不同濃度交泰丸及其組成藥物對小鼠鎮靜作用的比較

倪小芬，林思思，陳錢，袁拯忠

（1.溫州醫科大學附屬第一醫院 中醫科，浙江 溫州 325015；2.溫州醫科大學，浙江 溫州 325035）

交泰丸，名見清代《四科簡效方》，出自明代《韓氏醫通》，由黃連、肉桂組成，兩藥組方比例為10:1。本方藥味簡潔，配伍獨特，二藥寒熱相伍，清溫并用，以清為主，功能清心除煩，引火歸元，交通心腎，對心腎不交之失眠療效顯著，為后世廣泛推崇。臨床對交泰丸鎮靜助眠作用研究較廣泛，季旭明等[1]統計發現失眠證方180余方中黃連出現的方劑占26%，應用肉桂的方劑占17%，黃連與肉桂同時出現的方劑為16首，且大多出現在交泰丸問世之后。王秋等[2]驗證了交泰丸中黃連用量十倍于肉桂時抑制小鼠自發活動的效果最佳。汪文萊等[3]研究發現氨基酸是黃連配伍肉桂前后起作用的物質基礎之一，但影響氨基酸煎出量的因素并不是簡單的成分加合作用。這些研究都驗證了其治療鎮靜助眠的功效。配伍是中藥臨床應用的關鍵，本實驗旨在研究不同濃度的交泰丸及其拆方黃連、肉桂對小鼠的鎮靜作用，以驗證交泰丸的鎮靜作用和主要藥效組分，為其治療鎮靜失眠的機制研究和臨床應用提供依據。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物：SPF級C57/BL6 小鼠72 只，上海西普爾-必凱實驗動物有限公司提供，許可證號SCXK（滬）2013-0016，雄性，體質量（20±2）g，6周齡，飼養在恒溫、恒濕、隔音、靜電屏蔽、12 h/12 h明暗光照環境下，光照度≈100 lux。

1.1.2 實驗器材：動物行為學視頻系統和DigBehv動物行為分析系統（上海吉量軟件科技公司），申勝R502B型旋轉蒸發儀（上海科興儀器有限公司）。

1.1.3 實驗藥材：黃連（杭州華東中藥飲片有限公司，批號171009），肉桂（浙江中醫藥大學中藥飲片有限公司，批號170801），滅菌注射用水（安徽雙鶴藥業，批號1704126A）。酒石酸唑吡坦片（賽諾菲制藥，國藥準字J20140021）10 mg/片，研缽研細，用滅菌注射用水制成濃度0.200 mg/mL的溶液。黃連和肉桂10:1混勻，粉碎，加適量蒸餾水浸泡20 min、煎煮30 min，過濾、濃縮、精濾，制成交泰丸高濃度（0.220 g/mL）、交泰丸中濃度（0.110 g/mL）、交泰丸低濃度（0.055 g/mL），分別取黃連、肉桂，制成黃連高濃度（0.200 g/mL），黃連中濃度（0.100 g/mL），黃連低濃度（0.050 g/mL），肉桂高濃度（0.030 g/mL），均置于容量瓶中4 ℃冷藏備用。

1.2 方法

1.2.1 分組及給藥：72只小鼠分為9組，每組各8只，以上述配置好的溶液灌胃。每只小鼠灌胃量1次按照0.300 mL計算（1次不超過0.500 mL）。空白對照組給予等量的注射用水。

1.2.2 檢測方法及時間：每天19：00給藥。每組檢測前進隔音箱適應1 d。從第1 次給藥后開始檢測，用動物行為學視頻分析系統連續記錄給藥后第1、第3、第5、第7天給藥后15 min、30 min、1 h、3 h、12 h、24 h及停藥后第1天數據。

1.3 統計學處理方法 采用SPSS22.0統計學軟件進行數據處理分析。計量資料用表示，多時間點自主活動次數比較采用重復測量資料的方差分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組小鼠給藥后15 min自主活動次數 與空白對照組比較，第3、第5、第7天給藥后15 min，黃連高濃度組和黃連中濃度組自主活動次數減少，差異有統計學意義（P＜0.05）；其余各給藥組自主活動次數差異均無統計學意義（P＞0.05）；停藥后第1天各給藥組自主活動次數差異均無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

