雞滑液囊支原體分離鑒定及臨床治療

摘要：研究主要結合一個養殖場的實際發病情況，分析了雞滑液囊支原體的形態培養特征、生化鑒定、生長抑制試驗，并對分離得到的滑液囊支原體進行了藥敏試驗，根據藥敏試驗，選擇高敏抗生素進行臨床治療，取得了很好的治療效果。通過本次研究表明，發病養殖場確診為滑液囊支原體感染，分離得到的致病原對泰樂菌素、恩諾沙星藥物敏感，通過選擇敏感藥物進行對癥治療，起到很好治療效果。

關鍵詞：雞滑液囊支原體;分離鑒定;臨床治療

中圖分類號：S858.31 文獻標識碼：B doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.19.007

0 引言

雞滑液囊支原體是危害雞健康生長的常見致病原，該種致病原不具備細胞壁，是一種單細胞核的微生物，外觀呈球形或卵圓形，任何年齡和品種的雞均可以感染該種致病原，其中對3～16周齡的雞造成的危害最嚴重，呈現急性感染，隨著雞日齡的升高，逐步呈現慢性持續性感染，會嚴重影響到雞的正常生長和正常生產。臨床上該種疾病主要表現為關節腫脹、滑葉囊炎，病理學變化可以發現患病黏膜表面會附著大量粘液和滲出物，滲出顏色呈灰白色。近年，很多地區的雞養殖規模不斷擴大，使該種疾病的發病率呈現逐步提升的趨勢，造成的損失日趨嚴重，因此要加強防控。

1 材料與方法

1.1 養殖場發病情況

2018年2-5月，某養殖場出現疑似發病情況，結合具體臨床表現獸醫初步判定為雞滑液囊支原體病。整個養殖場發病率相對較高，患病及主要表現為精神狀態較差，采食欲望不高，大多數患病雞出現關節發炎癥狀不能正常行走，臥地不起，它表現為跗關節、趾關節腫大，解剖發現病死雞滑液囊膜上附著大量黃白色的粘稠樣干酪物質。病死雞的氣管中也存在大量黃色粘液性或白色干酪樣滲出物，氣囊囊膜顯著增厚，肝臟、腎臟、脾臟等器官表現為充血腫大和典型的器官病變，初步判定為是雞滑液囊支原體。

1.2 儀器設備

致病原分離選擇的儀器設備主要包括超凈工作臺、-p溫振蕩培養箱、二氧化碳培養箱、支原體液體培養基、固體培養基、葡萄糖、精氨酸、尿素、四氮唑生化培養管，雞滑液囊支原體標準陽性血清濾紙片、恩諾沙星、泰樂菌素、太妙菌素、氟苯尼考、土霉素、林可霉素、卡那霉素。

1.3 方法

第一，病料采集。在無菌條件下收集病死及關節腔中的內容物，采集到的內容物放置到消毒過的試管中，密封后帶回實驗室進行細菌分離鑒定;第二，致病原分離培養。將采集到的病料先接種到支原體液體培養基上，放置在37℃溫度條件下持續培養，直到液體培養基的顏色變成橘黃色為止。將培養物收集起來進行過濾，再次接種到液體培養基上進行代代培養，收集第2代菌液進行病原菌鑒定。將分離得到的菌液制成涂片選擇使用姬姆薩充分染色觀察致病原形態。選擇上述得到的菌液0.1mL，接種到2種液體培養基上，一種含有輔酶a，一種不含輔酶a，相同的培養條件下，持續培養一段時間后，觀察培養基的變化。再將液體培養機中的內容物分別轉移到含有和不含有輔酶a的固體培養基上，5%的二氧化碳濃度下持續培養3～5d，觀察致病菌菌落形態，后將致病菌菌落放置在低倍顯微鏡下觀察。選擇使用葡萄糖、精氨酸、尿素、四氮唑生化培養管，將分離得到的致病原接種到上述幾種生化培養管中，溫度控制為37℃，持續培養一段時間后，觀察致病菌的生化特性;第三，紅細胞吸附試驗。取少量添加輔酶a的培養基液體，制作成涂片后，充分固定，然后滴加1%的雞紅細胞懸濁液，37℃作用30min后，選擇PBS緩沖稀釋液對涂片進行充分沖洗，連續沖洗3次，然后放置在顯微鏡下觀察紅細胞形態;第四，致病原堅定。將添加有輔酶a的液體培養基中的培養液轉移到含有青霉素和醋酸鉈的支原體液體培養基上，傳代培養10次，將培養液體轉移到支原體固體培養基，持續培養一段時間后觀察培養基菌落形態;第五，血清學分析。將分離得到致病菌菌，均勻的涂布在固體培養基上，然后選擇使用雞滑液囊支原體標準陽性血清濾紙片放置在培養基上[1]，37℃培養一段時間后，觀察到抑菌圈大小如果直徑在2mm以上，表示致病原抑制生長陽性反應;最后，藥敏試驗。選擇使用常規紙片法進行藥敏試驗，明確高敏抗生素和低敏抗生素。

