r-干擾素釋放試驗在基層應用的價值

吳進鳳

（北京市昌平區結核病防治所 檢驗科，北京 102200）

0 引言

結核病是由結核桿菌引起的慢性呼吸道傳染病，據世界衛生組織報道，每年全球因結核病導致死亡人數超過150 萬，結核病是世界10 大死亡病因之一[1]。人體除了指甲和頭發，其他部位都有可能會患上結核病[2]，結核病的臨床表現多種多樣，各種結核病中最常見的是肺結核[3]。面對結核病臨床表現的復雜性，及時有效的檢測方法尤為重要，痰涂片抗酸染色、結核菌培養是目前臨床上最常用的檢測方法。痰涂片操作簡便、快捷，但該方法陽性率較低而且易被漏檢；結核桿菌培養是結核病診斷的“金標準”，但該方法培養時間較長，不利于早期診治[4]。r-干擾素釋放試驗和結核抗體檢測，是近幾年在臨床上應用較多的免疫學檢測方法。通過對這兩種檢測方法敏感性的比較，分析r-干擾素釋放試驗在結核病中的診斷價值和實用性。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取2015 年1 月至2018 年12 月在本所初治的肺結核患者共計283 人，其中男性174 人，女性109人。年齡16～89 歲，平均（39.80±18.97）歲。所選患者283 人均進行痰涂片抗酸染色、r-干擾素釋放試驗、結核抗體檢測。

1.2 診斷標準

肺結核患者診斷，依據中華醫學會結核病學分會編寫的《臨床診療指南-結核病學分冊》[5]標準，非結核均經臨床診斷排除。

1.3 方法

（1）痰涂片抗酸染色:采用萋-尼氏染色方法進行處理[6]。涂片染色所用試劑均由珠海貝索生物有限公司生產。痰標本涂片、染色、干燥、鏡檢。顯微鏡鏡檢結果報告如下:連續觀察300 視野，根據鏡下所見抗酸桿菌數量分級報告。藍色背景下抗酸桿菌顯現紅色，鏡下300 視野可見1～8 條以上抗酸桿菌為陽性，鏡下未見抗酸桿菌為陰性。

（2）r-干擾素釋放試驗（T-SPOT.TB）:使用結核感染T 細胞檢測試劑盒（Oxford immunotec ltd），實驗操作按照免疫斑點干擾素釋放試驗[6]和試劑盒說明書進行。抽取患者靜脈血5 mL，依次進行單個核細胞提取與計數、孵育、抗原抗體結合、顯色、斑點計數。顯微鏡鏡下計數報告結果如下:抗原A 孔或抗原B 孔斑點數-空白孔斑點數≧6 為陽性，提示有結核菌感染。反之為陰性。

（3）結核抗體檢測:使用上海奧普生物醫藥有限公司生產的結核分枝桿菌IgG 抗體檢測試劑盒，操作按照試劑盒說明書進行。結果判讀如下:反應孔有紅色質控點，中間有紅色斑點出現為陽性；只有紅色質控點，中間無紅色斑點為陰性。

1.4 觀察指標

分析283 人的檢測結果。根據痰涂片的結果，分成涂片陰性組和涂片陽性組。對這兩組T-SPOT.TB和結核抗體的結果進行比較，評價T-SPOT.TB 在結核病診斷中的價值。

1.5 統計學方法

分析數據使用SPSS 2.0 軟件進行，數據資料用χ2檢驗，P＜0.05 有統計學意義。

1.6 質量控制

實驗操作人員嚴格按照標準操作規程進行實驗。

2 結果

2.1 225 例結核病患者痰涂片結果分析

283 例痰涂片結果:萋-尼氏染色鏡檢，涂陰246 例，占86.93 %（246/283）；涂 陽37 例，占13.07 %（37/283）。

2.2 涂片陰性組，T-SPOT.TB 與結核抗體結果比較

涂片陰性組共246 例，T-SPOT.TB 陽性率為52.85 %（130/246），高于結核抗體的13.41 %（33/246）.有顯著性差異（χ2=86.323，P＜0.05），見表1。

