缺氧誘導因子與胎兒生長受限的相關性

黃紅麗，楊恒，姜艷華，劉曉瑛

胎兒生長受限（fetus growth reception，FGR）的病因研究受到廣大醫學領域的重視［1-2］。有研究顯示，胎盤的生長發育與多種血管生成因子密切相關，其缺血缺氧狀態可能會導致胎盤的發育不全［3］。同時有文獻報道，缺氧誘導因子-1α（hypoxia-inducible factor，HIF-1α）是胎盤進行血氧調和的主要因子之一，其具有細胞增殖作用［4-5］，但有關該因子與FGR的關系還有待深入研究。本研究通過對分娩前FGR母血、分娩后臍血及胎盤中HIF-1α進行檢測，同時于分娩前監測胎盤動脈收縮期/舒張期（systolicphase/diastolicphase，S/D）值，探討其與FGR的關系，現報告如下。

圖1 正常胎盤組織缺氧誘導因子-1α表達（免疫組織化學SP法×200） 圖2 胎兒生長受限胎盤組織缺氧誘導因子-1α表達（免疫組織化學SP法×200）

1 資料與方法

1.1一般資料選取2017年7月至2018年7月深圳市羅湖區婦幼保健院產檢的60例孕婦，納入標準：①單胎，②經期正常，③無家族遺傳史，④本人或其近親屬簽署知情同意書。排除標準：①合并其他妊娠癥，②有心、肝、腎、血液性等嚴重性疾病，③拒不配合者。將FGR 30例為FGR組，正常妊娠30例為健康組，其中FGR組：年齡（28.69±2.68）歲，范圍為23～35歲，分娩孕周（38.25±3.12）周，范圍為35～40周，孕次（1.58±0.68）次，范圍為1～3次，體質量指數（24.21±2.68）kg/m2，范圍為19.65～29.65 kg/m2；健康組：年齡（28.71±2.76）歲，范圍為23～36歲，分娩孕周（38.13±3.11）周，范圍為35～41周，孕次（1.51±0.65）次，范圍為1～3次，體質量指數（24.45±2.56）kg/m2，范圍為19.65～30.12kg/m2。兩組一般資料比較差均異無統計學意義（年齡：t=0.35，P=0.73；分娩孕周：t=0.41，P=0.71；孕次：t=0.52，P=0.69；體質量指數：t=0.37，P=0.72）。本研究符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》相關要求。

1.2方法檢測所有孕婦孕30～32周、分娩前的母體外周血、分娩后臍血的HIF-1α水平及胎盤組織中HIF-1α的表達，并檢測孕30～32周、分娩前的胎盤動脈S/D值，方法如下。

①血清及胎盤選取：所有孕婦于孕30～32周、分娩前抽取3 mL靜脈血置入無菌A試管中，胎兒順利產出后重復抽血操作，分離血清（3 000 r/min，10 min），冷凍存儲（溫度80℃）待檢，之后切取大小約為1 cm×1 cm×1 cm胎盤組織，選取依據避開梗死、出血、鈣化灶原則。

②血清檢測：采取酶聯免疫吸附法檢測HIF-1α水平；采取免疫組織化學SP法檢測胎盤組織中HIF-1α的表達，將所有胎盤組織經10%甲醛固定和石蠟，包埋后，連續切片進行脫蠟，切片厚度均為4 μm，之后由高濃度到低濃度乙醇（95%乙醇2 min→95%乙醇2 min→70%乙醇1 min→蒸餾水1 min→蒸餾水1 min）進行水化，給予檸檬酸（pH 6.0）高壓熱修復：噴氣2 min，冷卻后用蒸餾水清洗，描線上機（PBS預洗一次→3%過氧化氫10 min→PBS緩沖液沖洗1次→一抗孵育60 min→PBS緩沖液沖洗1次→二抗孵育15 min→PBS緩沖液沖洗2次→DAB顯色4 min→蒸餾水沖洗2次），最后用蘇木素快速染水中返藍，吹干封片，以PBS緩沖液代替一抗作陰性對照，并設陽性對照，實驗步驟嚴格按照試劑盒說明書操作，所有試劑盒均購自廣州易錦生物技術有限公司。

③胎盤動脈S/D值：采取多普勒超聲診斷儀對孕婦胎盤血流動力學情況進行彩色多普勒血流顯像（CDFI）監測，從胎盤根部與臍動脈對應的小動脈開始采集，頻率為4MHz，確保血流波采集線平行于靶動脈血管方向，且聲束與血流夾角＜15°，波形穩定后停幀，分析測得S/D。每次樣至少獲取5個以上波形，每次測定3次，取平均值。

1.3指標觀察和標準統計分析所有孕婦孕30～32周、分娩前的母體外周血、分娩后臍血的HIF-1α水平及胎盤組織中HIF-1α的表達，并檢測孕30～32周、分娩前的胎盤動脈S/D值，其中HIF-1α表達應在高倍視野（×200倍），按隨機數字表法選擇5個視野觀察，根據SP法染色以細胞漿中出現變異性染色的深淺進行評分，陽性強度以無色為0分；淡黃色為1分；黃色為2分；棕黃色為3分。根據組織染色細胞所占總細胞數百分比評分：陽性細胞數＜5%為陰性（0分）；5%～25%（1分）；26%～50%（2分）；51%～75%（3分）；＞75%（4分）。兩者評分相乘，0分為陰性（-），1～4分為弱陽性（+），5～8分為陽性（++），9～12分為強陽性（+++），方便試驗操作和分析，用（-）代表陰性，（+）（++）（+++）代表陽性，陽性代表高表達［6-7］。

