包埋模具溫度對超小活檢組織包埋質(zhì)量的影響

羅添友，唐 進(jìn)，李明峰，張 剛

四川大學(xué)華西醫(yī)院 病理科(成都 610041)

包埋是指將組織放于受熱熔化的載體中，通過載體冷卻固化后支撐組織的過程[1]，是組織制片中重要的環(huán)節(jié)之一。臨床上常用的包埋方法為石蠟包埋法[2]，而超小活檢組織是石蠟包埋中的難點(diǎn)[3-4]。隨著胃腸鏡，纖維支氣管鏡及穿刺組織檢查技術(shù)的日益成熟，超小組織活檢成為門診患者的主要病理檢查項(xiàng)目之一，但因其送檢組織具有體積微小，形態(tài)不規(guī)則，數(shù)量少等因素，因此病理技術(shù)人員在包埋和切片過程中稍有不慎將會導(dǎo)致制片失敗，影響病理診斷。有報(bào)道[5]顯示，包埋模具的溫度可影響組織的包埋質(zhì)量，常溫包埋模具注入石蠟后，僅底部石蠟為熔化狀態(tài)，表面及四周溫度迅速下降，很快形成半凝固狀態(tài)，不利于組織的包埋，影響切片質(zhì)量。因此，本研究擬評價包埋模具的溫度對超小活檢組織包埋質(zhì)量的影響，為臨床病理技術(shù)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料來源及分組

收集2019年1-3月在四川大學(xué)華西醫(yī)院胃腸鏡、纖維支氣管鏡下活檢及超聲科粗針穿刺的超小標(biāo)本120例為研究對象，標(biāo)本包括甲狀腺、乳腺、肺、胃、肝、腎臟、前列腺等組織。依照隨機(jī)數(shù)字表法分為兩組，模具加熱組(H組)和模具常溫組(C組)，每組60例。

1.2 儀器

LEICA Histocore Arcdaia C組織包埋機(jī)，工作前兩組蠟缸溫度設(shè)置為70 ℃，冷臺溫度設(shè)置為-10 ℃，電熱鑷設(shè)置為70 ℃。

1.3 包埋方法

所有標(biāo)本經(jīng)過固定、脫水、透明、浸蠟處理后待用。H組：1)每例取1個加熱至70 ℃的包埋模具，將熱包埋模具放置包埋機(jī)蠟嘴下方熱臺(溫度為70 ℃)，開始注蠟，第1次注蠟少許，一般超過包埋模底部即可；2)將組織用電熱鑷迅速從包埋盒取出，放入包埋模具底部中央、輕壓、粘穩(wěn)；3)選擇組織的包埋方向，迅速將包埋模具移動到小冷凍臺，使之底部快速凝固；4)包埋模底部凝固后，將包埋盒底盒放在該包埋模具上，沿包埋盒的四周進(jìn)行二次注蠟，蠟量適中，不要超過包埋盒邊緣；5)將注好蠟的包埋模具置于凍臺充分冷卻，再進(jìn)行常規(guī)切片，然后行HE染色與網(wǎng)狀纖維染色。C 組每例取一個常溫包埋模具，其操作方法同H 組。

1.4 觀察指標(biāo)

比較兩組包埋時間、包埋合格率、HE染色后組織結(jié)構(gòu)完整性、細(xì)胞顯示效果、網(wǎng)狀纖維染色效果及切片等級。包埋合格率依肉眼下組織切面是否完整判斷，單張切片滿分計(jì)10分，組織稍不完整扣1～3 分，不完整扣4～10 分，包埋合格率=切片滿分例數(shù)占總切片例數(shù)的百分比。HE染色后組織結(jié)構(gòu)完整計(jì)10分，細(xì)胞顯示效果包括細(xì)胞透明度及核質(zhì)對比清晰度各計(jì)10 分，網(wǎng)狀纖維染色效果包括背景清潔度、纖維完整性、網(wǎng)狀纖維與膠原纖維對比度各計(jì)10 分，每項(xiàng)指標(biāo)因質(zhì)量缺陷扣減相應(yīng)分值，以上指標(biāo)由兩名主治醫(yī)師進(jìn)行雙盲評片，每項(xiàng)指標(biāo)的分?jǐn)?shù)取其均值。切片等級分為甲級片：≥90 分；乙級片：75～89 分；丙級片：60～74 分；丁級片：≤59 分[6]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組包埋時間及合格率比較

