海濱錦葵提取物對異育銀鯽生長和非特異性免疫的影響

胡佩紅 季海波

摘 要：為研究海濱錦葵提取物對異育銀鯽生長性能及非特異性免疫的影響，以異育銀鯽幼魚為試驗對象，在其基礎日糧中添加不同水平的海濱錦葵提取物，研究不同水平海濱錦葵提取物對其生長性能、超氧化物歧化酶、溶菌酶、過氧化氫酶活性及丙二醛含量的影響。結果表明，試驗組飼料系數顯著降低，可有效提高異育銀鯽的免疫機能和生長性能。

關鍵詞：海濱錦葵;異育銀鯽;非特異性免疫;生長性能;提取物

中圖分類號 R285文獻標識碼 A文章編號 1007-7731（2019）16-0015-03

Abstract：In order to study the effects of extracts of Kostelezkya virginica on growth performance and non-specific immunity of allogynous crucian carp. Different levels of extracts of Kostelezkya virginica were added to the basic diets of allogynous crucian carp. The control group did not add extracts of mallow，the basic diets of treatment group （group I～IV） were added 40 g，80 g，120 g and 160g extracts of Kostelezkya virginica in turn per ton. The effects of different levels extracts of Kostelezkya virginica on its growth performance，superoxide dismutase，lysozyme，catalase activity and malondialdehyde content were studied. The results showed that the growth performance of allogynous silver crucian carp could be improved in the test group，and the best effect was found in the test group II. Compared with the control group，the feed coefficient decreased significantly to 1.56（P<0.05），17.46% （p < 0.05），44.08%（P<0.05），62.03%（P<0.05），catalase activity increased by 44.44%（P<0.05），and malondialdehyde content decreased by 58.48%（P<0.05）. Therefore，the Kostelezkya virginica extracts can effectively improve the immune function and growth performance of allogynous silver crucian carp，and the optimum dosage is 80 mg/kg.

Key words：Kostelezkya virginica;Allogynous silver crucian carp;Non-specific Immune;Growth Performance;Extracts

海濱錦葵（Kostelezkya virginica）是錦葵科錦葵屬草本植物，天然分布于美國東部沿海的特拉華州至得克薩斯州的鹽沼海岸帶，1993年由南京大學欽佩教授引入中國，并經實驗室及野外生理生態試驗證明其活性成分對哺乳動物無毒且無致突變作用，其提取物可安全應用[1-2]。海濱錦葵塊根和葉片中富含無糖、皂苷、黃酮等生物活性成分，具有很好的增強免疫和抗腫瘤作用。運用海濱錦葵根粉或葉片為原料提取有效成分，針對畜禽和水產的不同養殖階段開發不同類型飼用免疫增強劑，提高集約化養殖的畜禽和水產動物免疫力，完全或大部分替代抗生素，在促進養殖效益提高的同時，為市場提供安全的養殖食品。

隨著人們對畜禽和水產類食品安全性不斷重視，純天然、綠色、安全的飼用添加劑的需求量將逐步提高。國內現有的植物源飼用添加劑主要以中草藥為主，其種植加工成本偏高和用量偏大限制了市場的需求。如黃芪等中草藥原料植物需要良田種植，在水肥條件保證的情況下，黃芪藥用部分根的產量為3750～4500kg/hm2，而市場需求的黃芪多糖需要進一步加工，有效應用劑量為1‰以上。其他的植物源飼用添加劑仍在研發之中，尚未形成市場規模，導致增強畜禽和水產機體免疫力的添加劑仍然以抗生素類為主。海濱錦葵體內富含多種生物活性物質，其含量明顯超過其他一般中草藥，在飼料中低用量添加即可起到顯著效果，具有純天然、綠色安全、成本低、效益好的優勢，可運用于綠色飼用添加劑。本研究旨在將海濱錦葵提取物作為飼用添加劑添加至異育銀鯽飼料中，通過考察其對異育銀鯽的生長性能和超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）、溶菌酶（Lysozym，LZM）、過氧化氫酶（Catalase from bovine liver，CAT）活性及丙二醛（Malonic dialdehyde，MDA）等非特異性免疫指標的影響，以期獲得海濱錦葵提取物在異育銀鯽基礎日糧最佳添加水平，為開發天然、綠色、安全的飼用免疫增強劑與促生長添加劑提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 異育銀鯽，體重量30～40g，試驗前經馴養2周，淘汰體質弱及帶病個體，由宿遷三新農業有限公司提供;海濱錦葵提取物，活性成分含多糖、皂苷、黃酮（根粉多糖≥10.00%、根粉皂苷≥3.50%、根粉黃酮≥0.50%），由江蘇海力發生物科技有限公司提供;超氧化物歧化酶活試劑盒、過氧化氫酶活試劑盒、丙二醛測定試劑盒、溶壁球菌粉，均購于南京建成生物工程研究所;試驗用缸：玻璃鋼材質，圓柱體水槽，高度90cm，直徑90cm，淮安正昌飼料有限公司提供。

