電針對CFA大鼠感覺及情緒的二維調節及前扣帶皮層-初級體感皮層p-ERK表達的影響

吳澤民 王佳玲 徐立雷 孫晶 沈醉 朱怡霖 張海艷 姚淑靜 邵曉梅 方劍喬

摘要 目的：觀察電針對慢性炎性痛大鼠痛感覺及其所誘發情緒的干預效應及對前扣帶皮層（Anterior Cingulate Cortex，ACC）和初級體感皮層后肢區域（Primary Somatosensory Cortex，Hindlimb Region，S1HL）磷酸化細胞外調節蛋白激酶（Phosphorylated Extracellular Regulated Protein Kinases，p-ERK）表達的影響。方法：建立完全弗氏佐劑（Complete Freund′s Adjuvant，CFA）誘導的慢性炎性痛大鼠模型。痛感覺部分：將38只成年雄性SD大鼠隨機分為空白組（n=11）、模型組（n=13）、電針組（n=14），在造模前1 d、模后3 d、6 d、9 d檢測大鼠患足機械縮足閾（PWTs）的變化;痛情緒部分：將62只成年雄性SD大鼠，隨機分為空白組（n=21）、模型組（n=21）、電針組（n=20）進行條件性位置厭惡實驗（Conditioned Place Aversion，CPA）。通過自由跑動（15 min），剔除不符合條件的大鼠，造模前1 d進行條件化前訓練（45 min），模后2 h和第2天進行條件化訓練（45 min），模后第3天、9天進行檢測（15 min）。兩部分電針組大鼠均在造模后3 d～9 d進行電針干預，選取雙側“后三里”穴，刺激參數：2/100 Hz疏密波，初始電流強度1 mA，后每10 min增加0.5 mA，共30 min，1次/d，造模后第10天取材，采用免疫熒光法（IF）和免疫印跡法（WB）檢測大鼠ACC、S1HL的p-ERK的表達情況。結果：PWTs結果顯示，造模后第3天、第6天、第9天，模型組與電針組大鼠PWTs較空白組顯著降低（P<0.01），第9天電針組PWTs較模型組顯著升高（P<0.01）。CPA檢測結果顯示，造模后第3天，模型組和電針組CPA score值（大鼠在條件箱停留時間差，Pre-post）較空白組顯著升高（P<0.01），造模后第9天，模型組CPA score值較空白組顯著升高（P<0.01），電針組CPA score值較模型組顯著降低（P<0.01）。與造模后第3比較，造模后第9天模型組CPA score值顯著增加（P<0.01），電針組顯著降低（P<0.05）。IF檢測結果顯示，在左側S1HL，模型組p-ERK免疫陽性細胞的表達較空白組和電針組有上升趨勢，在右側S1HL和雙側ACC，模型組p-ERK免疫陽性細胞的表達較空白組和電針組均顯著升高（P<0.01）。WB結果顯示，在雙側S1HL，模型組p-ERK1/2蛋白表達與空白組比較，差異無統計學意義。在左側S1HL，電針組p-ERK1/2蛋白水平與模型組比較明顯降低（P<0.05），在右側S1HL，電針組p-ERK2蛋白水平與模型組比較明顯降低（P<0.05），在雙側ACC區，模型組p-ERK1/2蛋白水平較空白組有上升趨勢，電針組p-ERK1/2蛋白水平較模型組有下降趨勢。結論：電針可提高CFA模型大鼠機械痛閾并緩解CFA大鼠厭惡情緒;該效應可能與其下調右側S1HL中p-ERK表達水平和下調雙側ACC的p-ERK表達水平有關。

