AutolumiS3000型微粒子化學發光分析儀檢測乙肝表面抗原的性能評價

邵淑麗 叢海燕 曲業敏 耿建利 孫勝波 王明義*

中國是乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染高發區， 該病毒感染的臨床血清學標志物是乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)。HBsAg濃度與感染水平和疾病嚴重程度大致相關，據調查，HBsAg在人群中的攜帶率已高達15%，在全球范圍內普遍流行，且HBV感染的流行率約為3.5%[1-2]。HBV感染常引起慢性肝炎的發生，最終可能發展為肝硬化和肝癌[3]。因此，實驗室準確和及時診斷HBV感染對其治療和預后有重要的臨床意義。

目前，HBsAg的檢測多采用化學發光分析法，而國內化學發光免疫檢測起步較晚，醫院多使用國外儀器及配套試劑，檢測成本高，患者經濟負擔重。基于此，本研究對AutolumiS3000型微粒子化學發光分析儀檢測HBsAg的性能進行評價。

1 材料與方法

1.1 標本來源

收集2019年1-3月威海市立醫院125例患者的125份血清檢測標本，對AutolumiS3000型微粒子化學發光分析儀定量檢測項目HBsAg的精密度、線性范圍、符合率以及攜帶污染率進行性能評價，以雅培i2000型全自動化學分析儀檢測HBsAg的結果為對照，評價AutolumiS3000型微粒子化學發光分析儀檢測HBsAg的性能。

1.2 儀器與試劑

AutolumiS3000型微粒子化學發光分析儀(威海威高生物有限公司)及HBsAg配套試劑及標準品(批號20190122)、質控品(批號20181105)均購自北京康徹斯坦生物公司。i2000型全自動化學分析儀(美國雅培)及HBsAg配套試劑(批號93097L100)、標準品(批號88550FN00)、質控品(批號81216A)均購自上海昆淶生物科技有限公司。

1.3 檢測方法

1.3.1 精密度

室內質量控制均為在控情況下進行HBsAg批內精密度及批間精密度評價。①批內精密度評估：分別收集低值、高值2個水平的血清，即水平1(C1)、水平2(C2)，將各水平血清充分混勻后每個水平重復測定20次，計算標準差(standard deviation，SD)、變異系數(coefficient of variation，CV)值；②批間精密度評估：對穩定分裝后的C1、C2樣本每日進行2個批次，每次重復5次，連續測試2 d；③判定標準：不精密度CV值小于或等于廠商給定的10%為符合要求。

1.3.2 線性檢測范圍

AutolumiS3000型微粒子化學發光分析儀的線性范圍為0～400 IU/ml。選擇一份HBsAg低濃度的患者血清標本和一份HBsAg高濃度的患者血清標本，低濃度血清標本接近檢測范圍下限，高濃度血清標本接近檢測范圍上限，患者低值血清(L)標本與患者高值血清(H)標本按比例關系配置成系列濃度血清(5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H)。對線性樣本在檢測系統上檢測，每個樣本重復測定3次，計算平均值。將實測值與預期值進行比較，以預期濃度值為橫軸，實際測得濃度值均值為縱軸做線性回歸圖，計算回歸方程：Y=ax+b與相關系數r。相關系數r2≥0.95為符合要求。

1.3.3 準確度

AutolumiS3000型微粒子化學發光分析儀與i200型分析儀0檢測儀器間的比對，以i2000型分析儀檢測結果為對照，在AutolumiS3000型檢測系統上對樣本進行檢測，每個樣本測試1次，評價兩者結果的一致性。

1.3.4 攜帶污染率

收集HBsAg新鮮高值患者血清(H)標本、低值患者血清(L)標本各1份，依次測高值3次(H1，H2，H3)、低值3次(L1，L2，L3)，攜帶污染率計算為公式1：

