懸鉤子二元醇質體凝膠對日光性皮炎小鼠模型的保護作用

魯昊昊 湯榮凡 侯春羽 王楚橋 童麗

（青海大學醫學院 西寧 青海 810000）

日光性皮炎（Sunshine dermatitis）是一種長時間暴露在日光下所致的皮膚病[1]，該疾病是由于太陽光中波長為290~320nm的紫外線照射皮膚，引起皮膚組織釋放組織胺等一系列炎癥介質產生的炎癥反應。臨床表現為紅腫、紅斑、水泡、糜爛甚至休克，該疾病若未及時治療則可能留有疤痕，給患者的生活帶來極大的痛苦[2-3]。而紫色懸鉤子（Rubus irritans Focke）薔薇科，懸鉤子屬落葉灌木，該屬植物含有揮發油、黃酮苷、萜類、鞣質、酚類等多種化學成分， 具有抑菌、抗腫瘤、抗氧自由基、抗炎、保護心血管、抗過敏等多種藥理作用[4-5]。按照日光性皮炎的發病機理，該植物是治療日光性皮炎的良好藥材，本研究旨在為紫色懸鉤子預防日光性皮炎皮膚病提供理論依據及實驗基礎。

1.實驗材料

1.1 實驗動物

KM小鼠（體重18～22g，雌雄各半）。

1.2 實驗藥材及試劑

紫色懸鉤子果實；大豆卵磷脂；聚山梨醇酯-80；無水乙醇；1，2-丙二醇；三乙醇胺；pH=6.8（±0.01）磷酸鹽緩沖液；卡波姆940；HE染色試劑盒。

1.3 實驗儀器

磁力加熱攪拌器；紫外燈；旋轉蒸發儀。

2.實驗方法

2.1 提取實驗

2.1.1 紫色懸鉤子果實的提取 將紫色懸鉤子果實搗碎，在磁力加熱攪拌器上先用乙醇于30℃，750r/min提取9小時，共提取兩次，過濾，合并濾液，旋蒸溶劑，得醇提物；將濾渣置于磁力加熱攪拌器上用蒸餾水于30℃，750r/min提取9小時，共提取兩次，過濾，合并濾液，旋蒸溶劑，得水提物。

2.1.2 二元醇質體的制備 采用乙醇注入-超聲法制備二元醇質體[6]。分別取處方量的醇提物和水提物加入磷酸鹽緩沖液溶解，低溫4℃保存。準確稱取處方量的大豆卵磷脂、聚山梨醇酯-80溶解于處方量的二元醇相中（無水乙醇:1，2-丙二醇=7:3），在30℃，750r/min的條件下緩緩將磷酸鹽緩沖液加入二元醇相中，持續攪拌30min，探頭超聲3min（頻率20kHz，超聲3s，間隔3s），即得水提物和醇提物二元醇質體，以相同的方法制備加入生理鹽水的二元醇質體作為對照。

2.1.3 凝膠的制備 將2g卡波姆溶于200ml水中，充分溶脹。用三乙醇胺緩慢調節pH為6.5～7.0，將二元醇質體與其質量比2:3混合，攪拌即得。

2.2 動物實驗

2.2.1 分組及給藥 將30只KM小鼠隨機分為三組，每組各10只，分別為對照組、醇提物組和水提物組，適應性喂養3天。在小鼠背部皮膚1cm×2cm范圍內脫毛，每天涂抹等量二元醇質體凝膠（0.15g·cm-2），每隔8小時一次，一日三次，共涂抹3天[7]。

2.2.2 日光性皮炎造模 小鼠涂抹給藥3天后，將小鼠固定，于20cm處紫外300nm線照射，連續照射一小時后給藥一次，再連續照射1小時。照射完畢后12小時再給藥一次。72小時后可見對照組、醇提物組和水提物組小鼠皮膚出現明顯紅腫、紅斑甚至組織破潰，說明造模成功。建立皮膚組織損傷程度評價標準[8]，見表1。

2.2.3 HE染色病理切片檢查 頸椎脫臼法處死小鼠，減去小鼠患處皮膚，置于10%福爾馬林中固定，制備病理切片，HE染色，鏡檢。

2.2.4 統計學分析 實驗數據采用SPSS24.0統計軟件進行分析，組間比較采用K-W（Kruskal-Wallis）檢驗，P＜0.05差異具有統計學意義。

3.實驗結果

3.1 實驗數據分析

實驗結果數據見表2。三組實驗小鼠脫毛處皮膚出現不同程度的紅腫、紅斑等病理狀態，說明三組小鼠均造模成功。與水提物組和醇提物組相比，空白對照組具有更明顯的紅腫、紅斑甚至皮膚破潰等現象，說明醇提物組和水提物組均產生了預防日光性皮炎的作用（P＜0.05）。醇提物組與水提物組相比，醇提物組預防效果更佳（P＜0.05）。

表2 不同小鼠組別病理切片檢查結果比較（n=10）

3.2 小鼠病理切片分析

空白對照組由于未加入提取物小鼠皮膚均出現紅腫、紅斑及炎癥細胞浸潤，說明空白醇質體凝膠不具備預防日光性皮炎的作用；水提物組和醇提物組皮膚損傷等級均較空白對照組低，說明紫色懸鉤子果實提取物中含有預防日光性皮炎的有效成分。但水提物組和醇提物組相比，醇提物組對日光性皮炎產生了更佳的預防作用，可能是由于紫色懸鉤子有效成分大部分于醇提物中，具體為何種成分，需要進一步實驗分析。

4.小結

日光性皮炎為一種長時間暴露在日光下所致的皮膚病，皮膚經紫外線照射后引起血管擴張滲透增加、組織水腫等一系列反應[9-10]，患上此病的患者長時間無法直接接觸日光，為其生活帶來了極大的不便。而根據本實驗研究發現，紫色懸鉤子果實中含有能夠預防日光性皮炎的有效成分，經動物實驗顯示該成分藥理效果高，極具開發價值，同時本實驗也為紫色懸鉤子治療日光性皮炎提供了理論指導和實驗基礎。我們有理由相信，該類藥材的更多藥理作用將逐步被挖掘出來，為日光性皮炎患者及其皮膚敏感脆弱的人群帶來福音。