關鍵詞 電針;慢性炎性痛;磷酸化細胞外調節蛋白激酶;前扣帶皮層;體感皮層;痛感覺;痛情緒;大鼠

Abstract Objective：To observe the intervention effects of electroacupuncture on pain sensation and induced emotion in rats with chronic inflammatory pain and on the expression of phosphorylated extracellular regulated protein kinases（p-ERK）in anterior cingulate cortex（ACC）and somatosensory cortex（S1HL）.Methods：A model of chronic inflammatory pain induced by complete Freund′s adjuvant（CFA）was established.Pain sensation part：38 adult male Sprague-Dawley rats were randomly divided into a blank group（n=11），a model group（n=13），and an electroacupuncture group（n=14）.The changes of mechanical paw withdrawal threshold（PWTs）of rats were measured 1 day before modeling，3 days，6 days，and 9 days after modeling.Pain affect part：62 adult male SD rats were randomly divided into a blank group（n=21），a model group（n=21），an electroacupuncture group（n=20）for conditional position aversion test（CPA）.Rats that did not meet the criteria were excluded by free running（15 min）.Conditional training（45 min）was performed one day before modeling，and conditional training（45 min）was performed 2 hours and 2 days after modeling，and the test was performed on the 3rd and 9th day after modeling（15 min）.In the electroacupuncture group of the 2 parts of the experiment，electroacupuncture was performed on the 3rd to 9th day after modeling，one time per day，and the bilateral “Housanli” points were selected.Stimulation parameters：2/100 Hz sparse wave，initial current intensity was 1 mA，then increase 0.5 mA every 10 minutes for 30 min，the rats were sacrificed on the 10th day after modeling to detect the expression of p-ERK in rat ACC and S1HL by using immunofluorescence（IF）and Western blotting（WB）.Results：PWTs showed that PWTs in the model group and the electroacupuncture group were significantly decreased than those in the blank group on the 3rd，6th，and 9th day after modeling（P<0.01）.On day 9，PWTs in the electroacupuncture group were significantly increased than those in the model group（P<0.01）.The results of CPA test showed that the CPA score of the model group and the electroacupuncture group（the difference in the residence time of the conditional box，pre-post）was significantly increased than that of the blank group on the 3rd day after modeling（P<0.01）.On the 9th days，the CPA score of the model group was significantly increased than that of the blank group（P<0.01），and the CPA score of the electroacupuncture group was significantly decreased than that of the model group（P<0.01）.Compared with the 3rd day after modeling，the CPA score of the model group increased significantly on the 9th day after modeling（P<0.01），and the electroacupuncture group decreased significantly（P<0.05）.The results of IF showed that the expression of p-ERK immunoreactive cells in the model group was increased than that in the blank group and the electroacupuncture group on the left S1HL.In the right S1HL and bilateral ACC regions，the expression of p-ERK immunoreactive cells in the model group was significantly increased than that in the blank group and the electroacupuncture group（P<0.01）.Western Blotting results showed that the expression of p-ERK1/2 protein in model group was not significantly different from that in blank group in bilateral S1HL.In left S1HL，the level of p-ERK1/2 protein in electroacupuncture group was significantly decreased than that in model group（P<0.05）.On the right side of S1HL，the level of p-ERK2 protein in electroacupuncture group was significantly decreased than that in model group（P<0.05）.In bilateral ACC，the level of p-ERK1/2 protein in model group was increased than that in blank group，while that in electro-acupuncture group was decreased than that in model group.Conclusion：Electroacupuncture can increase the mechanical pain threshold of CFA model rats and alleviate the aversion of CFA rats; this effect may be related to down-regulation of p-ERK expression in the right S1HL and down-regulation of p-ERK expression in bilateral ACC regions.

Key Words Electroacupuncture; Chronic inflammatory pain; Phosphorylated extracellular regulated protein kinases; Anterior cingulate cortex; Somatosensory cortex; Pain sensory; Pain affect; Rat

中圖分類號：R245.9+7文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2019.06.003

國際疼痛研究學會（IASP）于1994年將疼痛定義為一種與組織損傷或潛在損傷相關的不愉快的主觀感覺和情緒體驗。疼痛被賦予了痛感覺（Pain Sensation）和痛情緒（Pain Affect）的雙重含義。臨床研究報道30%～50%的慢性痛患者會出現焦慮、抑郁、回避等負面情緒[1]，此種不良情緒長期伴隨著疼痛本身，嚴重影響患者的鎮痛療效和生命質量。以往對慢性痛的研究多集中在痛感覺層面，在整體至分子水平都取得了巨大進展，而對痛情緒的研究卻鮮見報道。臨床治療此類患者時除使用常規鎮痛藥物外，會加用抗焦慮抑郁藥，雖有一定臨床療效，但不良反應大，不宜長期服用[2]。針灸作為治療慢性痛的有效手段，可以有效抑制炎性痛、神經病理性痛、癌性痛等多種急慢性疼痛[3-5]。臨床上，針灸對抑郁、焦慮、失眠等情緒障礙性疾病治療作用也已得到廣泛認可[6-7]。本研究以CFA誘導的慢性炎性痛大鼠為模型，觀察電針改善痛行為和痛情緒效應及其對情緒相關腦區ACC和感覺相關腦區S1HL區p-ERK表達的影響，探討電針干預痛感覺和痛情緒的可能機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 100只健康成年清潔級雄性SD大鼠，體質量200～250 g（浙江中醫藥大學實驗動物中心提供）。每籠5只飼養于浙江中醫藥大學實驗動物中心，飼養環境：室溫23～25 ℃，濕度40%～60%，自由飲水進食，12 h循環燈光。實驗過程中對動物的處置遵照中華人民共和國科學技術部2006年頒布的《關于善待實驗動物的指導意見》。

