液相色譜聯(lián)合串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)中藥制劑及保健品中非法添加的質(zhì)子泵抑制劑*

陳乃江，楊 穎，李 玲

（江蘇省連云港市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，江蘇 連云港 222006）

質(zhì)子泵抑制劑（PPI）是治療胃病的首選藥物[1-2]。目前，國(guó)內(nèi)已有奧美拉唑、蘭索拉唑、泮托拉唑、雷貝拉唑、埃索美拉唑5個(gè)該類藥品上市，其中埃索美拉唑?yàn)閵W美拉唑的左旋異構(gòu)體。不法商人受利益驅(qū)動(dòng)，在中藥制劑和護(hù)胃保健品中非法添加PPI，以使其符合宣稱的療效。普通消費(fèi)者在不知情的情況下長(zhǎng)期服用，易造成身體慢性傷害。對(duì)此，本研究中參考文獻(xiàn)[3-13]，建立液相色譜聯(lián)合串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）法進(jìn)行相應(yīng)檢測(cè)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Aglient Technologies 6530 Q-TOF型液質(zhì)聯(lián)用儀（美國(guó)Aglient公司）；BP211D型十萬分之一電子分析天平（德國(guó)Sartorius公司）；MX-F型渦流混合器（美國(guó)Scilogex公司）；SYWQ800型超聲波清洗器（山東申儀電子科技有限公司）；TDL80-2B型臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）。

1.2 試藥

猴菇飲口服液（樣品 A，批號(hào)為 20170607、20181018）、山藥粉（樣品 B，批號(hào)為 20180317）、養(yǎng)胃多乳酸菌飲品（樣品C，批號(hào)為180311）、健胃消食片（樣品 D，批號(hào)為 170136）、胃康寧膠囊（樣品 E，批號(hào)為20170516）、香砂平胃丸（樣品 F，批號(hào)為 170602）、胃蘇顆粒（樣品 G，批號(hào)為 17120684），奧美拉唑鈉對(duì)照品（批號(hào)為100760-201504，含量95.2%）、雷貝拉唑鈉對(duì)照品（批號(hào)為100658-201404，含量98.2%）、泮托拉唑鈉對(duì)照品（批號(hào)為100575-201505，含量95.8%）、蘭索拉唑?qū)φ掌罚ㄅ?hào)為100709-201304，含量99.8%），均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

混合對(duì)照品溶液：稱取奧美拉唑鈉、雷貝拉唑鈉、蘭索拉唑、泮托拉唑鈉的對(duì)照品各10 mg，精密稱定，分別置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，即得單一對(duì)照品貯備液，量取1mL，置同一100mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，經(jīng)0.22μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

供試品溶液：取樣品A 1 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得A供試品溶液。取樣品B約0.1 g，研細(xì)，置100 mL容量瓶中，超聲（功率250 W，頻率40 kHz）處理10 min，加甲醇定容，搖勻，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得B供試品溶液。取樣品C約2 g，置50 mL具塞離心管中，加水約25 mL，渦旋混勻，于50℃條件下水浴超聲20 min，冷卻至室溫后加亞鐵氰化鉀溶液2 mL和乙酸鋅溶液2 mL，混勻，8 000 r/min離心5 min，取水相，移至50 mL容量瓶中，于殘?jiān)屑铀?0 mL，渦旋混勻后超聲處理5 min，8 000 r/min離心5 min，取水相，移至同一50 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得C供試品溶液。取樣品D約0.1 g，研細(xì)，置100 mL容量瓶中，加甲醇超聲處理20 min，冷卻至室溫，加甲醇定容，搖勻，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得D供試品溶液。

陽性對(duì)照溶液：取樣品A 2份，每份100 mL，每份均添加單一對(duì)照品貯備液，即得質(zhì)量濃度分別為1，10 mg/kg的陽性對(duì)照溶液，取1 mL，分別置10 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過，即得陽性對(duì)照溶液Ⅰ、Ⅱ。

空白對(duì)照溶液：以甲醇為空白對(duì)照溶液。

2.2 檢測(cè)條件

色譜條件：色譜柱為Agilent Poroshell 120 EC C18柱（2.1 mm ×50 mm，2.7 μm）；流動(dòng)相為甲醇 -10 mmol/L醋酸銨溶液（40 ∶60，V/V）；流速為 0.3 mL/min；柱溫為 30℃；進(jìn)樣量為 1 μL。

