紅花青藤種子繁殖研究初報

黃平權1 馮世鑫2

1.廣西白云山盈康藥業有限公司，廣西 南寧 530022; 2.廣西壯族自治區藥用植物園，廣西 南寧 530023

紅花青藤 (IlligerarhodanthaHance. ) 是連葉桐科青藤屬植物，別名三葉青藤、三姐妹藤、毛青藤(圖1，a)。主產于廣西，廣東、云南、福建及臺灣等省[1-3]。藥用根、莖藤，味甘、辛，性溫。具有消腫止痛、活血通絡、祛風散瘀等作用[4]。用于治療跌打腫痛、風濕骨痛、類風濕、肩周炎、小兒麻痹后遺癥等。在廣西民間應用較為廣泛。現代藥理實驗表明，紅花青藤醇提物抗炎作用顯著，且毒性小[5]。是中成藥 “華佗風痛寶 ” 及其系列產品的主要原料藥[6]。一直以來，紅花青藤均依靠采集野生資源供給市場及臨床用藥，隨著研究的深入和開發力度的加大，各地的野生資源銳減，人工撫育或栽培迫在眉睫。經查閱，目前，紅花青藤的研究主要集中在藥理、藥化和臨床方面的研究，而在種子繁育和栽培等研究方面研究較少。為更好地開發和利用紅花青藤，探討種子萌發的最佳條件和方法，開展環境因子、條件和GA3對紅花青藤的種子萌發的影響的研究，現報導如下。

1 材料和方法

1.1 材料 供試種子采集于廣西南寧市郊區，經廣西藥用植物園副研究員彭玉德鑒定為紅花青藤(IlligerarhodanthaHance. )的種子(圖1，b)。種子取材除了不同成熟度對比試驗之外，其他試驗均選取果皮為黃棕色的種子作材料。

儀器LRH-400GSI(智能型)光照培養箱(由韶關市泰宏醫療器械有限公司生產)，BCD-212電冰箱(由博西華家用電器有限公司生產)，天平(型號YP202N，由上海精密科學儀器有限公司生產)，卡尺、發芽盒，培養基質材料為市售。自制的發芽基質配方，由河沙∶蛭石∶珍珠巖等于4∶2∶1 的比例配成。

1.2 方法

1.2.1 種子處理 4月至5月采收表皮呈黃棕色的果實，去除長翅，保留附著在種子上的果皮(圖1，c)。先用0.2%的高錳酸鉀液浸泡種子20 min后，再用蒸餾水沖洗4次。置于墊有5～6 cm厚的基質的發芽盒中，種子分散、平放，嵌入基質內，因略見上部果皮為宜，蓋上蓋子。每處理30粒種子，4個重復。

1.2.2 發芽試驗 按各處理的條件進行，考察其發芽率和發芽勢。種子的發芽率和發芽勢的統計和計算方法為：每24 h觀察1次，記錄當天種子發芽情況，并適當補充水分。以露白作為發芽的標志。從開始發芽的第7天統計發芽勢，20 d統計發芽率。計算公式如下：

發芽勢=(規定時間內發芽種子粒數÷供試種子粒數)×100%

發芽率=(發芽種子粒數÷供試種子粒數)×100%

1.2.3 數據處理 用SPSS.19.0和Excel進行數據統計處理。多重比較采用Duncan法：同列中不同的小寫字母表示在5%的水平下差異顯著。

1.2.4 成熟度對種子發芽的影響 按果皮顏色分為淺黃綠色、黃綠色、黃棕色和棕褐色4種，分別定為輕度成熟、中度成熟、成熟和老熟四個等級。在恒溫25 ℃條件下發芽。

1.2.5 溫度對紅花青藤種子萌發的影響 設置恒溫15 ℃、20 ℃、25 ℃、30 ℃、35 ℃和變溫23 ℃(16 h)-28 ℃(8 h)一共6個處理。種子隨采隨播，在光照強度1000 LX、光照時間8 h的培養箱內進行發芽。

