液相色譜法測定葡萄酒中著色劑方法的研究與探討

張碩 王磊

摘要：本文通過多年的實踐經驗，采用了變波長超高效液相色譜法，充分利用每種著色劑最大可見吸收波長，在檢測過程中變化波長進行測定，避免了單一波長下繁瑣的前處理，減少提取過程的損失，并且避免雜質在紫外區對樣品測定的干擾，保持基線平穩，相應的提高了幾種色素的靈敏度。

關鍵詞：著色劑;高效液相色譜法

合成著色劑是為了賦予或改善食品色澤而添加到食品中的物質，它不是食品的成分，在著色劑合成中可能伴有其他副產品而造成污染，特別是早期使用的合成著色劑很多發現具有致癌性，因此世界各國對食用合成著色劑都嚴格控制。目前，我國允許使用的安全性較高的只有8種。對合成著色劑的檢測通常采用高效液相色譜法。

《檢測和校準實驗室能力的通用要求》規定，檢測實驗室應開展測量不確定度評定工作，當檢測結果臨近臨界值時，測量不確定度分析評定是檢測工作的重要技術組成部分。我們采用了變波長超高效液相色譜法，充分利用每種著色劑最大可見吸收波長，在檢測過程中變化波長進行測定，避免了單一波長下繁瑣的前處理，減少提取過程的損失，并且避免雜質在紫外區對樣品測定的干擾，保持基線平穩，相應的提高了幾種色素的靈敏度。同時，超高效液相色譜大大縮短了分析時間，節約了成本。

一、材料與方法

（一）儀器

ACQUITY iJPLC超高效液相色譜系統

（二）色譜條件

色譜柱;ACQUITY UPLCBEH C柱，2.1×50mm，1.7μm;流動相：甲醇（A），0.02mol/L乙酸銨（B）;流速：0.2ml/min;進樣量：3μL;柱溫：30℃;梯度洗脫程序見表1。

（三）樣品測定

均勻稱取樣品10g，用檸檬酸或稀氨水將樣品調節到pH=6-7左右，加水定容至50.0mL，經0.22μm濾膜過濾上機。根據保留時間定性，峰面積定量，以峰面積對濃度作標準曲線，計算回歸方程，外標法定量。

二、結果與討論

（一）流動相的選擇

采用梯度洗脫，通過試驗調整流動相的比例，最終確定梯度洗脫條件（見表1），我們可以發現各峰分離完全，且峰形良好，分析時間短。

（二）測定波長的選擇

采用ACQUITY UPLC測定樣品時可以設定檢測波長程序，使儀器在不同時刻用不同波長測定樣品。經過反復測定發現，這幾種合成著色劑的保留時間穩定、重現性好，因此可以在每種著色劑出峰的時間將波長設定為其最大可見吸收波長。國標采用單一的254nm進行檢測，但在此波長下有吸收的化學組分很多，會形成大量干擾峰影響著色劑的檢測。采用每一種著色劑的最大可見吸收波長進行檢測，無色成分沒有吸收，就可以避免這個問題，同時提高靈敏度、簡化前處理過程。通過對5種合成著色劑的吸收波長進行掃描確定最大吸收波長：檸檬黃428nm、莧菜紅520nm、胭脂紅509nm、日落黃483nm、赤蘚紅528nm。根據各種著色劑的保留時間及最大吸收波長確定波長變化程序見表2。

（三）線性范圍及檢出限

在1.0～100.0mg/L的濃度范圍內響應值與合成著色劑的濃度成良好的線性關系。以Y表示濃度，X表示峰面積得到線性方程及相關系數見表3。

（四）加標回收率試驗

在樣品中分別加入10mg/L和20mg/L的著色劉混標，依本法測定，計算回收率，結果表明回收率良好。（見表4）

（五）精密度試驗

對同一加標樣品連續測定（n=6），測得RSD值分別為檸檬黃1.01%、莧菜紅1.31%、胭脂紅1.24%、日落黃1.12%、赤蘚紅2.05%。

三、結語

筆者提出的方法分離效果好、靈敏度高、干擾小、處理簡單，方法線性范圍寬，精密度準確度均取得滿意的效果，對葡萄酒的檢測很有實用價值，值得進一步推廣。

參考文獻：

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