多囊卵巢綜合征患者血清中IL-33、sST2及AMH水平表達(dá)及臨床意義

鄧燕群 劉翠玉 尹志華 張?jiān)势?羅秀霞

1.深圳市福田區(qū)風(fēng)濕病專科醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東深圳 518040；2.中山大學(xué)附屬第八（福田）醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東深圳 518040

多囊卵巢綜合征（polycystic ovarian syndrome，PCOS）是生育年齡婦女常見(jiàn)的一種復(fù)雜的內(nèi)分泌及代謝異常所致的疾病，以慢性無(wú)排卵（排卵功能紊亂或喪失）和高雄激素血癥（婦女體內(nèi)男性激素產(chǎn)生過(guò)剩）為特征，臨床癥狀呈極度多樣化，主要表現(xiàn)為月經(jīng)周期不規(guī)律、慢性無(wú)排卵、高雄激素血癥和卵巢多囊樣改變，并常伴有胰島素抵抗和肥胖，從而影響PCOS 患者卵泡發(fā)育、排卵障礙及多濾泡卵巢潮形成等多種因素導(dǎo)致女性不孕不育，發(fā)病率約5%～10%，其中75%無(wú)排卵性不孕女性為PCOS[1-2]。PCOS 不僅遷延期較長(zhǎng)，且病情具有隱匿性，難以發(fā)現(xiàn)，臨床多以B 超檢查來(lái)協(xié)助診斷，但由于B 超無(wú)法對(duì)患者卵泡組織進(jìn)行準(zhǔn)確計(jì)數(shù)，準(zhǔn)確性低[3-4]。因此，探索新的診斷方法，對(duì)及早診斷PCOS 患者并及時(shí)采取治療，降低孕齡女性的不孕率具有重要意義。本文通過(guò)對(duì)PCOS 血清中IL-33、sST2 及AMH 水平進(jìn)行了檢測(cè)分析，發(fā)現(xiàn)IL-33、sST2 及AMH 水平對(duì)PCOS 患者的早期診斷具有一定的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2016 年3 月～2018 年6 月來(lái)中山大學(xué)附屬第八（福田）醫(yī)院就診并確診為PCOS 患者192例，年齡19 ～48 歲，平均（28.0±10.6）歲，其中＜25 歲47 例、25 ～30 歲52 例、31 ～40 歲39 例、41 ～45 歲30 例 及＞45 歲24 例。PCOS 診 斷 參照2003 年鹿特丹診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]：①稀發(fā)排卵或無(wú)排卵；②高雄激素血癥，并排除其他可能病因，如先天性腎上腺增生、分泌雄激素腫瘤、Cushing 綜合征等；③卵巢多囊性改變（PCO）：B 超檢查示至少一側(cè)卵巢有≥12 個(gè)直徑2 ～9mm 卵泡，和（或）卵巢體積增大＞10mL，符合其中兩項(xiàng)者診斷為PCOS。所有PCOS 患者同時(shí)測(cè)定催乳素、促甲狀腺激和17a-羥孕酮，排除高催乳素血癥、甲狀腺功能紊亂和先天性腎上腺增生癥。并選擇同期未孕健康孕齡婦女120例為對(duì)照組，年齡20 ～51 歲，平均（29±11.7）歲。經(jīng)體格檢查：月經(jīng)和性激素均正常、體重指數(shù)18 ～24kg/㎡、身體健康、無(wú)內(nèi)分泌疾病、無(wú)卵巢相關(guān)病史、無(wú)高脂血癥、惡性腫瘤、自身免疫系統(tǒng)疾病、腫瘤化療或者放療病史、卵巢切除手術(shù)史、器官移植手術(shù)史、肝腎肺功能不全病史和3 個(gè)月內(nèi)未服用過(guò)避孕藥，月經(jīng)周期平均28 天（25 ～35）d。確保兩組的一般性資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05），同時(shí)本研究已經(jīng)同患者知情，簽定知情同意書，并經(jīng)同醫(yī)院倫理委員會(huì)同意審批。