2.2 各組小鼠給藥后30 min自主活動次數 與空白對照組比較，第1、第3、第5、第7天給藥后30 min，交泰丸高濃度組、唑吡坦組自主活動次數減少，差異有統計學意義（P＜0.05）；停藥后第1天交泰丸高濃度組自主活動次數減少，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表1 各組小鼠給藥后15 min自主活動次數（每組8只，±s，×102）

表1 各組小鼠給藥后15 min自主活動次數（每組8只，±s，×102）

與空白對照組比：aP ＜0.05

2.3 各組小鼠給藥后1 h自主活動次數 與空白對照組比較，第1、第3、第5、第7天給藥后1 h，交泰丸高濃度組、唑吡坦組自主活動次數減少，差異有統計學意義（P＜0.05）；第3、第5、第7天給藥后1 h，交泰丸中濃度組、黃連高濃度組、黃連中濃度組自主活動次數減少，差異有統計學意義（P＜0.05）；第7天給藥后1 h，交泰丸低濃度組自主活動次數減少，差異有統計學意義（P＜0.05）；停藥后第1天，交泰丸高濃度組自主活動次數減少，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表2 各組小鼠給藥后30 min自主活動次數（每組8只，±s，×103）

表2 各組小鼠給藥后30 min自主活動次數（每組8只，±s，×103）

與空白對照組比：aP ＜0.05

表3 各組小鼠給藥后1 h自主活動次數（每組8只，±s，×103）

表3 各組小鼠給藥后1 h自主活動次數（每組8只，±s，×103）

與空白對照組比：aP ＜0.05

2.4 各組小鼠給藥后3 h自主活動次數 與空白對照組比較，第1、第3、第5、第7天給藥后3 h，交泰丸高濃度組、唑吡坦組自主活動次數減少，差異有統計學意義（P＜0.05）；第7天給藥后3 h，黃連高濃度組自主活動次數減少，差異有統計學意義（P＜0.05）；停藥后第1天交泰丸高濃度組自主活動次數減少，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表4。

表4 各組小鼠給藥后3 h自主活動次數（每組8只，±s，×103）

表4 各組小鼠給藥后3 h自主活動次數（每組8只，±s，×103）

與空白對照組比：aP ＜0.05

2.5 各組小鼠給藥后12 h自主活動次數 與空白對照組比較，給藥第1、第3、第5、第7天，交泰丸高濃度組、唑吡坦組給藥后12 h自主活動次數減少，差異有統計學意義（P＜0.05）；給藥第7天，黃連高濃度組給藥后12 h自主活動次數減少，差異有統計學意義（P＜0.05）；停藥后第1天，交泰丸高濃度組給藥后12 h自主活動次數減少，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表5。

表5 各組小鼠給藥后12 h自主活動次數（每組8只，±s，×104）

表5 各組小鼠給藥后12 h自主活動次數（每組8只，±s，×104）

與空白對照組比：aP ＜0.05

2.6 各組小鼠給藥后24 h自主活動次數 與空白對照組比較，給藥第1、第3、第5、第7天交泰丸高濃度組、唑吡坦組24 h自主活動次數減少，差異有統計學意義（P＜0.05）；給藥第7天，黃連高濃度組24 h自主活動次數減少，差異有統計學意義（P＜0.05）；停藥第1天，交泰丸高濃度組24 h自主活動次數減少，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表6。

