丹參酮ⅡA 磺酸鈉對家兔心臟驟停復蘇后的影響

陳 芳， 楊 虹*， 成 靜， 高貽鈞， 盧 軍

（1. 武漢市第四醫院， 華中科技大學同濟醫學院附屬普愛醫院急診科， 湖北 武漢430034； 2. 華中農業大學， 湖北 武漢430000）

心臟驟停是世界范圍內人類主要死亡原因之一[1], 自從20 世紀60 年代以來, 心肺復蘇術逐步得到推廣和普及,患者經復蘇后自主循環恢復得到提高, 但存活率依然很低[2]。 心臟驟停后自主循環恢復主要的病理生理變化是缺血再灌注損傷, 造成全身炎癥反應及凝血功能障礙, 進一步形成多器官功能衰竭[3-5]。

丹參酮ⅡA磺酸鈉是由丹參酮ⅡA磺化而來的水溶性成分。 丹參酮ⅡA是丹參提取物中主要成分[6], 但其水溶性差, 而丹參酮ⅡA磺酸鈉因改變了其生物藥效, 被廣泛用于臨床治療冠心病, 具有廣泛的藥理作用, 如抗炎、 抗氧化應激、 抗細胞凋亡、 抑制心肌細胞肥大、 保護心臟內皮細胞等[7-12]。 也有被用于熱射病的研究, 并可在一定程度上減輕多器官損傷[13]。 因此, 本實驗探討丹參酮ⅡA磺酸鈉對家兔心臟驟停復蘇后的影響。

1 材料

1.1 動物 清潔級健康家兔24 只, 性別不限, 體質量3.0～3.5 kg, 購于湖北逸摯誠生物科技有限公司, 實驗動物使用許可證號SYXK （鄂） 2016-0088。 家兔置于溫度（25±1）℃、 相對濕度（50±10）%, 白天黑夜各12 h 的清潔級環境中適應性喂養1 周, 自由進食飲水。

1.2 試藥 丹參酮ⅡA磺酸鈉注射液（上海第一生化藥業有限公司, 批號1704316）。 腫瘤壞死因子-α （TNF-α） （批號DY5670）、 白細胞介素-1β （IL-1β） （批號DY7464）、 白細胞介素-6 （IL-6） （批號DY7984） ELISA 檢測試劑盒（美國R＆D 公司）； 神經元特異性烯醇化酶（NSE） （批號ELK3039）、 S-100B 蛋白（S-100B）（批號ELK5087） ELISA檢測試劑盒（武漢科鹿生物科技有限責任公司）。

1.3 儀器 DXC-800 全自動生化分析儀（美國貝克曼庫爾特公司）； 致顫儀及動物胸外按壓設備（華中農業大學輔助研發, 動物胸外按壓設備申請專利號201820076129.4）；SAR-830A 小動物呼吸機（美國CWE 公司）； mindray Bene-HeartD3 除顫儀監護儀（深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司）； 一次性氣管插管導管及配套導絲（河南駝人醫療器械集團有限公司）。

2 方法

2.1 前期準備 家兔耳緣靜脈穿刺置入24G Y 型靜脈留置針, 置管成功后注射3%戊巴比妥（30 mg/kg） 麻醉, 必要時追加, 當家兔角膜反射與疼痛反射消失, 呼吸、 心率平穩時, 視為麻醉成功, 耳緣靜脈留置針用肝素鹽水進行封管, 用于給藥和生命體征維護。 然后, 將家兔固定進行胸腹部備皮, 并接上監護儀作常規Ⅱ導聯心電監測, 同時監測心率、 有創動脈血壓、 呼吸。

2.2 氣管插管 家兔取仰臥位固定于手術臺面, 頸部自然屈曲, 將粗細與氣管插管導管配套導絲置入2.5 號氣管插管導管后, 無菌石蠟油潤滑導管并彎曲, 使其前端彎曲度與兔頸部屈曲角度類似。 將氣管插管導管自家兔口角緩慢置入, 當其到達甲狀軟骨上方時側耳感受導管氣流, 在最明顯部位取吸氣相輕輕插入導管, 導管遠端到門齒的距離為11～12 cm。

