IL-33在結直腸癌中的表達及其臨床意義

趙學勤 王東明 樸紀穎 段旭峰

[摘要]目的：探討在結直腸癌中白細胞介素-33（IL-33）的表達與臨床意義，旨在為結直腸癌診斷與治療提供參考依據。方法：選取本院于2017年12月-2019年2月期間收治的120例患者的結直腸組織標本作為研究對象，包括35例癌旁組織，44例結直腸腺瘤，41例結直腸腺癌，均予以結直腸癌根治術予以治療。采用免疫組織化學染色法對上述患者IL-33表達情況進行檢測，并探討其表達狀況與患者臨床特征之間的關系。結果：在癌旁組織中IL-33表達量最低，在結直腸腺瘤中則主要在表面上皮予以分布，與癌旁黏膜組織無顯著差異（P>0.05）。而IL-33在結直腸腺癌組織中的陽性表達率顯著高于癌旁黏膜與結直腸腺瘤組織，差異具有統計學意義（P<0.05）：結直腸癌患者中性別與IL-33表達無顯著差異（P>O 05）;與浸潤程度、淋巴結轉移以及臨床分期具有顯著關系，差異具有統計學意義（P<0.05）。討論：IL-33表達與結直腸癌臨床分期、浸潤程度以及淋巴結轉移等惡性程度因素具有顯著相關性，在結直腸癌早期診斷中IL-33可作為標志物與治療靶點。

[關鍵詞]結直腸癌;白細胞介素;IL-33;表達水平

[中圖分類號]R735.24[文獻標識碼]A [文章編號]2096-5249（2019）07-012-02

結直腸癌作為第三位高發癌癥，屬于最為常見的消化系統腫瘤，具有較高的發病率及死亡率。患者在臨床上早期癥狀不明顯，大部分患者在確診時就已經發生肝臟遠處轉移，而該類患者平均生存時間不到2年。同時由于大部分結直腸患者發病于中老年人群，通常這部分人群會伴有其他基礎疾病，因而在臨床治療中容易產生精神異常、腸道調節功能不良等一系列不良反應的發生，即便近年來臨床治療手段得到提高，但仍未顯著提高患者的總生存率。白細胞介素在免疫反應調節與細胞活化增殖等環節中發揮著重要作用，其中白細胞介素-33（IL-33）主要于如炎性細胞、間葉細胞以及上皮細胞等多種類型細胞中表達，因而在自然免疫中具有重要位置。鑒于此，本次以本院收治的120例患者的結直腸組織標本作為研究對象，采用免疫組織化學染色法對患者IL-33表達情況進行檢測，并探討其表達狀況與患者臨床特征之間的關系。現將研究結果分析如下：

1 資料與方法

1.1一般資料：選取本院于2017年12月-20195F2月期間收治的120例患者的結直腸組織標本作為研究對象，其中包括35例癌旁組織，44例結直腸腺瘤，41例結直腸腺癌，患者及其家屬均簽署知情同意書，且經醫院倫理委員會批準。男性患者74例，女性患者46例;年齡36-82歲，平均年齡（65.12±9.22）歲。

1.2儀器與試劑：試劑包括兔抗人IL-33單克隆抗體，EDTA抗原修復液，PBS緩沖液，鼠/兔通用型二抗，酶底物顯色劑（DAB），3%HO溶液，蘇木素染色液，牛血清白蛋白。儀器包括-80℃低溫冰箱，4℃冰箱，振蕩器，通風櫥，載玻片，蓋玻片，孵育盒，電子天平，冷凍離心機，顯微鏡DM-2500，不銹鋼壓力鍋，耐高溫塑料病理切片架，不銹鋼病理切片架。