3 討論

中醫理論認為睡眠和清醒是人體寐（睡）與寤（醒）之間陰陽動靜對立統一的功能狀態，并運用陰陽變化、營衛運行、心神活動來解釋睡眠過程，可以指導睡眠相關疾病的治療。通過國內外數據庫檢索和分析[4]，結合承擔的失眠多中心臨床研究結果[5]，陰虛火旺是失眠的主要證型。交泰丸以黃連大寒大苦，清泄亢盛之心火，肉桂辛甘大熱，助陽補火，引火歸源，二者交通心腎，成為歷代醫家治療心腎不交型失眠的經典方劑。方中黃連和肉桂均不屬于安神藥，卻都有鎮靜作用。黃連的活性成分為生物堿，其中主要的小檗堿和黃連堿可能通過增加PCPA失眠小鼠下丘腦中5-HT和NE含量，發揮鎮靜、催眠的作用[6]。肉桂的活性成分是揮發油，其中以肉桂醛為主，含少量桂皮酸等，肉桂醛對小鼠有明顯的鎮靜作用，桂皮醛有中樞抑制和興奮作用，可能是其與中樞神經內單胺能神經元相互作用的結果。

表6 各組小鼠給藥后24 h自主活動次數（每組8只，±s，×104）

表6 各組小鼠給藥后24 h自主活動次數（每組8只，±s，×104）

與空白對照組比：aP ＜0.05

黃連和肉桂均無安神之功，合用卻有助眠之效。目前藥代動力學研究發現交泰丸組方配伍改變可影響其生物利用率，盛亞男等[7]用高效液相色譜分析法發現交泰丸所含鹽酸小檗堿、肉桂酸和桂皮醛的含量與藥效呈正相關，三者可能主導交泰丸鎮靜催眠作用。白妮等[8]研究發現交泰丸黃連、肉桂配伍中，肉桂能提高黃連小檗堿的的生物利用度。朱雪梅等[9]研究發現交泰丸復方煎劑與黃連單煎劑總生物堿提取率存在差異，且隨肉桂比例提高，總生物堿煎出率降低。陳廣等[10]研究發現交泰丸水煎劑黃連對肉桂醛的溶出有抑制作用。HE等[11]對5種原小檗堿類生物堿藥代動力學研究發現交泰丸在PCPA失眠癥大鼠體內生物利用度較正常大鼠高，可充分發揮其治療作用，并且多次給藥有助于提高藥物吸收率和生物利用度。由此可見，合理的給藥和合理的黃連和肉桂配伍通過影響彼此的藥物代謝發揮較好的鎮靜催眠效果。ZOU等[12]發現交泰丸通過調節生物節律和調節炎癥因子改善胰島素耐受和炎癥引起的慢性失眠。劉光輝等[13]研究認為交泰丸改善PCPA導致的代謝紊亂，下調苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸、多巴胺、谷氨酸谷氨酰胺代謝等通路。有研究[14-16]發現交泰丸通過下丘腦5-HT、NE、覺醒肽Orexin A調節HPA軸改善大鼠失眠。

本研究結果表明高劑量交泰丸在給藥后30 min已經發揮鎮靜作用，表明交泰丸起效比較迅速。給藥后，藥效維持12 h，而且整個給藥期間，高劑量的交泰丸保持良好的鎮靜效果，即使在停藥后24 h仍然可以維持這樣的效果，體現中藥藥效的穩定性和持續性特點。與中低劑量交泰丸組比較，高劑量的交泰丸的鎮靜作用更加顯著，因此認為交泰丸存在劑量依賴性的鎮靜效果。高劑量黃連單藥連續給藥7 d后可以表現出鎮靜作用，其鎮靜作用也是集中在給藥后12 h。高劑量黃連單藥在第3、第5、第7天給藥后15 min、1 h及第7天給藥后3、12、24 h的自主活動次數減少，而停藥后自主活動恢復，表明黃連單藥的鎮靜作用起效較快，但是藥效缺乏穩定性和持續性。與之相反，高劑量的肉桂在整個給藥期間均沒有表現出良好的鎮靜作用，該藥可能沒有直接的鎮靜作用，但是可以協同黃連，使其具有更加穩定和持續的鎮靜效果。綜上所述，交泰丸的鎮靜作用與藥物劑量相關，并表現出中醫藥復方療效的持續性和穩定性優勢。交泰丸有鎮靜藥效，其中黃連發揮主要作用。