1.4統計學方法采用SPSS 22.0軟件處理數據。計數資料以例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。計量資料（符合正態分布）以±s表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗。兩變量關聯性分析采用Pearson相關性分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1兩組各孕周母體外周血、臍血的HIF-1α水平比較FGR組孕婦孕30～32周、分娩前的母體外周血，分娩后臍血的HIF-1α水平明顯高于健康組（P＜0.05），見表1。

表1 胎兒生長受限（FGR）組和胎兒健康組各孕周母體外周血、分娩后臍血的HIF-1α水平比較/（pg/L，±s）

表1 胎兒生長受限（FGR）組和胎兒健康組各孕周母體外周血、分娩后臍血的HIF-1α水平比較/（pg/L，±s）

組別健康組FGR組t值P值例數30 30孕30～32周48.23±4.65 118.36±12.21 29.399＜0.001分娩前47.69±4.38 119.25±12.31 29.998＜0.001分娩后臍血48.11±4.85 120.08±13.12 28.182＜0.001

2.2兩組分娩后胎盤組織中HIF-1α的表達比較FGR組孕婦分娩后胎盤組織中HIF-1α的陽性表達43.33%（13/30）明顯高于健康組6.67%（2/30），差異有統計學意義（χ2=10.756，P=0.001），見圖1，2。

2.3兩組同孕周的胎盤動脈S/D值比較FGR組孕婦孕30～32周、分娩前的胎盤動脈S/D值明顯高于健康組（P＜0.05），見表2。

表2 胎兒生長受限（FGR）組和胎兒健康組同孕周的胎盤動脈S/D值比較/±s

表2 胎兒生長受限（FGR）組和胎兒健康組同孕周的胎盤動脈S/D值比較/±s

組別健康組FGR組t值P值例數30 30孕30～32周2.41±0.29 3.51±0.48 10.743 0.000分娩前1.98±0.23 3.35±0.54 12.785 0.000

2.4分娩前母血HIF-1α水平與分娩后胎盤HIF-1α表達的Pearson相關性分析Pearson相關性分析顯示，分娩前母血HIF-1α與分娩后胎盤HIF-1α表達呈正相關（r=0.615，P=0.005）。

3 討論

近年來，我國生育政策改變，FGR發病率日益上升，因此如何降低FGR的發生具有重要的臨床價值［8-9］。

有研究顯示，從受精卵開始植入子宮內膜至胎兒足月分娩的整個妊娠過程中，胎盤的氧濃度在每個妊娠階段都在發生變化，這種氧濃度變化構成了胎盤發育的必要條件，提示胎盤成長可能與其血氧供應密切相關［10］。文獻報道，HIF-1α是臨床常見的血氧調節指標，可有效改善細胞的發育及機體的免疫功能，尤其在細胞低氧應答機制中扮演重要角色，當細胞處于持續缺氧狀態時，其水平會發生異常變化［11］。此外，胎盤動脈S/D值是反映血管的血流變化，其與胎盤的生長發育密切相關［12］。

對此，本研究通過檢測所有孕婦的HIF-1α及胎盤動脈S/D值，結果發現FGR組孕婦孕30～32周、分娩前的母體外周血、分娩后臍血的HIF-1α水平明顯高于健康組，FGR組孕婦分娩后胎盤組織中HIF-1α的陽性表達明顯高于健康組。蔣玲玲等［13］學者的研究結果也提示HIF-1α的變化與FGR的發生有關，本研究與此基本一致。說明FGR孕婦在不同孕周期均出現高水平HIF-1α表達，進一步提示FGR存在持續性缺氧狀態。這可能是正常的胚胎發育是在缺氧的環境中進行，此環境有利于毛細血管的形成，且隨著胚胎逐漸成形，血管內皮細胞向外擴散，并加大血管，提高血液流動和滲透能力，進一步波及蛻膜組織，增加新生血管，而此時子宮胎盤動脈循環建立，胚胎擺脫缺氧環境，母體通過動脈循環源源不斷往胎兒注入高氧物質，保障胎兒正常發育，HIF-1α水平恢復正常。而當孕婦出現FGR疾病時，胚胎的發育可能因絨毛小動脈水腫、痙攣、閉塞等因素導致血管內皮細胞無法向外擴張，繼而影響及蛻膜組織正常功能，最終導致胎盤血流灌注變小，無法增加新生血管，使宮內缺氧環境持續保持，影響胎兒生長發育。同時本研究還發現FGR組孕婦孕30～32周、分娩后的胎盤動脈S/D值明顯高于健康組，表明FGR孕婦在不同孕周期的胎盤動脈S/D值存在異常，進一步提示此時胎兒可能存在供血不暢狀態。究其原因可能是當胎兒發育不良時，胎盤的生長和發育受到阻滯，導致胎盤的血管不暢，營養無法正常供應，從而影響血流阻力和血流速度，最終造成血流比值降低幅度變緩［13-14］。故檢測孕婦的胎盤動脈S/D可預測胎兒的發育狀態。此外，Pearson相關性分析顯示，分娩前母血HIF-1α與分娩后胎盤HIF-1α表達呈正相關（P＜0.05），提示臨床醫生可在FGR孕婦產檢時定期檢測血清HIF-lα水平以評估胎兒的發育情況。若其水平變化異常，可結合胎兒胎盤動脈S/D值來指導產科醫生處理FGR［15］。

綜上所述，母血中HIF-1α水平、胎盤動脈S/D值可間接評估FGR孕婦胎盤功能狀態或胎兒宮內狀況。孕期可通過監測孕婦血清HIF-1α的水平、胎盤動脈S/D值來指導產科醫生處理FGR。（本文圖1，2見插圖10-4）