與C組比較，H組包埋時間延長，包埋合格率增加(P<0.01)(表1)。

表1 兩組包埋時間及合格率的比較

2.2 兩組包埋切片后肉眼及鏡下比較

C組包埋后切片存在切面不全現(xiàn)象，未展示最大組織面，染色組織較松散；H組所有切片厚薄適當(dāng)，切面完整，染色后對比分明(圖1)。

圖1 兩組胃竇近賁門處活檢組織包埋切片后肉眼及鏡下比較

注：A、C示胃竇近賁門處活檢組織。A：經(jīng)加熱模具包埋切片后厚薄適當(dāng)，切面完整；C：鏡下見少許胃黏膜組織，腺體減少，間質(zhì)中見中等量淋巴細(xì)胞浸潤，灶性區(qū)見淋巴濾泡形成，可見多灶出血；B、D示胃竇近賁門處活檢組織；B：經(jīng)常溫模具包埋切片后切面不全，未展示最大組織面；D：鏡下見少許胃黏膜組織，腺體減少，間質(zhì)中見中等量淋巴細(xì)胞浸潤，可見多灶出血

2.3 兩組包埋后制片評分比較

經(jīng)HE染色后，與C組比較，H組織結(jié)構(gòu)完整性、細(xì)胞顯示效果(細(xì)胞透明度和核質(zhì)對比度)、網(wǎng)狀纖維染色效果(背景清潔度、纖維完整性、網(wǎng)狀纖維與膠原纖維對比度)等項(xiàng)目評分增加(P<0.01)(表2)。

表2 兩組包埋后制片評分的比較(分，

2.4 兩組切片等級比較

H組切片等級高于C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表3)。

表3 兩組切片等級的比較(n=60)

3 討論

隨著胃腸鏡，纖維支氣管鏡及超聲引導(dǎo)下粗針穿刺技術(shù)的日益發(fā)展和成熟，因其操作簡便、損傷小、安全性大，確診率高，其在臨床中的應(yīng)用也越來越廣泛[7-9]。超小組織活檢是門診患者的主要病理檢查項(xiàng)目之一[10-12]，如聲帶腫物，因其組織體積較小，數(shù)量少，工作人員在包埋、切片過程中稍有不慎將會導(dǎo)致取材失誤，包埋結(jié)果不理想，未包埋最大面，切片不全，導(dǎo)致制片失敗，甚至發(fā)生組織遺失的嚴(yán)重情況，最終影響病理診斷，存在很大的醫(yī)療風(fēng)險；所以在組織標(biāo)本制作的環(huán)節(jié)中，不但要求病理技術(shù)人員要有高度的責(zé)任心，還需要有正確規(guī)范的操作流程，而包埋技術(shù)是病理組織制片過程中至關(guān)重要的環(huán)節(jié)之一，只有組織包埋合格后，才能為以后的切片、染色和診斷提供可靠的保證，為患者的后期治療贏得寶貴時間。

在病理技術(shù)中常用的包埋方法為石蠟包埋法，石蠟是由于碳?xì)滏I所構(gòu)成的正烷烴的混合物，沒有固定的熔點(diǎn)，一般為56～62 ℃[13]，因此在包埋過程中，石蠟受熱熔化后，將組織放置于熔化的石蠟液中，通過石蠟冷卻凝固后支撐組織，來實(shí)現(xiàn)包埋的過程，在此過程中，應(yīng)在石蠟?zāi)痰臅r間范圍內(nèi)將浸蠟的組織妥善放置于石蠟液的中央。常溫包埋模具只有底部受熱，其余部分為常溫，當(dāng)注入石蠟后，只有底部石蠟為熔化狀態(tài)，表面及四周溫度迅速下降，很快形成半凝固狀態(tài)，不利于組織的包埋[14]，特別是當(dāng)組織呈條索狀時，容易導(dǎo)致蠟塊切面中間凹陷，因組織不在一個切面上而喪失整條組織的完整性[15]。本研究中，將包埋模具加熱至70 ℃，與石蠟溫度一樣，第1次注蠟后，溫度下降速度減慢，保證了工作人員有足夠的時間將組織從包埋盒取出，并妥善放入包埋模具底部中央，并調(diào)整組織的包埋方向，再移至小冷凍臺，使底部快速凝固后完成二次注蠟。結(jié)果顯示，H組包埋模具加熱后，延長了包埋時間，提高了包埋的合格率，后期切片和HE染色后，H組組織結(jié)構(gòu)完整性、細(xì)胞透明度和核質(zhì)對比度以及背景清潔度、纖維完整性、網(wǎng)狀纖維與膠原纖維對比度評分增加，這與林倩等[5]研究結(jié)果相吻合。

綜上所述，熱包埋模具可提高超小活檢組織包埋的合格率，保證切片質(zhì)量，提高診斷準(zhǔn)確率。