、眼球突出、鰓蓋外張無法閉合。該病一般在每年6月中旬開始暴發(fā)，最長可持續(xù)到11月，廣泛流行于江蘇、湖北、湖南等地區(qū)，死亡率高達(dá)80%。不幸的是，到目前為止，對洪湖碘泡蟲的生活史、感染途徑等還不清楚，缺乏相關(guān)基礎(chǔ)研究，且洪湖碘泡蟲在鯽魚體內(nèi)形成成熟的孢子后，外面會形成堅硬的幾丁質(zhì)外殼，一般的藥物很難進(jìn)入，無法達(dá)到良好的治療效果，因此，對鯽魚腦孢子蟲的重點工作在于早期預(yù)防。

目前檢測腦孢子蟲主要以顯微鏡或者肉眼觀察發(fā)病部位判斷孢子蟲發(fā)病情況，檢測結(jié)果因人而異，準(zhǔn)確性低，時效性差，傳統(tǒng)方法難以有效診斷處于易于治療的營養(yǎng)體時期。因此我們使用分子生物學(xué)方法，探索分子檢測方法在鯽魚腦孢子蟲的早期檢測中的可行性，為鯽魚養(yǎng)殖過程中腦孢子蟲的早期防控提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

各種孢子蟲樣品和實驗魚樣品于2019年6月取自江蘇大豐某鯽魚養(yǎng)殖塘口，基因組DNA提取試劑盒、PCRMix采購自天根生化科技有限公司；溴化乙錠（EB）等購自北京艾德萊；擴(kuò)增引物由上海生工合成。

1.2 腦孢子蟲基因組的提取

在實驗室中，取6尾發(fā)病鯽魚，將咽喉部孢囊剪開，取100mg左右孢子蟲樣品，加100μL的0.7%生理鹽水稀釋后用細(xì)胞破碎器研磨成糊狀，再用基因組DNA 提取試劑盒，按照說明書進(jìn)行操作提取總基因組，基因組置于冰箱( -20 ℃) 中保存?zhèn)溆谩！?br>