1.2 主要儀器 MIX1000型旋渦混合儀（ 杭州瑞成儀器有限公司），HWS-12電熱恒溫水浴鍋（上海一恒儀器有限公司），Alpha-1900Plus紫外可見光分光光度計（上海譜元儀器有限公司），AXTGL16A臺式高速冷凍離心機（ 鹽城市安信實驗儀器有限公司）。

1.3 日糧配方組成 以淮安正昌飼料有限公司異育銀鯽幼魚飼料為基礎日糧，對照組不添加海濱錦葵提取物，試驗組（Ⅰ～Ⅳ組）每噸依次分別添加40g、80g、120g和160g的海濱錦葵提取物。對照組與試驗組日糧配方組成與營養水平見表1、表2。

1.4 養殖試驗 選擇體質健壯、大小基本一致的經馴養后的異育銀鯽魚種為試驗對象，每缸投放40尾，每組試驗各設3個重復，共15缸。采用淮安正昌飼料有限公司恒溫循環水養殖系統，水溫控制在25±1℃，溶解氧保持在5.0mg/L以上，氨氮小于0.3mg/L，pH約為7.0，晝夜充氣，每隔2d換水1次，每次換水2/3，以保證水質清新。飼料投喂量根據魚體重及馴養時實際攝食量確定，投喂量約為體重的4.0%～4.5%。每2周稱重1次，同時調整投飼量。每日定點定時投喂4次，時間為8∶00，11∶00，13∶00，17∶00，飽食投喂，觀察攝食情況。養殖周期91d，記錄初均體重量、末均體重量、末均體長、總投餌量、總殘餌量，計算飼料系數、體重增長率和肥滿度。

1.5 生長性能指標計算方法[3] 體重增長率（%）=[（末均體重量-初均體重量）/初均體重量×100]; （1）

飼料系數=（總投餌量-總殘餌量）/（末均體[重]量-初均體[重]量）; （2）

肥滿度（%）=末均體[重]量（g）/末均體長3（cm3）×100; （3）

1.6 血清非特異性免疫指標[4-6] 飼養試驗結束后，每缸隨機取魚3尾，于尾靜脈處采血，置于2mL離心管中，于4℃、3000r/min下，離心10min，收集上層血清，-18℃冰箱冷凍，備用，分別用于測定SOD、CAT、LZM活性和MDA含量。

1.6.1 SOD活性測定 采用黃嘌呤氧化酶法測定SOD活性，使用購自南京建成生物技術研究所的SOD測試盒進行測定，操作步驟參考試劑盒步驟進行。按下公式計算的超氧化物歧化酶活性：

1.6.2 LZM活性測定 參考王銳[7]的方法進行，略有改動，用0.067mol/L，pH6.4的磷酸鹽緩沖液溶解溶壁微球菌粉制成0.2mg/mL的菌懸液。每個樣品取3.0mL菌懸液，吸取血清0.04mL加入到菌懸液中，立即混勻并在540nm下測定吸光值A0。然后在30℃水浴中保溫20min，取出后置于4℃冰浴中終止反應，再次測定吸光值A。按下公式計算溶菌酶的活性U：[U=（A0-A）/A0]。