質(zhì)譜條件：離子模式為電噴霧離子化（ESI）正離子模式；干燥氣溫度325℃；霧化氣壓力35 psi；毛細(xì)管出口電壓100 V；干燥器流量8 L/min；毛細(xì)管電壓4 kV；碰撞能電壓10 V；質(zhì)量掃描范圍，即質(zhì)荷比（m/z）50～1 000，其中奧美拉唑、雷貝拉唑、蘭索拉唑、泮托拉唑分別為 346.122 0，360.137 6，370.083 2，384.082 4。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：精密量取混合對(duì)照品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣，理論板數(shù)以雷貝拉唑鈉峰計(jì)大于3 000，各待測(cè)成分峰間的分離度均大于1.5。

檢測(cè)限考察：分別精密量取混合對(duì)照品溶液適量，倍比稀釋，并按擬訂試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，以信噪比（S/N）10∶1計(jì)算檢測(cè)限。結(jié)果檢測(cè)限為0.01 ng。

精密度試驗(yàn)：取混合對(duì)照品溶液適量，按擬訂試驗(yàn)條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄離子信號(hào)強(qiáng)度。結(jié)果奧美拉唑、雷貝拉唑、蘭索拉唑、泮托拉唑離子信號(hào)強(qiáng)度的RSD均小于1%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取2.1項(xiàng)下陽性對(duì)照溶液Ⅰ、Ⅱ（批號(hào)為 20181018）各適量，分別于室溫下放置 0，4，8，16，24，48 h時(shí)，按擬訂試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄離子信號(hào)強(qiáng)度。結(jié)果奧美拉唑、雷貝拉唑、蘭索拉唑、泮托拉唑離子信號(hào)強(qiáng)度的RSD分別為 2.4%，1.5%，1.8%，2.5%（n=6），表明陽性對(duì)照溶液Ⅰ、Ⅱ在室溫下放置48h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱取樣品（批號(hào)為20181018）適量，依法制備供試品溶液，各6份，按擬訂試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄離子信號(hào)強(qiáng)度并計(jì)算含量。結(jié)果奧美拉唑、雷貝拉唑、蘭索拉唑、泮托拉唑離子信號(hào)強(qiáng)度的RSD分別為 1.4%，1.0%，0.8%，1.2%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

2.4 樣品中質(zhì)子泵抑制劑檢測(cè)

取6批樣品及2批陽性對(duì)照溶液Ⅰ各適量，分別依法制備供試品溶液，再按擬訂試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，平行測(cè)定3次，記錄離子信號(hào)強(qiáng)度。結(jié)果10批樣品中均未檢出質(zhì)子泵抑制劑，陽性對(duì)照溶液中4種質(zhì)子泵抑制劑均可檢出。

2.5 色譜圖及具體對(duì)照溶液質(zhì)譜圖

詳見圖1至圖3。

3 討論

質(zhì)子泵抑制劑類藥品均是弱堿性化合物，在以10 mmol/L 醋酸銨溶液 -甲醇（40∶60，V/V）為流動(dòng)相，選擇ESI正離子模式下，均可檢出奧美拉唑、泮托拉唑、雷貝拉唑、蘭索拉唑。蘭索拉唑雖不是以成鹽對(duì)照品狀態(tài)進(jìn)樣，但由于其分子有易與鈉離子結(jié)合的作用位點(diǎn)（醚鍵上的氧），由于其他對(duì)照品引入了鈉，導(dǎo)致在質(zhì)譜圖中蘭索拉唑[M+Na]392.0峰比[M+H]370峰強(qiáng)，其他對(duì)照品一級(jí)質(zhì)譜離子峰均是脫鈉峰。

取混合對(duì)照品溶液，選ESI離子化模式，直接進(jìn)樣，進(jìn)行質(zhì)譜條件優(yōu)化。本試驗(yàn)中分別考察了不同毛細(xì)管出口電壓（150，130，100，90 V）、霧化氣壓力（30，35，40 psi）、干燥氣溫度（310，325，335，350 ℃）及干燥器流量（11，9，8，7 L/min）條件下的離子信號(hào)強(qiáng)度，結(jié)果最優(yōu)質(zhì)譜為毛細(xì)管出口電壓100 V，霧化氣壓力為35 psi，干燥氣溫度為325℃，干燥器流量為8 L/min。

圖1 高效液相色譜圖

圖2 一級(jí)質(zhì)譜圖

圖3 二級(jí)質(zhì)譜圖

質(zhì)譜檢測(cè)一般都是痕量或微量檢測(cè)，常見檢測(cè)限度都是ng或pg級(jí)別，而質(zhì)子泵抑制劑藥品常見治療單次給藥劑量為10，20，40 mg，若讓該類中藥制劑及保健品刻意達(dá)到突出的療效，其加入量自然傾向于接近或遠(yuǎn)大于治療劑量，可超過質(zhì)譜的檢測(cè)質(zhì)量濃度，一般情況下質(zhì)譜作為檢測(cè)手段無需擔(dān)心檢測(cè)限度和靈敏度的問題。