免疫透射比濁法和免疫散射比濁法檢測特定蛋白的抗干擾能力比較

趙科

摘要：目的研究免疫透射比濁法和免疫散射比濁法檢測特定蛋白的抗干擾能力。方法將四中不同的干擾素游離膽紅素（FBil）、結合膽紅素（CBil）、血紅蛋白（Hb）、乳糜（CH）以不同濃度分別與特定蛋白血漿混合，采用免疫透射比濁法和免疫散射比濁法分別對所制備的混合標本進行監測，監測結果平均值與空白對照組相比較，計算出干擾率，對比兩種監測方法的抗干擾能力。結果在特定蛋白的檢測中四中干擾物對免疫透射比濁法均未出現任何干擾現象。，而免疫散射比濁法在檢測高濃度的IgM時分別在乳糜（CH）濃度為8000、12000、14000 FTU時干擾率為6.12%、6.55%、5.23%，在低濃度lgM分別在乳糜（CH）濃度為8000、12000、14000FTU干擾率分別為6.01%、5.44%、8.97%;高濃度的IgM在Hb濃度為9.9、29.6umol/L干擾率分別為5.11%、5.12%;檢測低濃度Hb濃度為9.9、29.6umol/L時干擾率分別為7.58%、6.10%，則表示以上濃度時均出現干擾現象結論在檢測特定蛋白的檢驗過程中，免疫透射比濁法對游離膽紅素（FBil）、結合膽紅素（CBil）、血紅蛋白（Hb）、乳糜（CH）四中干擾素的抗干擾能力明顯優于免疫散射比濁法。

關鍵詞：免疫透射比濁法免疫散射比濁法特定蛋白抗干擾能力

免疫比濁法是現如今醫學檢驗常用的檢測方法，其基本原理是抗原抗體動態測定方法，當抗原抗體在某些特殊稀釋系統中反應而且比例合適的作用下，形成微粒，使反應液出現一定渾濁度，若抗體濃度固定，形成的復合物的量隨著樣品中的抗原含量增加而增加，濁度也隨之增加，通過測反應液的濁度與一系列標準品對照即可計算出抗原含量。免疫比濁法主要包括免疫透射比濁法、免疫散射比濁法、免疫膠乳比濁法，不同的免疫比濁法在檢測結果、檢測方法、抗干擾能力方面具有一定的差異，在選擇是常常需結合所檢驗的樣本性質進行。本研究通過使用免疫透射比濁法和免疫散射比濁法對混入干擾素的人體特定蛋白的檢測，比較兩種在抗干擾能力方面的差異，進一步指導臨床檢驗工作中檢驗方法的選擇，其具體報告如下。

1.一般資料和方法

1.1實驗資料

采用隨機抽樣法采集我院門診及住院患者血清樣本，血清樣本必須滿足無溶血、渾濁、黃疸、脂血。特定蛋白檢測主要包括免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、c反應蛋白（cRP），3種特定蛋白各取高、低2個濃度，分別為IgG：8-12 g/L、>16 g/L;IgM：1.10-1.5 g/L、>2.0 g/L;CRP：4-10 mg/L、>100 mg/L。干擾物包括離膽紅素（FBil）、結合膽紅素（cBil）、血紅蛋白（Hb）、乳糜（CH），每種干擾物設置三個不同濃度，FBil：1927、2571、3210umol/L;CBil：2 058、2671、3398umol/L;Hb：9.9、19.8、29.6umol/L;CH：8000、12000、14000 FTU。

1.2方法

1.2.1樣本配置

將對血清與各個濃度的每一種干擾素分別進行混合，配置比例為1：7，配置成對照組，共12個小組，按此方法分別配置相同的兩份樣品;空白對照組選用蒸餾水作為空白干擾素，同樣按照1：7配比與血清樣本進行混合，作為空白對照組，按此方法分別配置相同的兩份樣品。