2 結果

2.1 病原鑒定結果

第一，致病菌形態。致病原涂片染色鏡檢，可以發現姬姆薩能將致病原染成藍色，外觀成球形或圓形。分離得到的致病菌接種到含有輔酶a的液體支原體培養基24～48h后，培養液變渾濁，顏色變成橘紅色。而不含有輔酶a的液體支原體培養極少，致病原不能很好生產，培養基形態沒有發生變化[2]。第二，將分離得到的致病原接種到含有輔酶a的固體培養基上，接種3d后，在低倍顯微鏡下能看到煎蛋狀的菌落。在不含有輔酶a的固體支原體培養基上不生長致病原;第三，生化和凝集試驗。生化試驗結果顯示該種致病菌能發酵葡萄糖產酸不產氣，能還原四氮唑，不分解靜氨酸尿素。分離得到的致病菌能凝集1%的雞紅細胞;第四，菌體形態。連續傳代培養10次后，菌體形態沒有發生變化，分離結果表明均體為L型陰性;第五，生長抑制試驗。本次選擇的標準陽性血清，在致病菌菌落周圍能形成大于2mm的抑菌圈，由此可以表明，陽性血清能抑制分離得到的致病菌生長。

2.2 臨床治療

結合藥敏試驗，選擇高敏抗生素進行對癥治療。本次研究結果表明，恩諾沙星、泰樂菌素、林可霉素對分離得到的致病菌較敏感，可以選擇上述3種藥物交替使用。在雞群的飲用水中添加98%的酒石酸泰樂菌素粉劑，每升水添加0.25g，連續使用1周。同時對臨床癥狀較嚴重的患病雞肌肉注射20%的恩諾沙星注射液，使用劑量為0.1mL/kg體重，1次/d，連續使用5d為1個療程。綜合采用上述手段治療，1周后養殖場的發病情況得到有效改善，治愈率高達98%[3]。養殖場的病情控制后，按照隨機原則采集患病雞的新鮮血液，進行血清凝集試驗，檢測出隱性帶菌雞后立即淘汰處理，逐步凈化雞群，直到連續3次檢測不出帶菌雞表示凈化完全。

3 討論與結論

在進行病情診斷中，一定要明確具體的臨床表現和病理變化，然后根據具體的臟器病變情況對病情做出初步判斷。有條件的地區，針對上述疾病，應該立即采集病料，進行嚴格的實驗室診斷。在病料采集中，應該采集典型的病變臟器組織，通過病原學分離、菌體形態培養、生化鑒定、紅細胞凝集和生長抑制試驗，證明是雞滑液囊支原體感染。該種疾病傳播流行具有一定的季節性，在每年1-4月發病率最高，發病雞群主要集中在60日齡左右，通常呈急性感染，慢性感染或持續性感染。目前雞滑液囊支原體治療主要采用抗菌藥物治療為主，一旦出現發病情況，應該立即采用抗菌藥物進行治療。但由于雞滑液囊支原體很容易產生耐藥性，在藥物防治中，如果沒有提前做好藥敏試驗，選擇的藥物針對性不強，使致病原的耐用性逐步增加，錯過最佳治療時期，導致治療效果變差，治療周期變長。因此在藥物治療前，應在分離致病原的基礎上，進行嚴格的藥敏試驗，選擇高敏抗生素進行對癥治療，這樣才能提高治療效果，降低發病率。

參考文獻

[1]王昆，宮曉煒，陳啟偉，等.禽滑液囊支原體診斷與防控技術研究進展[J].黑龍江畜牧獸醫，2018（9）：31-34，245.

[2]馬爽，郭莉莉，宋新宇，等.雞滑液囊支原體感染的流行病學調查與分析[J].中國家禽，2016，38（23）：68-71.

[3]劉軼秋，薛青紅，張媛，等.恩諾沙星及其他抗菌藥對雞滑液囊支原體的體外聯合抑菌試驗[J].中國家禽，2013，35（22）：13-16.

作者簡介：陳興龍（1983-），男，山東平陰人，本科，助理獸醫師，研究方向：畜禽疾病預防與治療。