反相高效液相色譜法測定鹽酸萘甲唑啉滴鼻液有關物質

司孝清，黃庭亮

反相高效液相色譜法測定鹽酸萘甲唑啉滴鼻液有關物質

司孝清，黃庭亮

（廣東恒健制藥有限公司，廣東 江門 529040）

針對鹽酸萘甲唑啉滴鼻液有關物質使用反相高效液相色譜法進行測定，色譜柱采用Angela Venusil XBP C8（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為辛烷磺酸鈉溶液，即在1 000 mL乙腈-冰醋酸-水（35∶0.5∶70）中加入1.1 g辛烷磺酸鈉，攪拌溶解；流速、柱溫以及檢驗波長分別設置為1.0 mL/min、40 ℃、280 nm。結果表明，該色譜條件下，萘甲唑啉峰與各雜質峰之間分離良好，各已知雜質峰面積與濃度呈良好線性關系，回收率良好。所用測定方法操作較為簡便快捷，且靈敏度與準確度相對較高，可用于產品質量控制。

鹽酸萘甲唑啉；反相高效液相色譜法；鼻粘膜；檢測器

鹽酸萘甲唑啉屬于咪唑啉類的擬交感神經藥，是廣泛用于眼和鼻黏膜的減充血劑，是一種有效的作用于結膜小動脈α腎上腺素能受體的血管收縮劑。當應用于黏膜時，萘甲唑啉引起血管收縮，從而達到迅速和延長減少腫脹和結膜充血的作用，廣泛用于成人過敏性及炎癥性鼻充血、急慢性鼻炎。中國藥典2015版（ChP2015）收載原料、滴眼液及滴鼻液，美國藥典40版（USP40）也有收載，歐洲藥典9.0版（EP9.0）收載原料。ChP2015萘甲唑啉滴鼻液無有關物質的檢測，使用反相液相色譜法對USP40和EP9.0原料中存在的有關物質實施檢查，因此本研究針對鹽酸萘甲唑啉滴鼻液相關物測定方法的建立，主要以USP40和EP9.0鹽酸萘甲唑啉有關物質的測定方法作為參考。

1 儀器與試藥

檢測儀器有SARTORIUS BT125D 型電子天平，LC-2030島津二極管陣列檢測器，LC-2030四元低壓泵，Angela Venusil XBP C8（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱。鹽酸萘甲唑啉對照品（50 mg/支）購自撫生實業有限公司，乙腈購自天津市科密歐化學試劑有限公司，冰醋酸（分析純，廣州化學試劑廠生產），辛烷磺酸鈉（離子對試劑，國藥集團化學試劑有限公司生產），萘甲唑啉雜質A與D購自上海甄準生物科技有限公司、雜質B生產廠家為深圳振強生物技術有限公司、雜質C生產廠家為蘇州愛瑪特生物科技有限公司，鹽酸萘甲唑啉滴鼻液生產廠家為廣東恒建制藥有限公司。

2 色譜條件

色譜柱：Angela Venusil XBP C8（250 mm×4.6 mm，5 μm）。

流動相：流動相為辛烷磺酸鈉溶液，即在1 000 mL乙腈-冰醋酸-水（35∶0.5∶70）中加入1.1 g辛烷磺酸鈉，攪拌溶解；流速、柱溫以及檢驗波長分別設置為1.0 mL/min、40 ℃、280 nm，進樣量為10 μL。

溶劑：流動相。雜質A峰與萘甲唑啉峰應當保持1.5以上的分離度。

3 方法與結果

3.1 溶液的制備

選擇鹽酸萘甲唑啉滴鼻液作為本次研究的供試品溶液。

3.2 已知雜質的分離

分別在雜質A、B、C、D對照品中以及鹽酸萘甲唑啉對照品進行適量稱取，在加入流動相后將雜志對照品與鹽酸萘甲唑啉對照品稀釋成每含有1 mg鹽酸萘甲唑啉，各雜質含量為5 μg/mL的混合溶液，進樣10 μL，記錄色譜圖。