1.2.6 光照強度對紅花青藤種子萌發的影響 種子隨采隨播，設置光照強度為1000 LX、2000 LX和3000 LX和0LX(無光照)共4種處理，光照時間為8 h，在25 ℃恒溫下發芽(無光照的處理是將種子置于黑暗的盒子中)。

1.2.7 紅花青藤種子失水對其萌發的影響 稱取剛采收的鮮種子的重量(風干前重)，置于室內攤晾，在自然條件下，存放5 d、10 d、15 d、20 d、25 d共5個處理，分別測定在規定存放時間的種子重量(風干后重)，計算種子失水率。分次及時將失水種子用清水浸泡4 h，在恒溫25 ℃條件下進行發芽培養。計算公式如下：

種子失水率(%)=(試樣風干前重-試樣風干后重)/試樣風干前重×100%

1.2.8 貯藏溫度和時間對種子發芽的影響 將種子分層放置于發芽盒中，每層用含水量23%～25%的細沙覆蓋，分別置于：0 ℃、5 ℃、10 ℃的環境(電冰箱)中，分別存放30 d、60 d、90 d后，取出。在恒溫25 ℃的環境中進行發芽培養。

1.2.9 GA3對老化的種子萌發的影響 取在室內常溫下存放10 d，已部分失水的老化種子，分別用濃度為40 mg/kg、80 mg/kg、120 mg/kg的GA3水溶液浸泡種子4 h后，取出，在恒溫25 ℃條件下進行發芽。

2 結果與分析

2.1 成熟度對紅花青藤種子發芽的影響 試驗表明：成熟度對紅花青藤種子發芽率的影響較大，以果莢為黃棕色的種子(成熟種子)發芽最高，發芽率達95.8%，顯著高于其他處理；其次為果莢黃帶綠色的種子(中度成熟種子)，發芽率達93.3%，也顯著高于老熟種子和輕度成熟種子的，最低的是輕度成熟種子。對于發芽勢也表現為成熟種子的最高，達到55.6%。顯著高于老熟種子和輕度成熟種子，但與中度成熟種子的差異不顯著。發芽勢高體現種子萌發集中，活力強。說明中度成熟的種子的活力已接近成熟種子。在各處理的種苗后續生長中，也表現出成熟度為成熟的種子所形成的植株生長旺盛，根系較為發達(圖2，a)，其次為中度成熟種子的植株(圖2,b)，第三為老熟種子的植株(圖2,c),生長最為弱小的為輕度成熟的植株(圖2,d)。因此，紅花青藤種子在果莢表皮呈黃帶綠色至黃棕色時采收為宜(表1)。

表1 紅花青藤種子成熟度不同對其發芽的影響

注：表中同列的數值采用Duncan法進行顯著性分析，差異顯著與否，用字母表示，按高至低排列。同列中不同的小寫字母表示在5%的水平下差異顯著，否則不顯著。即a顯著高于b，b顯著高于c……依此類推。a為最大值，b次之……依次排列。

2.2 溫度對種子萌發的影響 試驗表明：在恒溫的條件時，隨著溫度的升高紅花青藤種子的發芽率呈拋物線狀變化，在溫度25 ℃時達到最高，顯著高于同條件的其他溫度處理。在溫度25 ℃以下處理的發芽率和發芽勢均隨著溫度的升高而增大；而高于25 ℃的則隨著溫度的升高而減小。說明溫度過高或過低都對紅花青藤種子發芽均有影響。在23 ℃(16 h)～28 ℃(8 h)變溫的條件下，發芽率達到96.7%，高于恒溫25 ℃處理的，但兩者之間差異不顯著。從其發芽勢來看，則顯著高于恒溫25 ℃處理和其他處理。說明變溫處理更有利于紅花青藤的種子萌發(表2)，生產育苗時，溫度宜控制在23～28 ℃之間。

表2 不同的溫度條件對紅花青藤種子發芽的影響

注：表中同列的數值采用Duncan法進行顯著性分析，差異顯著與否，用字母表示，按大至小排列。同列中不同的小寫字母表示在5%的水平下差異顯著，否則不顯著。即a顯著高于b，b顯著高于c……依此類推。a為最大值，b次之……依次排列。