1.2.2檢測方法

將配置好的實驗組和空白對照組樣品均采用免疫透射比濁法和免疫散射比濁法分別進行檢測，所有操作均按照相應檢驗方法嚴格進行。

1.2.3檢測儀器和試劑

免疫透射比濁法選用ROCHE Modular P全自動生化分;免疫散射比濁法選用SIEMENSBN ProSpec特定蛋白測定儀。三種特定蛋白的檢測試劑均由多使用儀器提供的配套試劑盒。

1.3觀察及評價指標

實驗組樣本反復才檢測3次，空白對照組反復測定3次，檢測結果均取多次檢測的平均值，將實驗組檢測平均值與相應的空白對照組檢測平均值相比較，若差異大于或小于空白對照組的5%均認為存在干擾，按美國臨床實驗室標準化協會（CLSI）EP7-A文件評價2種方法的抗干擾能力。統計不同濃度出現的干擾例數，進行比較。

1.4統計學處理

本研究采用SPSS18.0軟件包對所得的數據進行統計學分析，計量資料采用表示，組問比較采用t檢驗，計數資料采用率表示，x 2檢驗，檢驗標準a=0.05，P

2.結果

經過兩種不同檢測方法的測定，免疫透射比濁法在檢測高低濃度特定蛋白對四中干擾物均不敏感，未出現任何干擾現象。，而免疫散射比濁法在檢測高濃度的IgM時分別在乳糜（CH）濃度為8000、12000、14000 FTU時干擾率為6.12%、6.55%、5.23%，在低濃度IgM分別在乳糜（CH）濃度為8000、12000、14000 FTU干擾率6.01%、5.44%、8.97%;高濃度的IgM在Hb濃度為9.9、29.6umol/L干擾率為5.11%、5.12%;檢測低濃度Hb濃度為9.9、29.6umol/L時干擾率為7.58%、6.10%，則表示以上均出現干擾現象，其余未列出的平均值與空白對照比較干擾率均<5%兩組將干擾能力差異存在顯著統計學意義（P<0.05）見表1。

3討論

免疫透射比濁法所采用的檢測儀器為全自動生化分析儀，應用雙波長檢測，利用比濁計測定光密度值，復合物的含量與光密度值成正比，同樣當抗體量一定時，光密度值也與抗原含量成正比，與單向瓊脂擴散試驗和火箭電泳等一般免疫化學定量方法比較具有敏感、快速簡便，結果準確等優點。而免疫散射法是利用一定波長的光沿水平軸照射，通過溶液使遇到抗原抗體復合物粒子，光線被粒子顆粒折射，發生偏轉，光線偏轉的角度與發射光的波長和抗原抗體復合物顆粒大小和多少密切相關，其對某些如乳糜、嚴重溶血是的血紅蛋白等大顆粒物質的干擾較為敏感，導致檢測結果與正常結果又較大的偏差，該法還可能受到多種物理因子的影響，如加入抗原或抗體的時間、光源的強弱和波長、測量角度等。

本研究結果顯示，免疫透射比濁法在測定混入不同種類、不同濃度的干擾物的血清樣本時，結果與空白組對照差異并不大，干擾率均小于5%，而免疫散射比濁法在測定上述樣本時在乳糜和血紅蛋白的兩種不同濃度中出現了偏差，檢測高濃度的IgM時分別在乳糜（CH）濃度為8000、12000、14000 FTU時干擾率為6.12%、6.55%、5.23%，在低濃度IgM分別在乳糜（CH）濃度為8000、12000、14000 FTU干擾率6.01%、5.44%、8.97%;高濃度的IgM在Hb濃度為9.9、29.6umol/L干擾率為5.11%、5.12%;檢測低濃度Hb濃度為9.9、29.6umol/L時干擾率為7.58%、6.10%。不難看出，干擾素對免疫散射比濁法的干擾程度遠遠大于對免疫透射比濁法的干擾。

在臨床檢驗工作中，樣本的檢測常常受到多種因子的干擾而導致結果的誤差，甚至出現醫療誤診、誤判，科學而高效的檢驗方法是臨床診療工作的得力助手，而作為常用的檢驗方法，免疫透射比濁法對的抗干擾能力明顯優于免疫散射比濁法，值得臨床推廣。