殼多糖酶3樣蛋白1、層粘連蛋白、Ⅳ型膠原在乙型肝炎病毒相關肝硬化中的診斷價值*

黎村艷，段 貞，朱雅祺，張柏銀，曹友德，譚黎明，鐘 婕，周兵飛△

(湖南省人民醫院/湖南師范大學第一附屬醫院：1.檢驗科;2.科研部，湖南長沙 410005；3.湖南師范大學醫學院醫學檢驗系，湖南長沙410006；4.湖南省腦科醫院麻醉科，湖南長沙 410007)

肝纖維化是由病毒感染、酒精的濫用、毒素等多種病因導致肝慢性損傷后的一類損傷再修復過程，晚期可進展為肝硬化[1]。慢性乙型肝炎是導致肝纖維化、肝硬化的一個重要病因。肝組織活檢是肝纖維化診斷和分期的金標準，但該法因具有侵入性病可能導致嚴重并發癥而應用受限。因此尋找一個敏感度和特異度較高的無創肝纖維化早期診斷指標，對于臨床及時治療尤為關鍵。殼多糖酶3樣蛋白1(CHI3L1)是由人類CHI3L1基因編碼的一種分泌型糖蛋白，屬于哺乳動物幾丁質酶樣蛋白家族，也稱幾丁質酶3樣蛋白1[2]。肝細胞、成纖維細胞、軟骨細胞、腫瘤細胞、中性粒細胞和巨噬細胞等等多種細胞表達CHI3L1[3]，以肝細胞表達最豐富，其表達量是其他組織器官的15～227倍[4]，當其在肝臟庫普弗細胞中被誘導表達后激活肝臟星狀細胞，可能參與肝纖維化的形成和維持[5]。研究顯示，血液中的CHI3L1蛋白水平與丙型肝炎病毒相關肝纖維化有關[6]，但是在乙型肝炎病毒(HBV)感染相關疾病中的表達情況鮮有報道。本研究擬通過評估HBV感染相關的各類肝臟疾病患者的血清CHI3L1水平，探討其在HBV相關的肝硬化中的診斷價值。同時檢測血清透明質酸(HA)、Ⅲ型前膠原(PⅢNP)、層粘連蛋白(LN)、Ⅳ型膠原(CⅣ)和纖維連接蛋白(FN)水平(以下簡稱“肝纖五項”)，比較血清CHI3L1與肝纖五項單獨或聯合檢測對于鑒別診斷HBV相關肝硬化的價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 將湖南省人民醫院2016年6月至2017年6月入院的患者111例納入研究，包括慢性乙型肝炎患者62例(慢性乙肝組)，男50例、女12例，年齡(48.4±12.9)歲；肝硬化患者28例(肝硬化組)，男20例、女8例，年齡(54.3±9.6)歲；原發性肝癌患者21例(原發性肝癌組)，男14例、女7例，年齡(50.9±11.6)歲。慢性乙肝診斷符合《慢性乙型肝炎防治指南》(2015年版)[7]，肝硬化和肝癌均符合第7版《內科學》診斷標準[8]。以上患者在檢測前1個月均未使用干擾素或核苷(酸)類等抗病毒藥物。排除標準：(1)藥物性肝損傷、自身免疫性肝病、酒精性肝病或合并其他肝炎病毒感染等的患者；(2)惡性腫瘤或心、肺、腎等其他臟器功能嚴重損傷者；(3)妊娠或哺乳期女性。另外，選取同期30例在湖南省人民醫院體檢且各項指標未見異常者作為對照組，男21例、女9例，年齡(48.5±14.8)歲。各組間年齡、性別比例比較差異均無統計學意義 (P<0.05)。

1.2方法 入院后采集上述人群空腹靜脈血3 mL，30 min內3 000×g離心10 min，分離血清，-80 ℃冰箱保存，待測。用酶聯免疫吸附法(美國Bio-Tek公司ELX800型酶標儀)檢測血清CHI3L1水平，按定量測定試劑盒(杭州普望生物技術有限公司)說明書進行操作。用化學發光法檢測血清HA、PⅢNP、LN、CⅣ和FN水平，按試劑盒(濰坊市康華生物技術有限公司產品)和SMART3000S全自動化學發光儀(科斯邁公司)說明書進行操作。

2 結 果

2.14組血清肝纖五項水平 各組間血清CHI3L1和肝纖五項的水平呈偏態分布，見表1。Kruskal-Wallis檢驗顯示，不同組別患者的CHI3L1和肝纖五項水平明顯不同(CHI3L1：H=36.16，P=0.000；HA：H=34.85，P=0.000；LN：H=28.82，P=0.000；CⅣ：H=55.89，P=0.000；PⅢNP：H=65.12，P=0.000；FN：H=41.33，P=0.000)。Kruskal-Wallis H 檢驗平均秩多重比較顯示，肝硬化組患者的CHI3L1水平明顯高于原發性肝癌組(P=0.039)、慢性乙肝組(P=0.000)和對照組(P=0.000)；原發性肝癌組患者CHI3L1水平與慢性乙肝組比較，差異無統計學意義(P=0.306)，見表2。肝硬化組的肝纖五項部分項目水平均明顯高于慢性乙肝組(HA：P=0.000，LN：P=0.000，CⅣ：P=0.000，PⅢNP：P=0.011，FN：P=0.000)、原發性肝癌組(CⅣ：P=0.002)和對照組(HA：P=0.000，LN:P=0.000，CⅣ:P=0.000，PⅢNP:P=0.000，FN:P=0.002)。

