白介素-17、白介素-35在稽留流產患者血清中的表達及臨床意義

李 麗, 張 羽, 李紅梅

(延安大學附屬醫院 產科, 陜西 延安, 716000)

稽留流產(MA)是指胚胎或胎兒雖然已經在子宮內死亡，但沒有自動從機體內排出的自然流產形式，目前發生率有較為明顯的增高趨勢[1]。MA發病復雜，目前仍有50%病因無法明確[2], 而免疫因素成為近幾年的研究熱點。輔助性T細胞(Th)17/調節性T細胞(Treg)模式在母胎界面的免疫調節影響著妊娠結局[3], 其中白介素-17(IL-17)是Th17細胞分泌的具有促炎作用的炎癥因子，白介素-35(IL-35)是Treg細胞分泌的具有抑炎作用的抑炎因子，二者在母胎界面的動態平衡對妊娠起著決定性作用[4]。本研究通過檢測母體外周血血清IL-17及IL-35的表達水平來分析其對MA的影響，現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年3—9月在本院就診的30例MA患者設為病例組，納入標準: 停經7～12周，既往月經規律，經血清人絨毛膜促性腺激素(HCG)及B超動態監測診斷為MA患者; 無感染、內分泌異常、生殖系統畸形、染色體異常等。另選取同期30例正常早孕要求終止妊娠患者設為對照組，納入標準: 停經7～12周，既往月經規律，B超可見胎心，本次妊娠無感染、保胎、先兆流產史; 患者同意。排除標準: 有其他內外科疾病合并癥史、不良嗜好史。2組患者年齡、孕周及孕次比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。本研究經醫院倫理委員會審核并通過。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑: HBS酶標儀和HBS-4009全自動洗板機購買自華泰和合商貿有限公司, HT-400B電熱恒溫培養箱購買自上海赫田科學儀器有限公司, TGL-168 離心機(上海安亭科學儀器廠), XW-80A 旋渦離合器(上海青浦滬西儀器廠), DHG-9023A 電熱恒溫鼓風干燥箱(上海精宏實驗設備有限公司), 0.1～50.0 mL分液器(TOMOS LIFE SCIENCE Group), 人IL-17和IL-35酶聯免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒均購買自上海撫生實業有限公司。

1.2.2 標本的采集與處理: 2組患者均在行人工流產術前采集肘前靜脈血5 mL, 以3 500 轉/min的轉速離心15 min后取上層血清，采用ELISA方法檢測血清中IL-17、IL-35濃度，具體實驗步驟嚴格按照試劑盒說明進行操作。

1.3 結果計算與判斷

采用酶標儀測出標準品各濃度在450 nm處的光密度(OD)值。以標準品濃度為橫坐標，標準品OD值為縱坐標做出標準曲線。將所有樣品OD值根據標準曲線得出樣品血清中IL-17及IL-35的濃度值。

1.4 統計學分析

2 結 果

2.1 血清中IL-17及IL-35濃度水平變化

觀察組血清IL-17濃度顯著高于對照組(P<0.05), IL-35濃度顯著低于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 2組患者血清IL-17、IL-35濃度比較 pg/mL

IL-17: 白細胞介素-17; IL-35: 白細胞介素-35。

與對照組比較, *P<0.05。

2.2 血清及胚胎絨毛組織中IL-17及IL-35表達的相關性分析

2組患者的血清及胚胎絨毛組織中IL-17及IL-35的表達均呈負相關(r=-0.756,P<0.05)。

3 討 論

表達父系Ⅰ類抗原的滋養層被認為類似于半同種異體移植物，可被母體CD4+T細胞所排斥，因此，妊娠的過程會激發母體一系列的免疫反應[5], 而母體能否對其產生免疫耐受對于胚胎的植入及維持至關重要[6]。一次成功的妊娠取決于母胎界面免疫因子的動態平衡，當胚胎植入時，母體內促炎因子會及時減少，免疫調節會轉向免疫耐受，從而抑制機體對胚胎的排斥反應[7]。在這一系列適應性免疫應答過程中，Th細胞和Treg細胞發揮了重要作用[8]。

