五種消毒劑對舒伯特氣單胞菌殺菌效果研究

劉枝華 涂嬌 胡雄 鄧佩儀 陳江鳳 邵儉

摘 要：為篩選對舒伯特氣單胞菌（Aeromonas schubertii）具有較好殺菌效果的消毒劑及其最小殺菌濃度（Minimum Bactericidal Concentration，MBC），選用五種消毒劑（聚維酮碘、雙鏈季銨鹽碘、大蒜素、二氧化氯、復合碘）進行殺菌實驗，設置舒伯特氣單胞菌母液濃度為（1～2）×103 cfu/mL，五種消毒劑目標濃度均為0.3750 mg/L。研究結果表明，雙鏈季銨鹽碘對舒伯特氣單胞菌殺菌效果最好，殺菌率為63.02%;其次是復合碘，殺菌率為43.56%。當雙鏈季銨鹽碘和復合碘兩種消毒劑濃度為目標濃度3倍（1.1250 mg/L）時，可全部殺滅舒伯特氣單胞菌。因此，五種消毒劑對舒伯特氣單胞菌都具有一定的殺菌效果，依次為：雙鏈季銨鹽碘>復合碘>二氧化氯>大蒜素，其中雙鏈季銨鹽碘和復合碘的效果最好，其最小殺菌濃度（MBC）為1.1250 mg/L。

關鍵詞：舒伯特氣單胞菌;消毒劑;目標濃度;最小殺菌濃度

中圖分類號：S948

文獻標識碼：A

文章編號：1008-0457（2019）03-0089-04 國際DOI編碼：10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2019.03.017

Abstract：In order to screen the disinfectant with good bactericidal effect on Aeromonas schubertii and find out the Minimum Bactericidal Concentration （MBC） of five disinfectant （Polyvidone iodine，Double-chain quaternary ammonium iodide，Alicin，Chloride dioxide and Compound iodine） were selected. for sterilization experiments. The concentration of A. schubertii was set to （1～2）×103 cfu/mL，and the target concentration of five disinfectants was 0.3750 mg/L. The results showed that the double-stranded quaternary ammonium iodine had the best bactericidal effect on A. schubertii，and the bactericidal rate was 63.02%. The second was iodine，and the bactericidal rate was 43.56%. Meanwhile，both Double-chain quaternary ammonium iodide and the Compound iodine demonstrated 100% bactericidal rate when the concentration of the disinfectant was 3 times （1.1250 mg/L） of the target concentration. Therefore，all of the five disinfectants have certain taking effects on A. schubertii，in an order followed by：Double-chain quaternary ammonium Iodide>Compound iodide>Chloride iodide>Alicin>Polyvidone iodide，of which double-stranded quaternary ammonium salt iodine and complex Iodine has the best effect and its minimum bactericidal concentration （MBC） is 1.1250 mg/L.

Key words：Aeromonas schuberii; sterilant; target concentration; minimum bactericidal concentration

舒伯特氣單胞菌（Aeromonas schubertii）屬氣單胞菌科（Aeromonadaceae）氣單胞菌屬（Aeromanas），為革蘭氏陰性桿菌，單極鞭毛，運動極為活潑。該菌廣泛存在于淡水、海水、土壤、魚類和脊椎動物腸道中，是水產動物的常見致病菌[1]。目前，有報道對烏鱧源舒伯特氣單胞菌WL-4菌株的生理生化、生長特性、致病因子等生物學特征，藥物的敏感性及分子生物學檢測方法[2-5]。另有研究表明，舒伯特氣單胞菌對頭孢唑啉、慶大霉素等14種藥物敏感，對青霉素G、苯唑西林2種藥物耐受[6-8]。然而，在養殖生產中舒伯特氣單胞菌感染魚類時有發生，往往損失慘重[9]。為了提高烏鱧養殖生產效益，開展消毒劑對舒伯特氣單胞菌的殺菌實驗，篩選出具有較好殺菌效果的消毒劑并明確其最小殺菌濃度，旨在降低該菌引發疾病的養殖風險。

1 材料與方法

1.1 消毒劑與實驗菌株

五種消毒劑分別為：聚維酮碘、雙鏈季銨鹽碘、大蒜素、二氧化氯、復合碘。

實驗用舒伯特氣單胞菌菌株由佛山市順德區活寶源生物科技有限公司提供。

1.2 實驗方法

1.2.1 細菌母液的制備

取適量舒伯特氣單胞菌接種于營養肉湯中，28℃培養24 h，使細菌母液為1～2麥氏單位備用。

1.2.2 消毒劑的制備

配制目標濃度為0.3750 mg/L的消毒劑：分別取不同消毒劑3.75 g加蒸餾水溶解定容于100 mL的容量瓶中，搖勻取1 mL加入1 L的容量瓶，轉移到不透光樣品瓶中密封保存備用。配制消毒劑需全程避光，現配現用。

