通關藤注射液UPLC測定綠原酸含量方法學研究

胡茂玉 高丹丹 鄭岳

摘要：UPLC測定綠原酸的方法與傳統的HPLC相比，UPLC的速度、靈敏度及分離度均較HPLC更高，它縮短了分析時間，同時減少了溶劑用量降低了分析成本。為測定通關藤注射液綠原酸含量提供了新的檢查方法。

關鍵詞：綠原酸；含量；通關藤注射液

綠原酸具有保護心血管、降糖、降脂、抗菌、抗病毒、抗白血病、抗誘變、抗癌等藥理作用[1]，但在體內能被蛋白質滅活。與咖啡酸相似，口服或腹腔注射時，可提高大鼠的中樞興奮性。可增加大鼠及小鼠的小腸蠕動和大鼠子宮的張力。有利膽作用，能增進大鼠的膽汁分泌。對人有致敏作用，吸入含有本品的植物塵埃后，可發生氣喘、皮炎等[2]。

1實驗材料：

1.1儀器設備：超高效液相色譜儀（沃特世科技（上海）有限公司）、電子天平（梅特勒多利多）。

1.2試劑：甲醇、磷酸、高純水、乙腈

2綠原酸含量UPLC測定方法學研究

2.1色譜條件

色譜條件：流動相比例乙腈：0.05%磷酸溶液=7：93；流速：0.50mL/min；柱溫：30℃；進樣量：3.0uL。

2.2方法學驗證

2.2.1專屬性。

檢測方法：精密稱取綠原酸對照品適量，配制成80μg/ml的綠原酸對照品溶液。再分別精密移取空白溶劑50%甲醇溶液、綠原酸對照品溶液和通關藤注射液3μl注入液相色譜儀，按照“2.1色譜條件”項下的條件進樣。

合格標準：溶劑無干擾，綠原酸峰與相鄰峰的分離度不得低于1.5

檢測結果：空白溶劑在主峰位置無干擾，綠原酸峰與相鄰峰的分離度為1.54，專屬性符合要求。

2.2.2重復性

檢測方法：取同一批通關藤注射液成品6份，分別按“2.1色譜條件”項下的條件進樣，記錄峰面積，計算RSD。

合格標準：重復性RSD小于等于2.0%。

檢測結果：重復性RSD為1.0%，在接受標準范圍內，說明重復性符合規定。

2.2.3線性

檢測方法：取綠原酸對照品分別配制成20.54μg/ml、61.26μg/ml、82.16μg/ml、102.70μg/ml、143.78μg/ml、205.40μg/ml、287.56μg/ml的系列溶液，按“2.1色譜條件”項下的條件進樣，記錄峰面積。以進樣濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，并繪制標準曲線，計算線性回歸方程及相關系數。

合格標準：線性相關系數r≥0.999

檢測結果：從上述可以得出相關系數為0.9998，大于目標值0.999，說明樣品在20.54～287.56ug/mL范圍內相關系數r為0.9997，在接受標準范圍內，說明線性關系符合規定在配制的濃度20.54ug/mL-287.56ug/mL范圍內呈現良好地線性。

2.2.4中間精密度

檢測方法：精密稱取綠原酸對照品適量，配制成79.3、79.4μg/ml和78.5、81.2μg/ml的綠原酸對照品溶液。由兩名分析人員按“2.1色譜條件”項下的條件，分別測定同一批通關藤注射液6份平行樣，計算出綠原酸含量及RSD%。

合格標準：中間精密度RSD≤2.0%

檢測結果：中間精密度RSD為0.7%，在接受標準范圍內，說明中間精密度符合規定。

2.2.5加樣回收率

檢測方法：精密稱取綠原酸對照品適量，配制成79.4、79.3μg/ml的綠原酸對照品溶液。再精密稱取綠原酸對照品20.54mg至50ml棕色容量瓶中，加50%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得綠原酸對照品儲備液。

合格標準：加樣回收率均在98%-102%范圍內，且結果的RSD≤2.0%。

檢測結果：加樣回收率99.7%，RSD%=1.4%在接受標準范圍內，說明回收率符合規定

2.2.6溶液穩定性

檢測方法：取通關藤注射液，分別于0、1、2、4、8、12、18、24h時，按“2.1色譜條件”項下的條件進樣，記錄峰面積，計算RSD%。

合格標準：RSD%≤2.0%

檢測結果如表1所示：

由上表可以看出其結果的RSD為0.7%，小于目標值2.0%，因此溶液在24h內穩定。

2.2.7耐用性

檢測方法：以流動相比例、流速、柱溫為本試驗的試驗因素，分別記作A、B、C，進行三因素正交試驗，各因素均取三個水平。

合格標準：每批RSD%≤2.0%

檢測結果：3批通關藤注射液綠原酸含量的RSD分別為0.5%、1.0%、0.8%，均小于目標值2.0%，因此耐用性符合規定。

2.2.8方法對比

檢測方法：精密稱取綠原酸對照品適量，配制成79.4μg/ml、79.3μg/ml的綠原酸對照品溶液。取6批已知綠原酸含量的通關藤注射液，按按“2.1色譜條件”項下的條件進樣，記錄峰面積，計算綠原酸含量與HPLC法測定的結果比較。

合格標準：F檢驗≤7.15，T檢驗≤2.228

檢驗結果：用1表示UPLC法測定結果，并以1測定數據為準，2表示HPLC法測定結果，結果評定：UPLC法與HPLC法測定數據無顯著性差異。

3結論

本次方法學研究建立了UPLC測定綠原酸的方法。超高效液相色譜儀的儀器管路比HPLC更細，更易堵塞，因此檢驗中用的試劑為默克得甲醇和默克的乙腈，水為屈臣氏的蒸餾水。對照品溶液以及供試品溶液均用0.22um的濾頭過濾后進樣。

參考文獻：

[1]嚴永旺，肖蘭，周旭，等。綠原酸的藥理作用及藥用研發對策[J].中國藥房，2017，（19）：143-146

[2]李恒華，羅超利，等。綠原酸的致敏作用研究[J].中國藥房，2015，（13）：1766-1769.

（作者單位：南京圣和藥業股份有限公司1

南京正大天晴制藥有限公司2）

作者簡介：

胡茂玉（1990—），女，江蘇南京人，助理工程師，專業領域：藥品檢驗與質量控制。

高丹丹（1988—），女，江蘇南京人，助理工程師，專業領域：藥品檢驗與質量控制。

鄭岳（1992—），女，寧夏石嘴山人，助理工程師，專業領域：藥品檢驗與質量控制。