結果顯示，各已知雜質峰之間以及各已知雜質峰與主峰之間均能達到基線分離，如圖1所示。

圖1 已知雜質分離色譜圖

3.3 專屬性試驗

在空白輔料以及供試品溶液各分別取10 μL進行進樣，并對所形成的色譜圖實施記錄。結果顯示，輔料無干擾。

3.4 破壞試驗

取鹽酸萘甲唑啉滴鼻液及空白輔料溶液，各5份，分別用于光照箱（照度大于等于5 000 Lux，近紫外能量大于等于90 uW/cm2）中光照5 d、質量分數為2%的氫氧化鈉溶液60 ℃水浴5 min、5 mol/L鹽酸溶液100 ℃水浴2 h、121 ℃高壓蒸汽加熱30 min、質量分數為3%的H2O2（100 ℃）水浴2 h進行破壞試驗。結果表明：萘甲唑啉對堿最不穩定，但各降解產物與萘甲唑啉主峰均有良好的分離，空白輔料無干擾。

3.5 線性和范圍

精密稱取雜質A、B、C、D對照品各適量，用流動相定量稀釋成每1 mL分別含雜質A、B、C、D（1 μg、2 μg、5 μg、10 μg、20 μg）的混合溶液，取上述溶液分別進樣10 μL，以進樣量（μg）為橫坐標，峰面積A為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程，結果如下：雜質A曲線方程為=15 741 282.2－28.0，=0.999 9（=5），表明雜質A進樣量在0.010 33～0.206 5 μg范圍內，與峰面積成良好線性關系；雜質B標準曲線方程為=1 704 244.6－2 102.5，=1.000 0（=5），表明雜質B進樣量在0.010 51～0.210 2 μg范圍內，與峰面積成良好線性關系；雜質C標準曲線方程為=1 685 876.2－1 238.9，=0.999 9（=5），表明雜質C進樣量在0.010 47～0.209 3 μg范圍內，與峰面積成良好線性關系；雜質D標準曲線方程為=1 716 326.4+535.0，=0.999 9（=5），表明雜質D進樣量在0.010 56～0.211 2 μg范圍內，與峰面積成良好線性關系；萘甲唑啉標準曲線方程為=1 596 106.6－114.3，=0.999 9（=5），表明萘甲唑啉進樣量范圍在0.010 41～0.208 3 μg，與峰面積能夠形成較為良好的線性關系。

3.6 檢測限

精密稱取適量的鹽酸萘甲唑啉對照品以及各雜質對照品，使用流動相進行逐級稀釋，直至達到約為3倍的信噪比，結果顯示，萘甲唑啉檢測限為0.14 ng，雜質A檢測限為0.12 ng，雜質B檢測限為0.22 ng，雜質C檢測限為0.52 ng，雜質D檢測限為0.15 ng。

3.7 回收率試驗

精密稱取雜質A、B、C、D對照品各適量，用鹽酸萘甲唑啉滴鼻液定量稀釋成每1 mL分別含雜質A、B、C、D（1 μg、5 μg、10 μg）的混合溶液，取上述溶液分別進樣10 μL，計算回收率。結果顯示，雜質A、B、C、D的平均回收率分別為98.0%（=9）、99.8%（=9）、100.6%（=9）、99.8%（=9），方法準確度較高。

4 討論

檢測波長時通過全波長掃描，萘甲唑啉、雜質A、雜質B、雜質C、雜質D均在220 nm和280 nm附近有最大，因220 nm波長檢測基線噪聲較大，影響雜質檢測，因此，選擇280 nm 為本品檢測波長。實驗中流動相比例的調整方面，主峰保留時間約為12 min出峰為宜。

R765.21

A

10.15913/j.cnki.kjycx.2019.15.055

2095－6835（2019）15－0135－02

〔編輯：張思楠〕