2.3 光照強度對紅花青藤種子萌發的影響 試驗中，強光照或無光(黑暗)均對種子萌發有影響，種子的發芽率和發芽勢均有隨著光照強度的增強呈拋物線形狀的變化，以1000 LX處理的最高，顯著高于其他處理。無光處理(黑暗)的發芽率比光照強度3000 LX處理的稍高，差異未達到顯著水平，但其發芽勢顯著高于光照強度3000 LX處理的。說明在一定范圍內的弱光照有利于紅花青藤種子萌發，以1000 LX為好(表3)。

表3 不同的光照條件下對紅花青藤種子發芽的影響

注：表中同列的數值采用Duncan法進行顯著性分析，差異顯著與否，用字母表示，按大至小排列。同列中不同的小寫字母表示在5%的水平下差異顯著，否則不顯著。即a顯著高于b，b顯著高于c……依此類推。a為最大值，b次之……依次排列。

2.4 紅花青藤種子失水對其萌發的影響 經試驗得知，種子的發芽率和發芽勢隨著種子失水率的增大而降低，與存放時間的密切相關。當種子失水率為0(鮮種子)時，其發芽率和發芽勢為最高，分別達到93.3%和58.3%，顯著高于其他處理。當種子失水率達43.1%時，其發芽率急劇下降，只有21.7%，已不能應用于生產。當種子失水率達到60.2%時(存放25 d)，發芽率僅為0.8%，即基本喪失活力。說明種子失水嚴重影響其發芽，且下降幅度大。也就是說，在自然條件下，紅花青藤種子壽命短(表4)。

表4 花青藤種子失水程度對其發芽的影響

注：表中同列的數值采用Duncan法進行顯著性分析，差異顯著與否，用字母表示，按大至小排列。同列中不同的小寫字母表示在5%的水平下差異顯著，否則不顯著。即a顯著高于b，b顯著高于c……依此類推。a為最大值，b次之……依次排列。

2.5 貯藏溫度和時間對種子發芽的影響 試驗結果表明，在保濕的條件下，低溫貯藏能保持紅花青藤種子有較高發芽率，發芽率的高低與貯藏的時間和溫度有關。在同一溫度條件下，種子的發芽率和發芽勢均隨著貯藏時間的延長而降低。說明種子不耐貯藏。在相同的貯藏時間條件時，種子發芽率和發芽勢則隨著貯藏溫度的降低呈拋物線狀變化，均以5 ℃的貯藏溫度的發芽率最高，顯著高于10 ℃和0 ℃的處理；使用5 ℃的溫度將種子貯藏90 d，其發芽率仍有80.0%，發芽勢也達到44.2%，還可應用于大田生產[7]。綜上所述，紅花青藤種子貯藏時，溫度控制在5 ℃為宜，貯藏時間不宜大于90 d。

2.6 GA3對老化的紅花青藤的種子萌發的影響 在自然條件下，紅花青藤種子失水后其發芽率明顯下降。種子老化，失去活力。用 GA3處理因失水老化的種子，能提高種子發芽率和發芽勢，隨著濃度增大而增加。試驗中，以濃度120 mg/kg處理的最高，其發芽率達82.5%，發芽勢50.8%，其次為濃度80 mg/kg處理的，兩者均顯著高于40 mg/kg及清水(對照)處理的。最低為對照處理。說明GA3對因失水老化的種子發芽有促進作用，濃度在80～120 mg/kg為好(表6)。

表5 不同的貯存方法對紅花青藤種子發芽的影響

注：表中同列的數值采用Duncan法進行顯著性分析，差異顯著與否，用字母表示，按高至低排列。同列中不同的小寫字母表示在5%的水平下差異顯著，否則不顯著。即a顯著高于b，b顯著高于c……依此類推。a為最大值，b次之……依次排列。

表6 GA3對老化的紅花青藤種子萌發的影響

注：表中同列的數值采用Duncan法進行顯著性分析，差異顯著與否，用字母表示，按大至小排列。同列中不同的小寫字母表示在5%的水平下差異顯著，否則不顯著。即a顯著高于b，b顯著高于c……依此類推。a為最大值，b次之……依次排列。