與Th1及Th2不同, Th17細胞形成了CD4+T淋巴細胞的新子集，介導外來組織的炎癥反應、自身免疫疾病及同種異體移植物的排斥反應。而這些細胞與Treg細胞密切相關, Treg細胞是抑制機體自身免疫炎癥反應的重要調節因素，特別是在外周血及外周組織[9]。研究[10]表明，妊娠失敗與體內Treg細胞數量的減少有關，且在不明原因復發性流產患者體內也觀察到了Th17/Treg細胞的免疫失衡。此外，還有學者[11]認為，促進同種異體移植物排斥的Th17型細胞相關因子可能會導致妊娠的不良結局，而促進母體對胎兒免疫耐受的Treg細胞相關因子可能會改善妊娠結局。

IL-17為Th17細胞分泌的促炎因子，在復雜的免疫炎癥反應中發揮著重要作用。IL-17分為6種類型，即IL-17 A～F, 其DNA序列具有同源性，屬于同一個家族[12]。IL-17A是家族中最早發現的炎性因子，當機體受到內源性、外源性、病毒、真菌及寄生蟲等感染時, IL-17A會及時介導機體產生炎癥反應，從而保護機體免受病原體入侵。但當這種炎癥反應過度激活時，便會對自身組織進行攻擊從而發生自身免疫性疾病。同理，當胚胎這種半同種異體移植物植入母體時，若機體對其產生過度排斥，將會導致不良的妊娠結局，甚至發生流產。Qian等[3]研究認為，對于習慣性流產、子癇前期、先兆流產等病理性妊娠患者來說，其血清中IL-17水平明顯較高，提示IL-17水平升高與患者妊娠失敗具有一定相關性。本研究結果顯示, MA患者體內IL-17含量較正常妊娠患者明顯增多，與Qian等研究結果一致。

在Th17/Treg免疫調節的模式中, Treg細胞可以產生抑制性炎癥因子IL-35。IL-35是2007年被命名的一種新型免疫抑制因子，屬于IL-12家族，由α和β鏈的異源二聚體組成，受體為IL-12Rβ2和gp130[13]。IL-35主要由Treg細胞分泌，并且對Treg細胞介導的體內、外免疫抑制調節有著必不可少的作用。越來越多的研究表明，IL-35在自身免疫性疾病和傳染病中擔任重要角色。有研究[14]表明，IL-35可有效減輕同種異體移植物的排斥反應，并且在免疫性、感染性等類型的疾病發生、發展過程中，可能發揮較為獨特的作用。而在母胎界面中，IL-35可以調節免疫抑制作用，減少機體對胚胎的攻擊，從而確保妊娠順利進行。Ozkan等[4]報道稱，復發性流產患者體內IL-35的表達水平明顯較正常妊娠患者低，與本研究結論一致。

因機體對外來物的識別作用產生一系列的適應性免疫應答，當免疫炎癥反應大于免疫抑制反應時，機體將出現排斥作用。但正常的妊娠過程并沒有因為免疫排斥作用而導致妊娠失敗，而是通過免疫反應的“重新調整”，激活了免疫抑制作用而保護胚胎順利生長，這就是免疫調節的動態平衡。因此，本研究通過檢測外周血中Th17/Treg細胞的特異性相關因子的含量，間接反映兩者的免疫調節作用對妊娠的影響。只有當IL-17/IL-35達到免疫平衡，即促炎反應與抑炎反應達到平衡時，才能確保妊娠物不被母體所排斥，最終使胚胎順利生長。本研究對稽留流產患者血清中IL-17、IL-35的表達水平進行檢測，提示Th17/Treg在不良妊娠結局中可能發揮較為關鍵的作用。本研究結果也顯示, IL-17升高及IL-35降低與不良妊娠有關，并且二者間的表達存在負相關。

本研究可為診斷MA提供輔助性參考指標，為提早預測MA提供一定的理論依據，進而預防可能發生的不良妊娠結局。基于細胞的治療已成為減輕移植后排斥反應的新方法，為加強母嬰安全提供了一定理論依據。