1.2.3 消毒劑對舒伯特氣單胞菌的殺菌實驗

實驗在無菌環境下進行，每組設置2個平行處理（A組、B組），無菌試管逐次標記編號A1～A6，B1～B6備用。將細菌母液稀釋100倍后，從中取1 mL置于已滅菌的錐形瓶（500 mL）中，瓶中裝有200 mL蒸餾水和玻璃珠，封口后放于搖床上震蕩15 min，頻率為200 r/min。取10 mL稀釋母液分別加入各無菌試管中，按1～6#再依次加入100 μL的聚維酮碘、雙鏈季銨鹽碘、大蒜素、二氧化氯、復合碘、無菌蒸餾水，混勻避光反應45 min后，從各試管中取100 μL分別置于相應營養瓊脂培養皿（50℃），搖勻放于37℃恒溫培養16 h后計數。

殺菌率=（對照組活菌數-實驗組活菌數）/對照組活菌數×100%

1.2.4 消毒劑對舒伯特氣單胞菌的濃度梯度實驗

菌液的配置、操作和殺菌率計算與1.2.4同。選用殺菌效果好的消毒劑進行濃度梯度實驗。實驗中消毒劑濃度分別設置為目標濃度的1.5倍（0.5625 mg/L）、2倍（0.7500 mg/L）、2.5倍（0.9375 mg/L）、3倍（1.1250 mg/L）、3.5倍（1.3125 mg/L）、4倍（1.5000 mg/L），每組設置2個處理，對照組加250 μL的無菌蒸餾水。

1.3 數據處理

使用Office 2007辦公軟件統計分析數據，數據用平均值±標準差（Mean±SD）表示。

2 結果與分析

2.1 消毒劑對舒伯特氣單胞菌的殺菌效果

與對照組相比，各消毒劑對該細菌均有一定的抑制殺滅作用（見表1），其中雙鏈季銨鹽碘和復合碘對該菌的殺菌效果最好，殺菌率分別為63.02%（60.14%～65.85%）和43.56%（38.21%～49.01%）。五種消毒劑的抑菌殺菌效果從高到低依次為：雙鏈季銨鹽碘>復合碘>二氧化氯>大蒜素>聚維酮碘。

2.2 消毒劑對舒伯特氣單胞菌的最小殺菌濃度

雙鏈季銨鹽碘和復合碘消毒劑的濃度梯度實驗結果見表2，當濃度為1.1250 mg/L時，殺菌率為100%。

3 結論與討論

舒伯特氣單胞菌所引起的內臟類結節病是鱧科魚類常見疾病之一，舒伯特氣單胞菌對鱧科魚類的養殖存在很大的威脅[10]。聚維酮碘、雙鏈季銨鹽碘、大蒜素、二氧化氯、復合碘是水產養殖中的常用消毒劑。譚鳳霞和吳全超[11-12]研究表明，聚維酮碘、二氧化氯在低濃度下對氣單胞菌有一定的抑制作用。杜仲大蒜制劑對魚類常見病原菌的抑菌作用中得出大蒜素及制劑對魚害粘球菌、腸型點狀氣單胞菌和熒光假單胞菌均有一定的抑菌作用[13]。在本研究中，當濃度0.3750 mg/L時，五種消毒劑對舒伯特氣單胞菌均有抑制作用;當濃度為1.1250 mg/L時，雙鏈季銨鹽和復合碘這兩種消毒劑殺菌率均為100%，雙鏈季銨鹽消毒劑在低濃度、短時間內對多重耐藥型革蘭陽性球菌的殺滅效果顯著有關[14]。雙鏈季銨鹽類化合物是一種陽離子表面活性劑，通過在水中形成帶正電荷的物質，吸附于帶負電荷的微生物表面，形成微團，通過滲透作用進入細胞膜的類脂層來改變膜的滲透性，從而達到殺菌作用[15-18]。復合碘可釋放出碘分子（I2），氧化菌體蛋白的活性基團，并與蛋白中的氨基酸結合而導致蛋白變性和抑制菌體的代謝酶系統，促使病原體崩解死亡[19]。韋艷等[20]研究表明復合碘對氣單胞菌的MBC濃度大于512 mg/L，本實驗中復合碘對舒伯特氣單胞菌的最小殺菌濃度較低，這可能與菌種的不同及其耐藥性有關。舒伯特氣單胞菌對五種消毒劑的耐藥性有待后續深入研究。

參 考 文 獻：

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