2.3 有創動脈血壓監測 家兔耳中動脈穿刺置入24G Y 型靜脈留置針, 連接三通開關, 一端連接含有肝素（5 IU/mL） 抗凝的生理鹽水輸液器, 防止血液凝固； 另一端經換能器與心電監護儀相連, 監測血壓變化。

2.4 模型建立 將家兔置入2 個電極中, 1 個置入皮下（位于心搏最強點）, 另1 個置于食管內, 致顫儀持續交流電（10 V、 4 mA） 2 min 經食管致顫, 成功標準為①電刺激后動脈收縮壓逐漸下降至25 mmHg （1 mmHg= 0.133 kPa） 以下； ②血壓監測的動脈搏動波形消失； ③停止電刺激后心電監護示心電圖波形為室顫、 無脈性電活動。 無處理心室顫動5 min 后, 開始應用動物胸外按壓設備進行機械胸外按壓, 并同步機械通氣, 盡早給予雙向波經胸體外除顫。 機械通氣接小型動物呼吸機, 初始參數為頻率45 次/min, 潮氣量10 mL/kg； 復蘇方式按壓部位為胸骨體正中, 頻率200 次/min, 按壓深度胸廓前后徑的1/3, 按壓-放松比1 ∶1, 開始心肺復蘇時耳緣靜脈注射腎上腺素0.015 mg/kg, 必要時每間隔3 min 重復1 次, 除顫儀準備完全后若為室顫, 則予非同步雙相波（10 J） 除顫, 若不能轉復為自主心律則再繼續按壓3 min 后再除顫（10 J）,直至自主循環恢復, 當恢復竇性心律, 平均動脈血壓大于40 mmHg 并至少持續1 min 以上時, 可視為復蘇成功； 經上述程序搶救15 min 自主循環仍未能恢復者為復蘇失敗,移除出所在組別。 然后, 對自主循環恢復的家兔進行心電、血流動力學監測, 自主呼吸微弱者進行機械通氣, 恢復后拔除所有導管, 放回籠中飼養； 對于不能自主飲水、 進食者, 在自主循環恢復后每12 h 經耳緣靜脈緩慢補充5%葡萄糖氯化鈉溶液（20 mL/kg）, 觀察終點為72 h。

2.5 分組 將24 只家兔隨機分為以下2 組： ①心臟驟停復蘇組（12 只）, 家兔麻醉后進行氣管插管、 心電監護、有創血壓監測, 并作致顫及心肺復蘇建模, 成功后觀察至72 h； ②丹參酮ⅡA磺酸鈉組（12 只）, 家兔麻醉后進行氣管插管、 心電監護、 有創血壓監測, 并作致顫及心肺復蘇建模, 成功后立即耳緣靜脈注射丹參酮ⅡA磺酸鈉（40 mg/kg）, 觀察至72 h。

2.6 指標檢測 于心臟驟停前及自主循環恢復后12、 24、72 h 采血, ELISA 法檢測血清TNF-α、 IL-6、 IL-1β、 NSE、S-100B 水平, 全自動生化分析儀檢測血清Cr、 BUN、 ALT、AST、 CK-MB、 cTnI 水平。

2.7 統計學分析 通過SPSS 20.0 進行處理, 數據以s） 表示, 組間比較采用重復測量設計的方差分析。 P ＜0.05 差異有統計學意義。

3 結果

3.1 丹參酮ⅡA磺酸鈉對TNF-α、 IL-1β、 IL-6 水平的影響 表1 顯示, 心臟驟停復蘇組自主循環恢復后12、 24、72 h IL-6、 TNF-α、 IL-1β 水平顯著高于心臟驟停前（P＜0.05）； 丹參酮ⅡA磺酸鈉組同一時間點三者水平顯著低于心臟驟停復蘇組（P＜0.05）。

