對平衡鹽沖洗液中雜質葡萄糖二酸鈉的研究

俞幸嘉， 陳 婧

(東莞市人民醫院， 廣東 東莞 523059)

平衡鹽沖洗液為手術用沖洗液，在國家標準中沒有收載雜質的檢查項目，也未見有相關的報道，但該產品為手術使用，會直接接觸創口，對雜質也是有控制的必要。葡萄糖二酸鈉雜質為本品原料葡萄糖酸鈉生產過程中由葡萄糖過氧化產生，筆者采用陽離子色譜法對該產品的葡萄糖二酸鈉雜質檢查進行了研究并建立了檢測方法。

1 儀器與試藥

Waters2695高效液相色譜儀(2487紫外檢測器)；Waters2695高效液相色譜儀(2996 DAD檢測器)；BT125D 電子天平(十萬分之一)賽多利斯公司；色譜柱：Agilent TC-C18色譜柱(250×4.6 mm，5μm)；色譜甲醇(天地公司)；硫酸(國藥集團化學試劑有限公司)、純化水；葡萄糖二酸鉀對照品(SIGMA，以葡萄糖二酸根折算葡萄糖二酸鈉的含量)；研究用樣品(平衡鹽沖洗液，河北天成藥業生產)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

選用氫型陽離子交換色譜柱；以0.025 mol/L的硫酸溶液為流動相；用水為稀釋溶劑；檢測波長210 nm[1]；柱溫30℃；流速1.0 mL/min；進樣量20 μL。

2.2 供試品溶液與對照溶液的配制

供試品溶液：取本品作為供試品溶液。對照溶液：精密量取供試品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，加稀水稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。

2.3 葡萄糖二酸鈉的定位

分別取質量研究用樣品制成有關物質項下的供試品溶液和25.0 μg/mL的葡萄糖二酸鈉(以葡萄糖二酸根計為22.5 μg/mL)對照品溶液，按上述確定的色譜條件，進樣20 μL并定位，結果葡萄糖二酸鈉于4.996 min出峰；供試品溶液中葡萄糖酸鈉于保留時間5.358 min出峰，并分離出保留時間與葡萄糖二酸鈉接近的4.969 min的雜質。見圖1。

1為雜質葡萄糖二酸鈉；2為主成分葡萄糖酸鈉圖1 紫外檢測器

為進一步確認本品有關物質檢查項下供試品溶液保留時間4.969 min雜質即為葡萄糖二酸鈉，另取上述葡萄糖二酸鈉對照品溶液與上述有關物質檢查項下供試品溶液按1∶1混勻后進樣40 μL，結果葡萄糖二酸鈉保留時間為4.920 min，葡萄糖酸鈉保留時間為5.358 min；葡萄糖二酸鈉與原供試品溶液中保留時間為4.969 min的雜質峰重疊。我們通過二極管陣列檢測器，對混合溶液中的雜質進行峰純度檢查，結果葡萄糖二酸鈉的純度角為7.986，小于要求的閾值8.621，表明混合溶液中葡萄糖二酸鈉為純峰，原供試品溶液中保留時間為4.969 min的雜質為葡萄糖二酸鈉，葡萄糖二酸鈉為已知結構的雜質，確定采用外標法對葡萄糖二酸鈉進行檢查。見圖2。

1為雜質葡萄糖二酸鈉；2為主成分葡萄糖酸鈉圖2 DAD檢測器

2.4 葡萄糖二酸鈉的定量限與檢測限

取25 μg /mL的葡萄糖二酸鈉對照品溶液用水逐級稀釋，使其峰高為基線噪音10倍，此時的進樣濃度約為1.96 μg/mL，進樣體積為20 μL，故定量限為39.2 ng，同時，將定量限溶液連續進樣6次，記錄色譜圖。將定量限溶液進一步稀釋，使其峰高為基線噪音的3倍，此時的進樣濃度為0.59 μg/mL，進樣體積為20 μL，故檢測限為11.8 ng。

2.5 葡萄糖二酸鈉標準曲線

精密稱取葡萄糖二酸鈉約10 mg(葡萄糖二酸單鉀鹽實稱11.01 mg，折算成葡萄糖酸鈉為10.30 mg，含量98.0%)，置100ml量瓶中，加水溶解，并稀釋至刻度，搖勻；分別精密量取該溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5 mL至10 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，分別進樣20 μL，記錄色譜圖。結果表明：葡萄糖二酸鈉在1.96～50.45 μg/mL范圍內濃度與色譜峰面積線性關系良好，線性方程為：y=932.56 x -1354.8，R2=0.9998。

2.6 葡萄糖二酸鈉加樣回收率

取本品有關物質項下供試品溶液，測定葡萄糖二酸鈉含量，由于葡萄糖二酸鈉含量極低，按對照品濃度的80%、100%和120%精密加入葡萄糖二酸鈉對照品(因稱取量太低，通過稱量后配成溶液加入)，照有關物質檢查項下供試品溶液制備方法，平行制備高、中、低濃度9份。按外標法測定葡萄糖二酸鈉的含量，并計算葡萄糖二酸鈉的加樣回收率，測得平均回收率97.08%，RSD0.74%。結果表明， 葡萄糖二酸鈉加樣回收率較好，本測定方法準確度較高。

2.7 進樣精密度試驗

取濃度約為25 μg/mL葡萄糖酸鈉對照品溶液，在上述色譜條件下，連續進樣20 μL 6次，記錄色譜圖，考察其進樣精密度試驗，測得RSD0.92%。結果表明：本品雜質葡萄糖二酸鈉對照品溶液定量測定法進樣精密度較好。

2.8 葡萄糖二酸鈉對照品溶液的穩定性

取濃度約為25 μg/mL葡萄糖二酸鈉對照品溶液，與室溫下放置，分別于0、2、4、6、8、12、18、24 h依法進樣20 μL，考察葡萄糖二酸鈉的穩定性，測得RSD0.89%。結果顯示：葡萄糖二酸鈉對照品溶液室溫24 h內穩定。

2.9 樣品的葡萄糖二酸鈉雜質檢查

經對樣品按上述方法進行檢查，樣品的葡萄糖二酸鈉雜質為0.01%。

3 結論

平衡鹽沖洗液國內引進的時間約為2013年，當時并未對該產品的雜質提出要求，筆者此次用氫型陽離子交換色譜柱能對該雜質進行良好的分離測定，建立了葡萄糖二酸鈉雜質的檢測方法。筆者也對上述檢測條件進行了耐用性試驗，調整了柱溫為28℃及32℃，對檢查結果無影響；調整流動相硫酸濃度為0.024及0.026 mol/L，對對檢查結果無影響。該方法可靠、靈敏度高、重現性好，是一種實用的檢測方法。