表1 四組患者CHI3L1和肝纖五項的檢測水平[M(P25，P75)]

注：與對照組比較，aP<0.05；與肝硬化組比較，bP<0.05；與慢性乙肝組比較，cP<0.05

2.2肝硬化組患者CHI3L1與肝纖五項水平的Spearman相關分析 Spearman相關分析顯示，肝硬化組患者CHI3L1與肝纖五項水平間的等級相關系數無統計學意義(P>0.05)，見表2。

表2 肝硬化組患者CHI3L1與肝纖五項水平的Spearman相關分析

表3 兩組ROC曲線分析結果

圖1 CHI3L1、CHI3L1、LN和CⅣ及由logistic回歸所得預測概率P的ROC曲線

2.3肝硬化診斷的ROC曲線 將對照組、乙肝組和肝癌組納入參照，血清CHI3L1鑒別肝硬化患者的AUC為0.799，以215.34 pg/mL為最佳診斷界值點，敏感度為82.1%，特異度為69.0%。以是否肝硬化為應變量，以血清CHI3L1與肝纖五項的濃度為自變量，建立logistic回歸模型，結果CHI3L1、LN和CⅣ納入模型，計算預測概率P，得到預測概率P的診斷界值為0.2001時，敏感性和特異性分別提高至82.1%和85.8%。見表3和圖1。

3 討 論

肝纖五項是診斷肝纖維化的5種良好的生物標志物。HA是基質成分之一，由間質細胞合成，是肝纖維化和肝硬化的敏感指標。LN是基底膜中特有的非膠原性結構蛋白，與肝纖維化活動程度呈正相關。CⅣ是構成基底膜主要成分，其含量的增高可較靈敏反映肝纖維化的病程，是肝纖維化的早期標志之一。PⅢNP是反映肝內Ⅲ型膠原合成的指標，其血清含量與肝纖維化的程度一致。FN主要參與肝細胞損傷修復、膠原代謝、調節網狀內皮系統功能，其水平隨纖維化程度加重而增加。本研究發現，與對照組相比，肝硬化患者血清中的肝纖五項水平明顯升高。

CHI3L1是一類與炎癥有關的生物標志物，是結締組織細胞的生長因子，在組織重塑、癌細胞增殖、抗凋亡、血管異常等過程中可能起到重要作用[9]。CHI3L1血清水平升高與炎癥性腸病、肝纖維化、類風濕性關節炎和各類腫瘤相關[10,11]。本研究結果顯示，肝硬化患者血清中CHI3L1水平明顯高于慢性乙肝組，可能與慢性乙肝病程發展轉化成肝硬化的過程中，持續的炎癥導致肝實質大量破壞，CHI3L1相應的增加促進機體自我修復有關。肝癌組的CHI3L1水平低于肝硬化組，猜測可能與癌細胞破壞正常肝細胞的功能，導致CHI3L1的分泌量相對下降有關。本研究相關分析結果顯示，CHI3L1與肝纖五項水平無顯著相關性，六項指標不同時產生變化，這可能與CHI3L1和肝纖五項產生的機制不同有關[12]。

使用單個標記物來診斷疾病具有許多限制，適當選擇多個標記物聯合檢測可以提高診斷價值[13]。文獻報道，CHI3L1是一種優于HA、PCⅢ、LN和CⅣ的可檢測大量肝纖維化的血清標志物[4]。本研究logistic回歸分析顯示，僅CHI3L1、LN和CⅣ納入模型。本研究ROC結果進一步顯示，血清CHI3L1、LN和CⅣ水平從非肝硬化患者中鑒別肝硬化患者的AUC分別為0.799、0.794和0.888。使用CHI3L1、LN和CⅣ三項指標聯合檢測的預測概率P作為獨立的診斷指標，AUC達到0.923，敏感度和特異度分別達到82.1%和85.8%，顯著高于各項指標單獨檢測時的診斷效能，對肝硬化的診斷具有重要價值。由于本研究為單中心研究，樣本量仍有限，后續需多中心大樣本量的試驗來論證。

4 結 論

血清CHI3L1水平的監測在HBV相關肝硬化的診斷中有重要意義，CHI3L1、LN和CⅣ水平聯合檢測，能提高對肝硬化的診斷效能，為臨床對肝硬化患者做出診斷和及時進行相應治療提供依據。