1.2 儀器與試劑

IL-33 和sST2 試劑盒由自美國(guó)R&D 公司提供（批 號(hào)：2017031201，2018011503）；AE275 全 自 動(dòng)酶免分析儀由深圳市愛(ài)康生物科技有限公司提供；DXI800 化學(xué)反光免疫分析儀、試劑、校準(zhǔn)品及質(zhì)控物均由美國(guó)Bankman 公司提供（批號(hào)：2016061105，2017042010，2018041812）。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集 所有研究對(duì)象均于清晨空腹用一次性無(wú)菌采血針采取靜脈動(dòng)血3 ～5mL 于干燥無(wú)抗凝劑管內(nèi)，及時(shí)送檢。

1.3.2 標(biāo)本檢測(cè) 標(biāo)本置室溫30min 后于離心機(jī)內(nèi)，3500r/min 離心5min，分離血清及時(shí)檢測(cè)，不能及時(shí)檢測(cè)的標(biāo)本須保存于-20℃冰箱內(nèi)保存。冰凍后的標(biāo)本檢測(cè)時(shí)須取出于37℃溫箱內(nèi)30min，待完全復(fù)溶再進(jìn)行檢測(cè)。AMH 濃度采用化學(xué)發(fā)光免疫法檢測(cè)，檢測(cè)前須對(duì)DXI800 儀器進(jìn)行保養(yǎng)、校正和室內(nèi)質(zhì)控檢測(cè)，待室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果在控后再檢測(cè)研究標(biāo)本，確保結(jié)果的準(zhǔn)確性，所有操作均嚴(yán)格按照儀器和試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。IL-33 和sST2 檢測(cè)采用ELISA 法，檢測(cè)前須對(duì)AE275 全自動(dòng)酶免分析儀進(jìn)行保養(yǎng)和校正，操作應(yīng)嚴(yán)格按儀器和試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，每批次試驗(yàn)均設(shè)有陰性、陽(yáng)性及質(zhì)控孔平行孔同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，待陰性、陽(yáng)性及質(zhì)控孔的OD 值在試劑盒說(shuō)明書上規(guī)定的允許范圍內(nèi)才能判讀研究標(biāo)本結(jié)果，否則重新試驗(yàn)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用Graphpad Prism 5 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以（）表示，釆用t 檢驗(yàn)，多組間比較采用F 檢驗(yàn)，并采用Pearson 法對(duì)PCOS 患者血清中IL-33、sST2 及AMH 水平之間進(jìn)行相關(guān)性分析，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PCOS患者與健康對(duì)照組血清中IL-33、sST2及AMH水平比較

PCOS 患者血清中IL-33、sST2 及AMH 水平明顯高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 PCOS患者血清中IL-33、sST2及AMH之間相關(guān)性分析

通 過(guò)Pearson 法 對(duì)IL-33、sST2 及AMH 水 平之間相關(guān)性分析，PCOS 患者血清中IL-33 與sST2、IL-33 與AMH 及sST2 與AMH 水平之間均呈正相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)r=0.9145、0.6252 及0.7168，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。

表1 PCOS患者與健康對(duì)照組血清中IL-33、sST2及AMH水平比較（）

表1 PCOS患者與健康對(duì)照組血清中IL-33、sST2及AMH水平比較（）

?

2.3 不同年齡段PCOS患者血清中IL-33、sST2及AMH水平比較

各年齡組PCOS 患者血清中IL-33、sST2 及AMH 水平之間差異均統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=2.7061，3.5024，6.0835，P ＜0.05），且隨著年齡的增長(zhǎng)呈逐步下降趨勢(shì)。見(jiàn)表2。

表2 不同年齡段PCOS患者血清中IL-33、sST2及AMH水平比較（）

表2 不同年齡段PCOS患者血清中IL-33、sST2及AMH水平比較（）

?