1.1.2 試劑與儀器 Von Frey纖維絲測痛儀（美國stoelting公司），CPA箱（深圳市瑞沃德生命科技有限公司），HANS-200A穴位暨神經刺激儀（聯創科技南京濟生醫療科技有限公司），激光共聚焦掃描顯微鏡（日本Nikon，A1R-A1），M4酶標儀（MD公司），電泳-轉印系統（美國Bio-Rad公司），p-ERK1/2（Thr202/Tyr204）（美國Cell Signaling Technology，批號：4370S），ERK1/2（美國Cell Signaling Technology，批號：4695），Alexa Fluor594-AffiniPure（美國abcam，批號：ab150080），抗熒光淬滅封片液（碧云天公司，批號：P0128），BCA試劑盒（碧云天公司，批號：P0010），正常山羊封閉血清（鄭州益康生物工程有限公司，批號：20160607），超敏ECL化學發光試劑盒（碧云天公司，批號：P0018），IgG Goat Anti-Rabbit IgG（H+L）（美國Bio-Rad，批號：1721011）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 該實驗分為兩部分，38只雄性SD大鼠用于檢測痛感覺，隨機分為空白組（n=11）、模型組（n=13）、電針組（n=14）;62只雄性SD大鼠用于檢測痛情緒，隨機分為空白組（n=21）、模型組（n=21）、電針組（n=20）。造模時，抽取0.1 mL完全弗氏佐劑（Freund′s Adjuvant，Complete，sigma），皮下注射在模型組和電針組大鼠左后足底。空白組在相同的部位注射0.1 mL的生理鹽水。

1.2.2 干預方法 使用HANS-200A穴位暨神經刺激儀對實驗動物進行電針干預。參照《實驗動物穴位圖譜》中大鼠“后三里”的定位，選取大鼠雙側“后三里”穴進行電針刺激。電針參數：恒流方波輸出（脈沖寬度：0.6 ms 2 Hz，0.2 ms 100 Hz），初始強度1.0 mA，每10 min增加0.5 mA，遞增至2.0 mA，共計30 min。2 Hz和100 Hz 2種頻率交替工作。1次/d，連續7 d（模后第3天到第9天）。針灸針：華佗牌，0.22 mm×13 mm。同時，其余組予以同等抓取固定以平衡處理因素。

1.2.3 檢測指標和方法 1）機械縮足閾（PWTs）檢測：使用von Frey纖維絲測定大鼠左側后肢足底的機械痛閾值。將大鼠置于金屬網上，蓋以透明的有機玻璃罩（20 cm×10 cm×15 cm），待大鼠安靜后，用von Frey纖維絲刺激大鼠后肢足底中部，直至彎曲成S形，持續刺激6～8 s，觀察動物是否出現縮足反應。若大鼠在刺激時間內或在移開von Frey纖維絲時立即出現快速的縮足或舔足反應，則記為陽性反應。實驗所用von Frey纖維力度分別為0.4 g，0.6 g，1.0 g，2.0 g，4.0 g，6.0 g，8.0 g，15.0 g，26.0 g。測定首先從中等力度的von Frey纖維絲（4 g）開始，當該力度的von Frey纖維刺激不能引起陽性反應時，則給予相鄰大一級力度的纖維刺激;如出現陽性反應，則給予相鄰小一級力度的刺激，如此連續進行，直至出現第一次陽性和陰性（或陰性和陽性）反應的騎跨，再以此原則連續測定4次。不同刺激之間相隔30 s，以消除前一刺激的影響。根據公式50% PWT（g）=（10[xf+kδ]）/10 000，計算每只大鼠50%爪縮閾值。26.0 g是本法可能達到的最大50%縮足閾值，0.4 g是本法可能達到的最小50%縮足閾值。

機械閾值檢測時間點：造模前1 d（基礎痛閾），模后3 d、6 d、9 d。若模型組和電針組大鼠在模后第3天的痛閾相較基礎痛閾值明顯降低（P<0.01），表明制備大鼠CFA慢性炎性痛模型成功。

