連翹等六種中草藥乙醇提取液抑菌效果研究

譚廣強

摘 要：為了探討連翹等6種中草藥對常見致病菌（大腸桿菌、金黃色葡萄球菌及歐文氏菌）的抑菌效果。本實驗利用95%的乙醇對連翹、黃連、金銀花、訶子、苦參、蒲公英等六種中草藥進行提取并濃縮為1g/ml，通過測定抑菌圈的大小來比較6種中草藥的抑菌效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃連對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑較大而且清晰，金銀花對歐文氏菌的抑菌圈直徑較大并且清晰。這表明，黃連對金黃色葡萄球菌抑菌作用較強，金銀花對歐文氏菌的抑菌作用較強。

關(guān)鍵詞：抑菌作用;中草藥;大腸桿菌;金黃色葡萄球菌;歐文氏菌

我們生活的環(huán)境當中無時無刻不存在著大量的微生物，其中細菌就是分布十分廣的一類微生物。而大多數(shù)細菌都是對人類有害的，會引起人類感染各種疾病。大腸桿菌、金黃色葡萄球菌以及歐文氏菌就是較為常見的致病菌。大腸桿菌（Escherichia coli），又叫大腸埃希氏菌，大腸桿菌是條件致病菌，在一定條件下可以引起人和多種動物發(fā)生胃腸道感染或尿道等多種局部組織器官感染 [1] 。金黃色葡萄球菌是常見的食源性致病菌，廣泛存在于自然環(huán)境中。金黃色葡萄球菌 在適當?shù)臈l件下，能夠產(chǎn)生腸毒素，引起食物中毒。近幾年，金黃色葡萄球菌引發(fā)的食物中毒報道層出不窮，金黃色葡萄球菌成為僅次于沙門氏菌和副溶血桿菌的第三大微生物致病菌 [2] ?。歐文氏菌是寄生于植物并引起腐敗病，因美國植物病理學家Erwin F.Smith而得名，但不少學者認為應納入大腸桿菌類，屬于桿菌屬。由于它帶有果膠多聚半乳糖醛酸酶，因而侵害植物，從而對人體造成較大的危害。中草藥相對于化學制藥有作用溫和、副作用小等優(yōu)點，研究中草藥的抑菌效果對于研制中藥制品的抗菌藥物具有較大的意義，本實驗通過測定連翹、黃連、金銀花、訶子、苦參、蒲公英對大腸桿菌、金黃的葡萄球菌以及歐文氏菌抑菌圈的大小初步研究該6種中藥抑菌效果的強弱，現(xiàn)報告如下。

1 儀器與材料

1.1主要儀器與設備 恒溫培養(yǎng)振蕩器（ZWYE-2401：上海智城分析儀器制造有限公司），生物安全柜，電熱鼓風干燥箱（上海一恒科學儀器有限公司），立式壓力蒸汽滅菌器（上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠），恒溫水浴鍋（上海亞榮生化儀器廠），高速多功能粉碎機（上海緣沃工貿(mào)有限公司），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，醫(yī)用紗布。

1.2 試劑與材料 連翹、黃連、金銀花、訶子、苦參、蒲公英（均滿足實驗要求），無水乙醇（分析純），大腸桿菌（CMCC（B）44113），金黃色葡萄球菌（CMCC（B）26003），歐文氏菌，氯化鈉（分析純），胰蛋白胨（上海緣肽生物技術(shù)有限公司），瓊脂粉（北京索萊寶科技有限公司），超純水，酵母提取物，0.45um濾膜。

2 方法與步驟

2.1 中藥提取液的制備

將連翹、黃連、金銀花、訶子、苦參、蒲公英置于多功能高速粉碎機中粉碎，粉碎后準確稱取28.00g，加入95%乙醇至280ml浸泡72小時。浸泡完成后冷凝回流2h，用八層紗布過濾、收集濾液，將濾渣回收再加入95%乙醇至280ml繼續(xù)回流2h，合并兩次濾液。將兩次合并后的濾液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸去多余的乙醇，最后經(jīng)0.45um濾膜過濾定容到28ml即可得到1g/ml的中藥提取液。

2.2 LB培養(yǎng)基的制備

分別稱取950.00g超純水，胰蛋白胨10.00g，酵母提取物10.00g，氯化鈉10.00g，瓊脂粉20.00g至1000ml容量瓶中，高壓滅菌備用。

2.3 2.3 抑菌圈的測定

先往已高壓滅菌的平板中傾注20ml左右平板培養(yǎng)基，水平靜置凝固，接種0.1ml菌懸液，涂布均勻后備用。用紙片擴散法測定6種中草藥的抑菌作用，等到試驗平板的瓊脂表面凝固水分干燥后，用記號筆將培養(yǎng)皿等分為4份，用無菌鑷子夾取4份6mm藥敏紙片分別貼在培養(yǎng)皿中被等分區(qū)域，用移液器吸取10uL中藥提取液滴于濾紙片上，培養(yǎng)皿的圓心放置6mm藥敏紙片，將平板倒置于霉菌培養(yǎng)箱中28℃培養(yǎng)取出培養(yǎng)好的試驗平板，采用十字交叉法用游標卡尺測量抑菌圈直徑，以直徑表示抑菌圈的大小。

3 結(jié)果與結(jié)論

3.1 結(jié)果 6種中草藥對（大腸桿菌、金黃色葡萄球菌及歐文氏菌）的抑菌效果如表1所示

（2）+：抑菌圈清晰，圈內(nèi)無菌

3.2 結(jié)論

由實驗結(jié)果可知，黃連、訶子、苦參、連翹的醇提液對金黃色葡萄桿菌有抑制作用，黃連的抑菌效果更強;蒲公英的醇提液對三種菌都沒有明顯抑菌作用;黃連、金銀花、訶子、苦參的醇提液對歐文氏菌都具有明顯的抑菌作用。

4 討論

綜上所述，連翹等六種中草藥對于（大腸桿菌、金黃色葡萄球菌及歐文氏菌）均有不同程度的抑菌作用，本實驗通過以上研究數(shù)據(jù)將為中草藥抗菌成分的發(fā)現(xiàn)、提取、研發(fā)提供一定的線索。

參考文獻

[1] 殷澤祿，萬虎.大腸桿菌的研究[J].甘肅畜牧獸醫(yī)，2019，49（5）：33-35.

[2] 張從超.生乳中金黃色葡萄球菌的快速檢測及耐藥性研究[D].濟南，齊魯工業(yè)大學，2017.

[3] 孟靜思，袁進罡，馬輝.中草藥蒲公英的體外抑菌試驗[J].生物化工，2013，36 （3） ：29-32.

[4] 王瑞君.幾種中草藥對金黃色葡萄球菌體外抑制作用的研究[J].現(xiàn)代食品科技，2009，25（9）：1104-1106.

[5] 李巧如，任健康，劉宗智，等.18種中草藥抗菌作用的篩選[J].陜西中醫(yī)，2002，23（6）：555.