3 結論和討論

3.1 結論 紅花青藤種子在果莢黃色至黃棕色時，具有較強的發芽能力，種子無休眠性；在23 ℃～28 ℃的溫度、光照度1000 XL條件下，更有利于種子萌發，發芽率較高。種內水分含量對種子萌發影響較大，種子失水后發芽率明顯下降，種子老化較快，其下降的程度與失水率成正相關，反映出在自然條件下，種子壽命短。保濕低溫貯藏在一定時間內，能保持種子發芽能力，在5 ℃的溫度下，貯藏90 d仍有80%的發芽率；用GA3處理失水老化的種子，能在一定程度上提高種子發芽率。

3.2 討論 優質的種子是中藥材規范化生產的源頭[7]，種子的萌發至成苗除了受種子的生活力影響以外，還受溫度、濕度和氧氣[8]的影響。種子的活力與其成熟度密切相關，種子處于果實之中，有些植物當果實成熟時，種子也已成熟，生活力強、發芽率高[9-10]。有些植物果實雖已成熟、脫落，但此時的種子并沒有發芽能力，是其種胚未成熟之故[11-12]，即生理未成熟。從本試驗結果可看出，紅花青藤果莢黃色至黃棕色時，種子已具有較高的發芽能力，發芽率達到93.3%以上，說明此階段的種子已達到生理成熟，可以采收。

種子在萌發過程中在酶的作用下，進行著活躍的代謝反應，適宜的溫度能促進種子呼吸作用和酶活性有利于種子萌發[13]。多種植物的種子在最適宜發芽溫度范圍以外,容易喪失發芽能力，低溫抑制種子萌發，高溫則會引起種子變性[14-15]。不同植物種子對溫度的需求不同，側柏在有光的條件下最適宜的溫度為13.8～25.9℃，發芽率達到93.3%[16]；苦參種子萌發的適宜溫度為15 ℃[17]。本試驗中，紅花青藤種子在23 ℃～28 ℃變溫的條件下發芽較好，達到96.7%。說明變溫更有利于其萌發。

不同的種子萌發時對光照反應不一，有些種子如黃岑、萌發時對光照不敏感[18-19],有些種子則對光照為萌發的必要條件[16-20]，這是由植物的遺傳性和環境共同決定[21].光對種子萌發的影響主要是作為一種信號刺激活化種子，不是作為能量物質直接參與種子萌發[22]。趙素婷[23]研究表明，不同植物種子的萌發對光照有不同的需求。在本試驗中，紅花青藤種子在較弱光照(1000 LX)條件下，發芽率達到95.0%，其次為2000 LX處理的，也有93.0%，而在較強光照環境下(3000 LX)和無光(0 LX)發芽率都較低，說明在1000～2000 LX的光照環境下，適宜紅花青藤種子發芽，無光或3000 LX光照強度均不利于種子萌發。

種子的貯藏是生產中的重要技術環節，為種子在異地推廣、運輸旅途和避開不良氣候提供保障。在貯藏過程中，溫度、濕度和種子含水量影響種子生活力[24]，其中，種子的含水量尤為重要[25]。多數種子在干燥的狀態下，貯藏較長時間不會喪失活力，如當歸種子的含水量為2.85%時，常溫貯藏10個月仍有85%的發芽率[26]。而三七[27]、山豆根[28]、廬山茶樹[29]等種子的貯藏需要保持適當的水分和低溫，才能獲得較高的發芽率。本試驗中，紅花青藤種子在5 ℃、細沙保濕的條件下貯藏，取得較高的發芽率，在貯藏90 d后仍有80%的發芽率，為同期處理的最高值。說明此貯藏方法有利于紅花青藤種子活力保持。

紅花青藤種子失水，發芽率明顯下降，形成老化種子，壽命縮短。在自然條件下存放10 d，種子失水率達到27.6%，此時發芽率只有61.7%；當存放20 d，種子失水率約為52.4%，此時種子的發芽率只有11.7%，已不能應用于生產。外源激素能改變種子代謝物質的變化[30],用GA3水溶液處理失水老化的紅花青藤種子，能在一定程度上提高種子的發芽率；濃度以80～120 mg/kg較好。