貴州不同產地南沙參多糖含量的測定

貴州中醫藥大學藥學院, 貴州 貴陽 550025

南沙參為桔梗科植物輪葉沙參Adenophoratetraphylla或沙參A.stricta的干燥根，具有養陰清肺、祛痰止咳等功效[1]。同時，南沙參多糖具有防輻射、抗衰老和保肝等作用[2-4]。貴州產南沙參以多糖含量進行質量評價至今尚未見報道。本試驗以多糖含量為標準對貴州不同產地南沙參藥材質量進行評價，以期為貴州南沙參的開發利用提供一定的基礎資料。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 紫外分光光度計(UV-5900，上海元析儀器有限公司)；電子天平(XS205，瑞士梅特公司)；回流裝置，水浴鍋(HH-6，常州澳華儀器有限公司)；數顯電熱鼓風干燥箱(GZX-9070MBE，上海博訊公司)。

1.2 試藥 D-無水葡萄糖(中國食品藥品檢定研究院，批號110833-201506)；95%乙醇(國藥集團化學試劑有限公司，AR，批號：20151222)；苯酚(重慶川東化工有限公司，AR，批號：20130501)；濃硫酸(重慶川東化工有限公司，AR，批號：20160601)。試驗用水為超純水。

1.3 南沙參樣品 南沙參生藥分別采自于貴州高坡、施秉、普定、織金、花溪、六枝、水城、安順、黔西和納雍等不同地區，經貴州中醫藥大學藥學院藥用植物與栽培教研室檀龍顏副教授鑒定為輪葉沙參Adenophoratetraphylla。

2 方法與結果

2.1 多糖的提取與精制 將南沙參藥材切片后，按馮澤岸等[1]的方法處理得南沙參多糖，得率約14%。

2.2 多糖的定性檢查 采用Fehling試驗法，參考梁莉等[5]的方法：取2只10 mL試管，分別加入供試品溶液1 mL、Fehling試劑2 mL，1只試管中加入鹽酸(2 mol·L-1)0.5 mL，2只試管于沸水浴加熱，加酸試管有磚紅色沉淀生成，表明多糖酸解后發生反應。

2.3 試液的制備 參考馮澤岸等[1]的方法：標準品母液按0.5 g·L-1濃度制備；系列標準液濃度按0.01、0.02、0,04、0.06、0.08、0.1 g·L-1濃度制備；供試品溶液按0.2 g·L-1濃度制備；苯酚溶液按250 g·L-1濃度制備(現用現配，避光)。

2.4 硫酸-苯酚法測定

2.4.1 吸收波長及顯色條件 參考馮澤岸等[1]的方法，測定波長選擇490 nm；顯色條件設定為苯酚用量1 mL，硫酸用量5 mL，沸水浴，反應10 min。

2.4.2 標準曲線的制備 精密量取各標準溶液各1.0 mL，以純水為對照，于490 nm測定，以對照品濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標制作標準曲線，回歸方程為：y=7.0241x+0.1271，(r=0.9996，n=6)(表1，圖1)，線性關系良好。

表1 多糖線性關系的考察

2.4.3 精密度及穩定性試驗 精密量取0.06 mg·mL-1供試品溶液1.0 mL，于490 nm測定吸光度，由表2可知平均吸光度為0.435 AU，RSD值為1.86%，顯示其精密度良好。將顯色后的溶液溶于0，10，40，80，150 min測定吸光度，由表3可知平均吸光度為0.552 AU，RSD值為0.8773%，結果顯示其在150 min內穩定。

表2 南沙參多糖含量測定的精密度試驗

表3 南沙參總多糖含量測定的穩定性試驗

2.4.4 重復性試驗 精密量取適量南沙參多糖平行制備成6份溶液，測定吸光度計算多糖含量及RSD值。由表4可知，所測得多糖平均含量為13.95%，RSD值為1.2%，由此可見其重復性較好。

表4 南沙參總多糖含量測定的重復性試驗

2.4.5 加樣回收率實驗 精密稱取南沙參多糖約20 mg，共6份，制備溶液，精密吸取各溶液1.5 mL，標準溶液(濃度：0.2 mg·mL-1)1.5 mL，于10 mL容量瓶中定容，搖勻，測定吸光度，用標準曲線計算樣品含量，在計算回收率、RSD值。從表5可知平均加樣回收率為99.1%，RSD值為0.95%。

表5 加樣回收率實驗結果

注：回收率%=(測得總量-樣品含量)/加樣量×100%。

2.4.6 多糖含量測定 精密稱取不同產地樣品粗多糖共10份，各20.0 mg，配置成濃度為0.06 mg·mL-1的樣品溶液，每份樣品溶液精密量取3份各1.0 mL，即每組3份，測定吸光度，計算樣品中葡萄糖濃度，以葡萄糖計樣品中多糖含量=C×D×V/m×100%(C：樣品溶液葡萄糖濃度；D：稀釋倍數，V：樣品溶液體積，m：樣品質量)。

表6 南沙參多糖含量測定結果 (n=3)

由表6可知，在所檢測的不同10個產地之中，以六枝，水城，施秉地區南沙參多糖含量最低，約為6%～7%。 以納雍南沙參多糖含量最高，為21.978%。高坡、黔西、普定南沙參多糖含量較為接近，為11%～13.799%。 織金、花溪、安順南沙參多糖相近為17.839%～19.901%。

3 結論

通過研究發現，六枝、水城、施秉地區所產南沙參藥材多糖含量低，表明在該地區的南沙參藥材原植物多糖轉化率較差；相比之下，納雍、安順所產南沙參多糖含量較高，表明其原植物多糖轉化率較高；而高坡、黔西、普定、花溪、織金所產南沙參多糖含量居中。因此，以多糖含量為評價指標考察南沙參種植區的選擇，此次實驗認為納雍和安順為南沙參種植的較適宜地區。