表1 丹參酮ⅡA 磺酸鈉對TNF-α、 IL-1β、 IL-6 水平的影響， n=12）

表1 丹參酮ⅡA 磺酸鈉對TNF-α、 IL-1β、 IL-6 水平的影響， n=12）

注：與心臟驟停前比較,*P＜0.05；與心臟驟停復蘇組同時間點比較,＃P＜0.05

images/BZ_216_236_1938_2244_1987.png心臟驟停復蘇組 心臟驟停前 19.81±4.36 22.81±3.54 58.26±5.12自主循環恢復后12 h 81.67±4.19* 105.76±6.10* 256.16±8.78*自主循環恢復后24 h 145.11±5.96* 164.26±6.11* 317.51±10.72*自主循環恢復后72 h 110.53±4.29* 108.77±2.31* 272.13±7.23*丹參酮ⅡA 磺酸鈉組 心臟驟停前 18.70±1.74 25.11±2.92 54.26±6.14自主循環恢復后12 h 62.01±4.89＃ 81.40±6.79＃ 206.19±8.77＃自主循環恢復后24 h 105.91±7.92＃ 120.68±8.78＃ 269.63±8.77＃自主循環恢復后72 h 80.79±6.37＃ 75.17±7.81＃ 241.30±8.27＃

3.2 丹參酮ⅡA磺酸鈉對NSE、 S-100B 水平的影響 圖1可見, 心臟驟停復蘇組中自主循環恢復后12、 24、 72 h 血清NSE、 S-100B 的水平顯著高于心臟驟停前（P＜0.05）。丹參酮ⅡA磺酸鈉組自主循環恢復后12、 24、 72 h 上述腦損傷指標水平均比心臟驟停復蘇組同時間點的腦損傷指標水平明顯降低（P＜0.05）。

3.3 丹參酮ⅡA磺酸鈉對Cr、 BUN、 ALT、 AST、 CK-MB、cTnI 水平的影響 表2 顯示, 心臟驟停復蘇組自主循環恢復后12、 24、 72 h Cr、 BUN、 ALT、 AST、 cTnI 水平顯著高于心臟驟停前（P＜0.05）, 12、 24 h CK-MB 水平顯著降低（P＜0.05）, 72 h CK-MB 水平無明顯變化（P＞0.05）； 丹參酮ⅡA磺酸鈉組自主循環恢復后12、 24、 72 h Cr、 BUN、ALT、 AST 水平均顯著低于心臟驟停復蘇組（P＜0.05）,12、 24 h CK-MB、 cTnI 水平顯著降低（P＜0.05）, 72 h CKMB、 cTnI 水平無明顯變化（P＞0.05）。

4 討論

心臟驟停復蘇后, 機體經歷著一系列改變, 全身炎癥反應參與著多器官衰竭的發生。 其中TNF-α 是炎癥啟動因子, 其持續釋放會導致其他炎癥因子產生, 如IL-6、 IL-1β、 IL-8 等, 從而形成瀑布效益, 最終導致多器官功能衰竭[14]。 本實驗發現, 家兔心臟驟停復蘇后, TNF-α、 IL-6、IL-1β 水平明顯升高, 并與時間呈正比, 復蘇后24 h 達高峰, 與前期報道[15]一致； 丹參酮ⅡA磺酸鈉干預后, 同時間點上述炎癥因子水平明顯降低, 表明該成分能減輕心臟驟停復蘇后的炎癥反應。