攜帶污染率＜1%為可接受。

1.4 統計學方法

數據使用Microsoft Excel進行處理，計算均值、SD、CV、回歸方程及相關系數等。

2 結果

2.1 精密度驗證

該項目低、高值樣本的批內精密度分別為6.16%和3.70%，批間精密度分別為6.86%和5.62%，符合臨床要求(見表1)。

表1 HBsAg批內和批間精密度結果

2.2 線性檢測范圍實驗

圖1 AutolumiS3000型分析儀檢測HBsAg的線性范圍回歸曲線

2.3 準確度

檢測125例患者的125份血清標本，以i2000型分析儀檢測結果為對照，AutolumiS3000型微粒子化學發光分析儀檢測的定性結果與i2000型分析儀的陽性值符合率為97%，陰性值符合率為100%，總符合率為98.4%，符合AutolumiS3000型微粒子化學發光分析儀的性能要求(見表3)。

表2 AutolumiS3000型分析儀HBsAg的線性范圍檢測結果

表3 兩種分析儀HBsAg檢測結果對比

2.4 攜帶污染率測定

將高值血清和低值血清按照H1、L1、H2、L2、H3及L3測定， 并計算攜帶污染率，結果為0.006%(見表4)。

表4 攜帶污染率測定結果

3 討論

乙型肝炎是慢性肝炎的主要病因，全球約有4億感染者面臨發展為肝硬化和肝癌的風險[4]。當HBsAg存在時個體可能具有傳染性，因此對HBsAg的敏感、準確檢測是HBV感染診斷和預防疾病傳播的關鍵。

隨著醫療技術的進步，目前檢測HBsAg的方法有多種，如酶聯免疫吸附分析(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)、金標法及化學發光法，后者檢測的靈敏度、特異度均較高，已成為醫院內的主流檢測方法[5]。為確保國產AutolumiS3000型微粒子化學發光分析儀檢測結果的準確可靠，本研究對其檢測HBsAg的性能進行驗證，并按廠商規定標準評價其性能是否能夠滿足臨床實驗室要求。

精密度是方法學評價的基礎，也是檢測系統的基本分析性能之一，因此對精密度的驗證必不可少[7-8]。本研究實驗結果表明，AutolumiS3000型微粒子化學發光分析儀對HBsAg的檢測精密度較好，其高值、低值樣本批內精密度(3.70%、6.16%)和批間精密度(5.62%、6.86%)，均低于儀器廠商規定標準10%，且在允許范圍之內，表明該儀器的檢測重復性較好，結果穩定可靠。在線性檢測范圍驗證中，AutolumiS3000型微粒子化學發光分析儀檢測HBsAg的線性相關系數為0.9975，＞0.95，線性評價相關性良好。在準確度實驗中，其與i2000型分析儀同時檢測125份標本時，兩者檢測結果總符合率為98.4%。但有研究發現，不同型號及廠商的免疫檢測儀器測定HBsAg結果符合率為94%，但本實驗符合率高，表明該儀器檢測結果準確性高，儀器性能較好，也有可能與操作人員、實驗環境和試劑存放時間等因素有關[6]。

在自動化檢測儀器檢測中，加樣針重復使用，雖經過多次清洗，但也可能存在交叉污染的可能性。本研究通過攜帶污染率實驗可評價檢測結果受到上一樣本的影響，且攜帶污染率為一個常數，不受前后兩樣本濃度差值大小的影響，能有效反映檢測系統攜帶污染的可能[9-10]。本研究實驗中的攜帶污染率為0.006%，表明該儀器的污染率低，前后兩樣本間的干擾小，可滿足實驗室檢測要求。

4 結語

AutolumiS3000型微粒子化學發光分析儀的成功研制可大幅降低實驗室檢測成本，并提高我國自主研發技術水平，對國內儀器自動化研究有重要意義。本研究通過對AutolumiS3000型微粒子化學發光分析儀檢測HBsAg的主要性能指標進行驗證及評價，證實該儀器的精密度、正確度高，線性范圍寬，測定結果穩定性好，故HBsAg的檢測可滿足臨床診斷和科研需要，有較好臨床應用前景。