表1 涂片陰性組T-SPOT.TB 與結核抗體結果比較

2.3 涂片陽性組，T-SPOT.TB 與結核抗體結果比較

涂片陽性組共37 例，T-SPOT.TB 陽性率為91.89 %（34/37），高于結核抗體的29.73 %（11/37），有顯著性差異（χ2=29.997，P＜0.05），見表2。

表2 涂片陽性組T-SPOT.TB 與結核抗體結果比較

2.4 T-SPOT.TB 結果與結核抗體結果在結核病診斷中的比較

T-SPOT.TB 診斷結核病的敏感度為57.95 %（164/283），高于結核抗體的敏感度15.55 %（44/283），有顯著性差異（χ2=109.454,P＜0.05），見表3。

表3 T-SPOT.TB 與結核抗體在結核病中診斷結果比較

3 討論

我國是全球結核病疫情較為嚴重的國家之一，患者人數多。我國結核病防治工作的重點，是對結核病患者進行早診斷、早治療，提高患者病愈后的生活質量[7]，然而前來就診的患者，大多臨床表現都不典型，給臨床的快速診斷增加了很大難度[8]。目前，痰涂片和結核菌培養是結核病診斷常用的檢測方法，但是由于痰涂片受標本質量、閱片者經驗等因素影響，陽性率較低；而痰培養耗時長拖延診斷。因此急需快速精準的檢測方法輔助臨床診斷[9]。近幾年，結核抗體和T-SPOT.TB 這兩種免疫學檢測方法在臨床上廣泛應用。尤其對于留痰困難（例如:精神科的結核病患者，留痰非常困難）、干咳無痰患者，免疫學檢測方法更加適用。T-SPOT.TB 原理:結核病患者外周血中的效應T 淋巴細胞對結核有特異性，在受到結核分枝桿菌刺激后，會釋放γ-干擾素，是目前檢測結核抗原特異性T 淋巴細胞敏感度最高的方法[10,11]。

本文通過對283 例結核病患者的檢測結果進行比較，涂陰人數占86.93 %（246/283），涂陽人數占13.07 %（37/283）。涂片陰性組T-SPOT.TB陽性率為52.85 %（130/246），高于結核抗體的13.41 %（33/246）.有顯著性差異。涂片陽性組，T-SPOT.TB 陽性率為91.89 %（34/37），高于結核抗體的29.73 %（11/37），有顯著性差異。T-SPOT.TB 檢測結果顯示其敏感度為57.95 %（164/283），高于結核抗體的敏感度15.55 %（44/283）。以上結果數據與徐靜[12]和李才信[13]等相關文獻報道結果有一定差異。

本研究中三種檢測方法，T-SPOT.TB 敏感性最高，其次是結核抗體檢測，痰涂片最低。通過涂片分組后對兩種實驗結果進行比較、分析得出:兩種免疫學檢測方法中，結核抗體檢測方法簡單，快捷，而該方法的敏感性各文獻報道有很大差異。而T-SPOT.TB 的敏感度明顯高于結核抗體的敏感度。作為一種新的結核病診斷方法，T-SPOT.TB 操作簡便，所需時間短，敏感性高，是診斷結核病的“金標準”之外的非常有效的診斷方法，既可以廣泛的應用于結核感染篩查[14,15]，又可以作為涂片以外的輔助診斷指標[9,16]，有利于結核病早期診斷與治療。

T-SPOT.TB 更適用于基層結防機構，首先，不需要特殊儀器設備，人工顯微鏡下即可判讀，操作簡便；其次，對于不能自主留痰的患者，抽血檢測更加簡單易行；再其次，本單位承擔轄區內多所高校以及200 多萬人口（其中流動人口多于原住人口）的結核病防控工作，在處理結核病疫情和突發事件中，此項檢查也可用于密切接觸者篩查。綜上所述，T-SPOT.TB 適合在基層結防機構推廣應用。