LASP1在鼻咽癌組織中的表達與預后的關系分析

摘要：目的：探究LASP1在鼻咽癌組織中的表達，并同時分析該蛋白對該類患者預后的影響。方法：選取2014年6月至2019年5月的50例鼻咽癌患者作為標本來源，利用免疫組化法對其組織標本中LASP1的表達進行檢測，并利用Kaplan-Meier法分析該蛋白對患者預后預測的影響。結果：（1）鼻咽癌患者的N（分期）與TNM分期均屬于危險因素，高、低表達之間的差異具有統計學意義（<0.05）。（2）LASP1為鼻咽癌患者的獨立預后因子，<0.05，差異具有統計學意義。結論：通過分析LASP1的表達明確了對鼻咽癌患者預后的影響，為今后鼻咽癌的臨床診斷與治療提供了新的標志物與靶點。

關鍵詞：LASP1蛋白;鼻咽癌;表達與預后

【中圖分類號】R856 ???【文獻標識碼】A ???【文章編號】2107-2306（2019）06-059-02

目前惡性腫瘤已經嚴重威脅到人們的身體健康以及生命安全，對于此類疾病，臨床中大多采用化學治療的方式。鼻咽癌是一類具有地域性的惡性腫瘤，多發于我國東南亞以及我國的南方地區，這種疾病的發病率占頭頸部惡性腫瘤的第一位。LASP1最初出現于乳腺癌轉移性淋巴結cDNA文庫中，又稱為MLN501。該蛋白能夠在機體中的肌動蛋白聚集位置起到結構支架的作用，同時能夠轉移至細胞核中，發揮細胞核轉導分子的能力。LASP1在食管癌、乳腺癌及鼻咽癌等多種腫瘤中的高表達使其能夠參與腫瘤遷移、粘附以及增殖等過程。通過前期研究發現通過遏制LASP1能夠有效遏制腫瘤的生長以及轉移。但是在研究過程中發現目前缺少關于LASP1影響鼻咽癌預后預測結果的研究，因此本實驗將研究LASP1在鼻咽癌組織中的表達及對預后的影響，現匯報如下。

1材料與方法

1.1一般資料

選取2014年6月至2019年5月的50例鼻咽癌患者作為標本來源。所有患者均已在入院后接受HE染色檢查，并由病理科醫師進行確診;此外TNM分析必須根據AJCC/UICC最新分期標準進行分析。所有研究對象的隨訪時間從開始治療的第一天至死亡或最后一次復查為止。所有研究對象的鼻咽癌細胞株HNE1、SUNE1、CNE2、CNE1以及HONE1等均由本院放療科實驗室長期保存。本研究已通過倫理委員會批準。

1.2方法

1.2.1免疫組化實驗

將鼻咽癌標本蠟塊切成2μm薄片放在玻片上，脫臘及脫水后利用檸檬酸鈉緩沖溶液進行沖洗。LASP1購自于Proteintech公司，在4℃的環境中孵育并過夜。經過0.05%PBSTriton清洗后必須再次孵育，環境為室溫。隨后用同樣方式清洗后，將含有DAPI的封片劑進行染色并封片。封片后于零下20℃的環境中避光保存，利用激光共聚焦顯微鏡進行觀測。每張切片均取3個視野，使用ImageProPlus軟件分析免疫組化結果。其分析過程包括：選取圖片上的目標分析區域，并檢測其積分光密度，隨后選取其有效區域的面積并進行計算光密度平均值。期間使用的ABC染色試劑盒以及DAB顯色試劑盒均由Vector Laboration公司生產。

1.2.2Western Blot實驗

利用Bio Rad Pro-tein Assay Kit試劑盒對LASP1蛋白樣品濃度進行檢測，并利用Bio-Rad電泳槽將蛋白轉移至PVDF膜上。加入LASP1一抗并孵育過夜后加入對應的二抗，孵育1h后根據超敏發光液試劑盒說明書將其顯影與定影，最后利用膠片掃描的方式存檔。

1.2.3Real-time PCR實驗

首先提取細胞株總RNA，隨后利用M-MLV逆轉錄酶進行轉錄。轉錄結束后根據SYBR GreenqPCR SuperMix-UDG的操作說明書定量分析PCR。

1.3觀察指標

（1）LASP1在鼻咽癌患者中的表達;（2）LASP1與鼻咽癌患者預后的關系。

1.4統計學處理

針對研究數據，采用SPSS 20.0統計學軟件進行數據分析。計數資料用[（%）]表示，運用進行檢驗。同時利用多因素分析方式評估預后預測效果的影響因子。<0.05，代表差異具有統計學意義。

2結果

2.1LASP1在鼻咽癌患者中的表達

經研究發現，分析患者的年齡、性別以及病理分期等因素分別在低表達及高表達中的表現可以證實，鼻咽癌患者的N（分期）TNM分期均屬于危險因素，高低表達之間的差異比較顯著，<0.05，差異具有統計學意義。附表1。

2.3 LASP1與鼻咽癌患者預后的關系

從本次研究結果來看，眾多變量中僅LASP1為鼻咽癌患者的獨立預后因子，<0.05，差異具有統計學意義。附表2。

3討論

既往研究表示LASP1是細胞在運動過程中的一種關鍵蛋白分析，特別是在惡性腫瘤中其表達水平更高。LASP1作為細胞支架蛋白組成之一具有影響細胞遷移的作用。前期研究結果顯示LASP1含有LIM、NR和SH3結構域，不僅能夠良好地在胞漿中表達，并且能夠與CXCR2和Vi-mentin等多種蛋白結合并參加腫瘤細胞與間質細胞的遷移過程。本研究結果顯示，LASP1低表達患者的OS、DMFS、RFS水平均顯著低于LASP1高表達患者，證實LASP1在鼻咽癌發生進展過程中占據重要地位。此外多因素研究結果表示LASP1高表達以及TNM分期是鼻咽癌患者OS的獨立預后因子，證明LASP1表達水平的高低能夠進一步鑒別鼻咽癌患者預后的好壞。近幾年的研究結果顯示LASP1蛋白分子與CXCR12結合后能夠有效促進LASP1細胞核轉位并激活細胞內的甲基化過程，而本研究結果也表示LASP1主要表達范圍為鼻咽癌細胞胞漿，能夠借助與骨架蛋白結合的功能發揮作用，與上述結果基本一致。

綜上所述，LASP1在鼻咽癌組織中具有非常明顯的表達，并且其表達水平與患者的生存情況呈正相關，因此LASP1表達也是鼻咽癌患者的獨立預后因子。由此證實LASP1作為腫瘤促進因子不僅能夠參與鼻咽癌的發展，而且能夠為鼻咽癌的臨床治療指導提供有力依據。

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作者簡介：黃金寧，男，1978年8月出生，本科學歷，民族：漢族;籍貫：廣東電白;研究方向：主要從事病理學診斷;職稱：主治醫師