1.6.3 MDA含量測定 采用南京建成生物工程研究所生產的試劑盒測定丙二醛含量，測定步驟按照試劑盒說明書操作。樣品中MDA含量按以下公式計算：

1.6.4 CAT活性測定 采用鉬酸銨法測定CAT活性，使用購自南京建成生物技術研究所的CAT測試盒進行測定，操作步驟參考試劑盒步驟進行。

1.7 數據處理方法 采用SPSS 22.0軟件進行單因素方差分析、Duncan法多重比較。試驗數據采用平均值±標準差來表示，顯著性水平為P<0.05。

2 結果與分析

2.1 對生長性能的影響 由表3可知，添加海濱錦葵提取物試驗組與對照組相比，末體均重和體重增長率均有顯著提高（P<0.05），飼料系數均顯著降低（P<0.05）而肥滿度差異不顯著（P>0.05）。其中添加量為80-120mg/kg飼料的試驗Ⅱ、Ⅲ組，體重增長率極顯著高于其他試驗組（P<0.01），飼料系數極顯著低于其他試驗組（P<0.01）。試驗Ⅱ、Ⅲ組體重增長率相比對照組分別提高了31.27%和28.54%，飼料系數由對照組的1.89降低至1.56和1.59，分別降低了17.46%和15.87%，因此試驗Ⅱ、Ⅲ組海濱錦葵添加量顯著提高了異育銀鯽的生產性能。綜合考慮生長性能及生產成本，每噸配合飼料中的海濱錦葵提取物的添加量以80g為宜。

2.2 對血清非特異性免疫指標的影響 由表4可知，相比對照組，試驗Ⅰ～Ⅳ組血清中SOD、CAT和LZM活性均顯著提高（P<0.05），而試驗組MDA含量均顯著低于對照組（P<0.05）。其中試驗Ⅱ組Ⅲ組的4項指標差異極顯著，SOD活性分別提高了44.08%和38.57%，CAT酶活分別提高了62.03%和55.59%，LZM分別提高了44.44%和42.22%，而MDA含量分別降低了58.48%和57.67%。由此可見，向異育銀鯽配合飼料中添加一定量的海濱錦葵提取物，顯著提高了異育銀鯽的免疫力，其中以每噸配合飼料添加80g海濱錦葵提取物能最有效提高異育銀鯽的免疫力。

3 結論與討論

魚類血清中SOD、CAT、LZM活性及MDA含量是衡量魚類非特異性免疫力的主要評價指標。其中SOD是魚體重要的抗氧化酶，其主要功能是清除體內自由基;CAT是魚體防御體系的關鍵酶之一，其主要功能是分解魚體內的H2O2，生成H2O，從而使機體避免H2O2的毒害;MDA是魚體內脂質過氧化反應的氧化終產物，脂質過氧化會引起細胞損傷，因此血液中丙二醛的含量可以間接地反映機體內細胞的損傷程度[4]。而魚類血清中LZM主要針對G+菌發揮作用，對一些G-菌如傷寒桿菌、嗜水氣單胞菌等也有作用，在防御病原入侵上起著重要作用，在魚類的非特異性免疫中也起著至關重要的作用[7]。本研究向異育銀鯽配合飼料中添加不同水平的海濱錦葵提取物，考察其對異育銀鯽生長性能及非特異性免疫指標的影響，綜合考慮生長性能和生產成本，確定了每噸配合飼料中添加80g海濱錦葵提取物可以最有效提高異育銀鯽的免疫機能，從而大大提高了異育銀鯽的生產性能。因此，本研究成果將為海濱錦葵提取物在動物飼料中的應用提供了數據基礎，具有一定的現實意義。

參考文獻

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（責編：楊 林）