2）CPA行為學檢測：使用CPA檢測大鼠的條件位置厭惡情緒。該實驗分為4部分，自由跑動（free day）：取出裝置中間的隔板，使A（黑底且均勻分布白色三角形）、B箱聯通（白底且均勻分布黑色圓形），拍攝并記錄15 min內大鼠在裝置中活動的軌跡。剔除標準：大鼠在A或B室停留>80%或者<20%;條件化前（Pre-conditioning Day）：插入位于中間的隔板，隔開A、B箱，將A、B分隔成2個相對獨立的空間，選定A或B作為“非條件箱”，將大鼠放入其中，自由活動45 min以適應非痛環境;條件化第1天（Conditioning Day-1）：造模后2 h大鼠足部出現紅腫熱痛即將大鼠放入條件箱（疼痛環境）。大鼠在疼痛環境適應45 min后，取出大鼠至飼養籠，完成當日行為學檢測。條件化第2天（Conditioning Day-2）：操作時間及環境同第1天，將大鼠放入條件箱，繼續讓大鼠在條件箱適應45 min，取出大鼠至飼養籠，完成當日行為學檢測;條件化后自由跑動（Post-conditioning Day）：造模后第3天、9天，拿出隔板，使A、B箱聯通，拍攝并記錄15 min內大鼠在裝置中活動的軌跡。為保證實驗效果，每只大鼠實驗結束后整個裝置需要用75%乙醇擦拭，待裝置干凈無味再繼續實驗。若大鼠模后第3天在條件箱停留的時間少于造模前在該室停留的時間，說明大鼠因為疼痛對條件箱產生了厭惡，即成功建立CFA誘導慢性炎性痛的CPA模型。

3）免疫熒光染色：造模后第10天，大鼠腹腔注射7%水合氯醛麻醉（350 mg/kg）。暴露胸腔，經左心室向升主動脈灌注約200 mL的0.9%生理鹽水（4 ℃冰箱預冷）和150 mL 4%的多聚甲醛，將大鼠置于冰臺取出全腦，隨后在4%多聚甲醛溶液中固定24 h，分別經15%和30%蔗糖溶液梯度脫水后，液氮速凍放入-80 ℃低溫冰箱儲存備用。以25 μm的厚度分別在前囟前3.7 mm和前囟后1.2 mm切取ACC和S1HL腦片進行免疫熒光染色。采用貼片法在各組分別取出腦組織（ACC、S1HL）5片，用含有5%的BSA、0.3%Triton溶液（0.01 mol/L TBST溶液稀釋）37 ℃水浴箱孵育1 h，加入含5%BSA的一抗混合液（rabbit-anti-pERK，1∶400）（TBST稀釋）的p-ERK一抗，放入濕盒在4 ℃孵育16 h，用PH7.4的TBST溶液漂洗3次，10 min/次，加入用0.01 mol/L TBST稀釋的含5%BSA的熒光二抗混合液（Alexa Fluor 594-goat anti-rabbit 1∶500）的二抗，37 ℃水浴箱避光孵育1 h。TBST避光漂洗6次，10 min/次，組織干燥后，用抗熒光淬滅劑封片。采用Nikon A1R激光共聚焦顯微鏡在10倍物鏡下拍攝圖像，觀察大鼠雙側ACC及S1HL的p-ERK的陽性細胞數。每組選擇3只大鼠，每只大鼠選取5張ACC和S1HL切片，用NIS elements AR軟件統計相應區域陽性細胞數，根據文獻[8-9]可知在ACC第Ⅲ層陽性細胞的表達率高，因此結合實驗結果選取第Ⅲ層進行計數。S1HL區p-ERK的表達主要集中在第Ⅱ/Ⅲ層，因此選取第Ⅱ和Ⅲ層進行計數[10-11]。