3 討論

PCOS 是女性常見(jiàn)的一種內(nèi)分泌紊亂性疾病，其病因尚未明確，目前多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，PCOS 發(fā)病跟環(huán)境、遺傳、慢性炎癥、自身免疫等諸多因素有關(guān)，其中慢性炎癥和自身免疫研究成為熱點(diǎn)。國(guó)內(nèi)外很多研究結(jié)果顯示，調(diào)節(jié)原始卵泡向初級(jí)卵泡發(fā)育的內(nèi)在調(diào)控因子的缺乏或失衡是導(dǎo)致PCOS 發(fā)病的重要機(jī)制之一，生長(zhǎng)因子、神經(jīng)肽等是被廣泛研究的潛在的卵巢內(nèi)調(diào)節(jié)因子，而細(xì)胞因子為重要的卵巢調(diào)節(jié)因子之一[6]。

IL-33 是2005 年才被發(fā)現(xiàn)的一種新型細(xì)胞因子，為白細(xì)胞介素1（IL-1）家族中的新成員，可表達(dá)于上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞及感染期的組織基質(zhì)細(xì)胞和骨髓細(xì)胞上，可能通過(guò)調(diào)節(jié)CD8T、NK、NKT、Thl 和Th2 等免疫細(xì)胞激活多種炎癥細(xì)胞，產(chǎn)生多種炎癥因子[7]。IL-33 可誘發(fā)Th1 細(xì)胞因子IFN-γ 的增加，IFN-γ 和TNF-a 反過(guò)來(lái)又可以增加IL-33 的水平表達(dá)[8]。可溶性ST2（sST2）為IL-33 的可溶性受體，可表達(dá)于多種免疫細(xì)胞，其在感染或損傷時(shí)通過(guò)增進(jìn)Th2 型細(xì)胞因子的釋放發(fā)揮生物學(xué)作用。IL-33 與其受體可溶性受體ST2（sST2）結(jié)合后通過(guò)IL-33/ST2L 信號(hào)通路的激活可以活化Th2 細(xì)胞，促進(jìn)IL-4、IL-5、IL-13 及IFN-a等Th2 細(xì)胞因子釋放，對(duì)于啟動(dòng)炎癥的發(fā)生，促進(jìn)炎癥的發(fā)展都起著重要的作用，而TN F-a 可會(huì)介導(dǎo)PCOS 患者胰島素抵抗（insulinresistance，IR）的形成和發(fā)展，進(jìn)一步促成高雄激素血癥的形成[9-11]。本研究結(jié)果顯示，PCOS 患者血清中IL-33 和sST2水平表達(dá)明顯高于健康對(duì)照婦女，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05），這可能與PCOS 患者機(jī)體免疫應(yīng)答過(guò)度活化有關(guān)外。另外，IL-33 和sST2 水平表達(dá)增加的幅度隨著PCOS 患者年齡的增加而呈逐漸下趨勢(shì)，這可能與機(jī)體隨著年齡增加而人體免疫應(yīng)答能力逐漸下降有關(guān)。

AMH 是生長(zhǎng)和分化因子超家族中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF）B 家族中的成員之一，類似于抑制素和激活素。AMH 是一種二聚體糖蛋白，主要由竇前卵泡和小竇狀卵泡分泌，而較大的竇狀卵泡中水平表達(dá)低[12]、FSH 依賴優(yōu)勢(shì)卵泡和閉鎖卵泡中均不表達(dá)。AMH 主要生理作用是在卵泡募集早期起調(diào)控作用，抑制卵泡從始基卵泡到竇狀卵泡的初級(jí)募集[13]。研究發(fā)現(xiàn)，AMH 水平與2 ～5mm 大小的竇狀卵泡（AFC）和始基卵泡池的數(shù)目多少有較強(qiáng)的正相關(guān)性[14-15]，且PCOS 患者AFC 數(shù)為正常人群的2 ～3 倍[16-17]。本研究結(jié)果顯示，PCOS 患者血清中AMH 水平明顯高于健康對(duì)照婦女，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05），與國(guó)內(nèi)外相關(guān)報(bào)導(dǎo)相一致[5，14，16-17]，這可能與AMH 對(duì)原始卵泡的發(fā)育有抑制作用有關(guān)，也說(shuō)明了血清中AMH 水平檢測(cè)對(duì)PCOS 患者的早期診斷具有一定的參考價(jià)值。

綜以上述，PCOS 患者血清中IL-33、sST2 及AMH 水平表達(dá)明顯增高，在排除了其他影響IL-33、sST2 及AMH 水平表達(dá)增高因素外，血清中IL-33、sST2 及AMH 水平表達(dá)增高對(duì)PCOS 患者的診斷具有一定的參考價(jià)值，值得臨床推廣應(yīng)用。