1.3試驗方法：于85℃烘烤結直腸癌組織芯片lh后，采用100%二甲苯脫蠟3次，15min/次，梯度酒精水化（100%無水乙醇5min x 2次、95%乙醇溶液5min x 2次、75%乙醇溶液5min x1次），置于清水中進行10min浸泡，再于蒸餾水中浸洗10min。將20ml的EDTA抗原修復液于不銹鋼壓力鍋中采用去離子水稀釋，至1000ml后加熱至沸騰，將組織芯片采用耐高溫塑料病理切片架固定后放置于其中進行5min抗原修復。自然冷卻至室溫，置于清水中進行10min浸泡與10min蒸餾水中浸洗。于室溫下降組織芯片室溫下于3%過氧化氫溶液中浸泡30min，然后在組織芯片表面上滴加0.3%牛血清白蛋白，并在37℃溫度下的孵育盒中進行30min孵育，去除表面液體后采用PBS液體進行3次浸洗，5min/次。組織芯片表面滴加一抗后置于孵育盒內，并將其放置于4℃冰箱中進行14h左右的孵育。取出芯片后采用PBS液體進行3次浸洗，5min/次。加入辣根過氧化物酶（HRP）標記后的鼠/兔通用型二抗，置于溫度為37℃的孵育盒中進行30min孵育。去除表面液體后采用PBS液體進行3次浸洗，5min/次，滴加DAB顯色劑約10min后于清水中浸洗10min。將組織芯片浸潤于蘇木素染色液中0.5min后采用清水中浸洗5min，然后組織芯片經梯度酒精脫水，風干后采用中性樹脂與蓋玻片封片。

1.3觀察指標：均經兩位病理醫師采用雙盲法進行判定，陽性判定標準為組織中染色為棕黃色或棕褐色部位，且每個芯點中陽性面積>50%，反之為陰性。

1.4統計學分析：本次研究所得數據均經SPSS20.O軟件予以統計學計算。計量指標以（%）形式展開，x檢驗;計數指標以（x±s）形式展開，t值檢驗。P<0.05表明數據比較具有統計學意義。

2 結果

2.1IL-33在組織中表達情況分析：在癌旁組織、結直腸腺癌與結直腸腺瘤中經免疫組織化學檢驗表明其均有表達，且陽性信號主要定位于細胞漿與表面上皮。其中在癌旁組織中IL-33表達量最低，在結直腸腺瘤中則主要在表面上皮予以分布，與癌旁黏膜組織無顯著差異（P>0.05）。而IL-33在結直腸腺癌組織中的陽性表達率顯著高于癌旁黏膜與結直腸腺瘤組織，差異具有統計學意義（P<0.05）;且陽性信號主要集中于細胞漿以及表面上皮。見表1：

2.2比較41例結直腸癌病理指標與IL-33表達相關性：結直腸癌患者中性別與IL-33表達無顯著差異（P>0.05）;與浸潤程度、淋巴結轉移以及臨床分期具有顯著關系，差異具有統計學意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

結直腸癌作為臨床上較為常見的胃腸道惡性腫瘤，通常情況下，腺瘤轉變為散發性結直腸癌中不斷地激活強烈的炎癥反應，進而便會引發一系列基因突變及相關細胞因子改變，最終促使結直腸腺瘤轉變為結直腸腺癌。IL-33屬于炎癥因子白細胞介素細胞因子家族中的促炎癥細胞因子之一，在本次研究中，癌旁組織中IL-33表達量最低，IL-33在結直腸腺癌組織中的陽性表達率顯著高于癌旁黏膜與結直腸腺瘤組織，差異具有統計學意義（P<0.05）。這說明在構建結直腸癌細胞微環境中IL-33具有非常重要作用。除此之外，結直腸癌患者中性別與IL-33表達無顯著差異（P>0.05）;與浸潤程度、淋巴結轉移以及臨床分期具有顯著關系，差異具有統計學意義（P<0.05）。這說明IL-33可能會促進疾病等級發展，對結直腸癌預后具有密切聯系。

綜上所述，IL-33表達與結直腸癌臨床分期、浸潤程度以及淋巴結轉移等惡性程度因素具有顯著相關性，是促進疾病等級發展的重要因素。因此，在結直腸癌早期診斷中IL-33可作為標志物與治療靶點。