4）免疫印跡法：造模后第10天，大鼠腹腔注射7%水合氯醛麻醉（350 mg/kg）。用4 ℃預冷的0.9%生理鹽水迅速灌注升主動脈后快速取出全腦。根據大鼠腦立體定位圖譜《The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates》[12]確定ACC取材范圍：前囟（Bregma）（+3.2 mm）～（+1.7 mm），左右旁開0.8 mm，深度2.6 mm。S1HL取材范圍：前囟（Bregma）（-0.5 mm）～（-2.5 mm），左右旁開1.0 mm，深度2.0 mm。液氮速凍后放入-80 ℃冰箱儲存備用。將大鼠組織經過RIPA裂解液裂解，于冰上勻漿，低溫離心后取上清液，BCA法進行蛋白定量。按照試劑說明書經過SDS-PAGE電泳、轉膜、封閉，加入p-ERK1/2（Thr202/Tyr204）一抗（1∶2 000）4 ℃孵育過夜（18 h），加入IgG（H+L）-HRP二抗（1∶3 000）室溫孵育1 h，ECL化學發光顯影。Image Quant TL軟件對條帶灰度值進行半定量分析，即將各組p-ERK1/2的灰度值除以ERK1/2的灰度值，算出各組的磷酸化的相對表達水平，然后把空白對照組的相對表達量作為1倍數，其他組相對空白對照組的比值（增加倍數）則作為柱狀圖的縱坐標。

1.3 統計學方法

實驗結果采用均數±標準誤（±s）表示。使用SPSS 19.0軟件進行統計和分析，多組間比較選用單因素方差分析（ANOVA），組間兩兩比較采用LSD檢驗。PWTs數據采用重復測量方差分析，組間兩兩比較，方差齊性時采用LSD檢驗，方差不齊時采用Dunnett′s T3檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 電針對CFA誘導的慢性炎性痛大鼠機械痛閾的影響

大鼠造模前、造模后第3天、6天、9天的機械痛閾的測量結果顯示，造模前，空白組、模型組、電針組大鼠的機械痛閾值無統計學意義（P>0.05）。造模后第3天、6天、9天，與空白組比較，模型組、電針組機械痛閾值顯著降低（P<0.01），說明CFA誘導的慢性炎性痛模型成功。而造模后第9天，與模型組比較，電針組機械痛閾值顯著升高（P<0.01）。見圖1。

2.2 電針對CFA誘導的慢性炎性痛大鼠厭惡情緒的影響

大鼠CPA結果顯示，造模前，空白組、模型組、電針組在條件箱與非條件箱停留的時間無統計學意義。造模后第3天，與空白組比較，模型組和電針組CPA score值顯著升高（P<0.01）;造模后第9天，與模型組比較，空白組和電針組CPA score值顯著降低（P<0.01）。與造模后第3天比較，造模后第9天模型組CPA score值顯著增加（P<0.01），電針組CPA score值顯著降低（P<0.05）。見圖2。

2.3 電針對CFA誘導的慢性炎性痛大鼠S1HL及ACC區p-ERK免疫陽性細胞數及蛋白表達的影響如圖3～圖6所示，編號A、B、C圖分別代表雙側S1HL腦區、雙側ACC腦區的空白組、模型組、電針組p-ERK免疫陽性細胞熒光圖;圖D是對應的p-ERK免疫陽性細胞統計圖;圖E、G分別是CFA模后10 d時，S1HL、ACC水平p-ERK的免疫印跡結果圖和灰度統計圖;圖F中紅框區域是圖A～C在大鼠冠狀位腦片位置（AP+2.7 mm;AP-1.5 mm），圖中白色箭頭為陽性點。

免疫熒光結果：左側S1HL，與空白組比較，模型組p-ERK免疫陽性細胞的表達有上升趨勢;與模型組比較，電針組p-ERK免疫陽性細胞的表達有下降趨勢。右側S1HL和雙側ACC，與模型組比較，空白組和電針組p-ERK免疫陽性細胞的表達均顯著降低（P<0.01）。

免疫印跡結果：左側S1HL，與模型組比較，電針組p-ERK1/2蛋白水平明顯下降（P<0.05）。右側S1HL，與模型組比較，電針組p-ERK2蛋白水平明顯下降（P<0.05）。雙側ACC腦區，與空白組比較，模型組p-ERK1/2蛋白水平有上升趨勢;與模型組比較，電針組p-ERK1/2蛋白水平有下降趨勢。

3 討論

疼痛具有感覺和情緒雙重含義，疼痛在感覺維度上體現了對于傷害性刺激的感覺成分的辨別，如性質、強度、定位、時間過程，主要接受外側疼痛系統調控。痛相關的負面情緒與疼痛長遠的影響密切相關。痛情緒維度上表現出了疼痛的情感動機成分，其中包括機體產生的厭惡程度（對受到的疼痛刺激），和動機強弱（躲避疼痛），它的神經元活動基礎位于內側丘腦、杏仁核和邊緣皮層[13-14]。目前關于疼痛的研究也逐漸從單一關注痛感覺發展為同時關注痛感覺、痛情緒、痛認知等多維度。研究者們逐漸把疼痛理解為是一種高度主觀的多維度的體驗。