圖1 丹參酮ⅡA 磺酸鈉對NSE、 S-100B 水平的影響

表2 丹參酮ⅡA 磺酸鈉對Cr、 BUN、 ALT、 AST、 CK-MB、 cTnI 水平的影響±s， n=12）

表2 丹參酮ⅡA 磺酸鈉對Cr、 BUN、 ALT、 AST、 CK-MB、 cTnI 水平的影響±s， n=12）

注：與心臟驟停前比較,*P＜0.05；與心臟驟停復蘇組同時間點比較,＃P＜0.05

組別 時間 Cr/（μmol·L-1）BUN/（μmol·L-1）ALT/（U·L-1）AST/（U·L-1）CK-MB/（U·L-1）cTnI/（μg·L-1）心臟驟停復蘇組 心臟驟停前 51.50±4.62 6.84±1.82 44.21±3.23 36.94±2.16 488.26±37.67 4.95±0.89自主循環恢復后12 h 108.18±6.16* 13.73±1.82* 66.24±4.24* 54.57±2.32* 739.53±208.80* 26.14±2.99*自主循環恢復后24 h 136.63±4.71* 20.59±1.78* 91.44±4.17* 72.71±2.14* 2380.90±420.87* 41.85±4.29*自主循環恢復后72 h 154.04±5.81* 27.45±3.03* 183.74±4.69* 150.02±4.12* 518.98±54.61 16.93±2.23*丹參酮ⅡA 磺酸鈉組 心臟驟停前 54.74±5.15 6.67±1.80 45.48±3.40 38.11±2.14 491.48±53.95 4.23±0.70自主循環恢復后12 h 83.65±2.79＃ 8.47±1.41＃ 55.20±2.55＃ 44.86±3.22＃ 569.83±52.38＃ 15.00±1.67＃自主循環恢復后24 h 115.79±3.16＃ 15.05±1.11＃ 71.16±3.74＃ 57.86±3.36＃ 1571.07±110.99＃ 32.25±3.15＃自主循環恢復后72 h 135.48±3.35＃ 21.18±0.86＃ 155.36±5.75＃ 122.03±3.54＃ 506.10±59.05 11.23±0.90

腦組織有代謝高、 氧耗量大、 低儲備、 對缺氧耐受性差的特性, 在心臟驟停后短時間內便可發生其不可逆的損傷[16]。 NSE、 S-100B 既是多種疾病腦損傷的指標, 也是心臟驟停結局的預測因子, 有研究認為心臟驟停后后者更能準確評估腦損傷嚴重程度[17-18]。 本實驗發現, 心臟驟停復蘇組血清NSE、 S-100B 水平明顯增高, 分別于復蘇后24、12 h 達高峰； 丹參酮ⅡA磺酸鈉組各時間點兩者水平明顯低于心臟驟停復蘇組, 表明該成分能改善心臟驟停復蘇后家兔腦損傷。

王金高等[19]報道, 家兔經心臟驟停復蘇后, 血清Cr、ALT 水平隨復蘇后時間推移逐步升高, 在72 h 達到高峰,與本實驗一致, 但認為可能在72 h 之后才出現頂峰值, 只是時間有限并不能觀察到。 葛均波等[20]主編的《內科學》中提到, 人類CK-MB 水平于心肌發生損傷后4 h 內增高,16～24 h 達高峰, 3 ～4 d 恢復正常； cTnI 于心肌發生損傷后3～4 h 后升高, 11～24 h 達高峰, 7～10 d 恢復正常； 本實驗發現, 家兔心臟驟停復蘇后血清CK-MB 水平于24 h達到高峰, 72 h 與心臟驟停前相當, 而cTnI 水平也于24 h達到高峰, 但72 h 仍未恢復正常, 兩者變化趨勢與人體無異。

另外, 丹參酮ⅡA磺酸鈉組血清Cr、 BUN、 ALT、 AST水平在復蘇后12、 24、 72 h 明顯低于心臟驟停復蘇組, 而血清CK-MB、 cTnI 水平在復蘇后12、 24 h 亦然, 推測該成分能改善心臟驟停復蘇后家兔多器官（心、 肝、 腎） 損傷。 但本實驗僅抽取血液指標來評估丹參酮ⅡA磺酸鈉對心臟驟停復蘇后家兔的影響, 其行為功能、 器官組織形態是否有所改善尚不明確, 仍需進一步研究。