中樞神經系統是一個與疼痛相聯系的神經網絡，包括了感覺維度、情緒維度和認知維度，和部分潛在的可分離的神經網絡[15-16]，ACC和S1HL分別是大腦中與情緒和感覺相關的重要腦區。ACC主要功能是對疼痛的情緒信息進行編碼，前扣帶皮層吻側區（rACC）是加工疼痛情緒的特異性腦區。研究顯示[17]在ACC的cAMP/PKA通路，可能通過CREB的磷酸化，參與到痛敏反應及痛情緒的發展過程。而在脊髓背角MAPK/CREB通路可能涉及到痛情緒反應[18]。

細胞外調節蛋白激酶屬于絲裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated Protein Kinases，MAPKs）家族的一員。研究證明，ERK參與調節神經元可塑性（長時程增強、長時程抑制）與記憶密切相關。在疼痛狀態下，能長期有效的激活ERK1/2的磷酸化，特別在初級體感皮層SI、海馬、脊髓。在正常大鼠的SI，ERK2的表達多于ERK1，ERK的磷酸化表達較少[19]。ACC中p-ERK的表達對于痛情緒的調節起到了至關重要的作用[20]，ACC中ERK的活化參與到了足底注射福爾馬林或足底手術切口疼痛誘導的焦慮、抑郁等負性情緒過程[21]。Zhong等[22]認為緩解p-ERK的過度激活是對于痛相關焦慮情緒的一種極具潛在價值的治療方法。SNL大鼠ACC中ERK的激活上調也伴隨著大鼠的焦慮樣行為的加重，通過針刺能下調其ERK的激活[23]。本實驗結果表明，在慢性痛的條件下，體感皮層ERK的磷酸化表達增加，且主要表達在SI的Ⅱ/Ⅲ層，與R.K.Hofbauer的研究成果相似[24]。結果提示CFA大鼠模后9 d，右側體感皮層p-ERK表達水平顯著上調與痛感覺的刺激密切相關。

臨床和實驗研究反復證明，針灸是治療慢性痛的有效手段，已從整體、細胞、分子、基因水平深刻闡釋了始動、外周、中樞的針灸鎮痛原理[25-27]。隨著對痛情緒在慢性痛發展過程中重要性的認識，已有研究發現針灸對疼痛誘發的情緒改變有治療作用。針刺對痛感覺的干預機制不是針刺鎮痛的全部機制，電針對慢性痛發展過程中痛情緒的調節，可能是針刺鎮痛又一關鍵機制。本實驗結果顯示，在模后3 d，除空白組外大鼠機械痛閾值顯著降低，說明CFA誘導的慢性炎性痛模型成功。從造模后第3天到第9天予以2/100 Hz電針干預后，與模型組比，電針組機械痛閾值顯著升高。說明電針對慢性炎性痛起到了鎮痛作用。CPA實驗的結果表明，通過電針的干預，大鼠由疼痛誘導的厭惡情緒得到了改善。接下來對S1HL區p-ERK表達水平的檢測表明電針可能通過下調右側體感皮層p-ERK表達水平發揮鎮痛作用。而起到改善疼痛誘發的厭惡情緒的作用可能是下調了ACCp-ERK表達的結果，這也驗證了Zhong等認為的[22]抑制p-ERK的過度激活是對于痛相關厭惡情緒的一種極具潛在價值的治療方法。也與我們前期得出的結果相一致[23]。

綜上所述，本實驗通過足底注射CFA復制慢性炎性痛大鼠模型，通過PWTs和CPA實驗以及對大腦S1HL和ACC中p-ERK表達水平的檢測，證明電針可提高CFA模型大鼠痛閾水平并緩解CFA大鼠的厭惡情緒，達到降低痛感覺和改善痛情緒的雙重目的，其機制可能是電針下調了右側S1HL和雙側ACC中p-ERK的表達水平。本實驗分開驗證電針干預痛感覺和痛情緒相關腦區的作用機制，大腦是一個復雜的系統，各腦區之間有著千絲萬縷的聯系，通過相互影響發揮作用，S1HL與ACC之間可能存在的解剖和功能上的相互聯系，需要在今后的研究當中進一步證明。

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（2019-05-10收稿 責任編輯：徐穎）