多瘤病毒SV40、BKV及JCV在健康成人中的感染率

龍柳艷 韋曉謀

（廣西醫科大學第四附屬醫院暨柳州市工人醫院 健康管理部體檢科 廣西 柳州 545005）

多瘤病毒是一類可以感染人類的、無囊膜的正二十面體小DNA病毒[1]，主要包括猴多瘤病毒（SV40）、人多瘤病毒（BKV）和JC病毒（JCV）等3種病毒[2]。多瘤病毒呈全球性分布，在人群中廣泛傳播[3]。我院研究室調查研究顯示BKV在廣西瑤、侗、苗、壯等少數民族外周血白細胞中存在較高感染率[4]。為了進一步了解多廇病毒SV40、BKV及JCV在健康人群血液標本中的感染率情況，我們收集了1000例健康成人的血液標本，用巢式PCR方法擴增多瘤病毒的保守區編碼序列，現報道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取到我院參加健康體檢的健康成人1000例，男女各半，年齡不限，收集上述研究對象靜脈血3ml存于EDTA抗凝管。

1.2 儀器設備材料

設備：DNA核酸分析儀、DNA電泳儀、Pe5700-PCR儀、日立低溫高速離心機、日立低濕超速離心機旋渦混旋器、及凝膠成像系統等分子生物學儀器，BKV-DNA、SV40-DNA、及JCV-DNA定性試劑。

1.3 操作方法

1.3.1 具體操作過程 隨機選取到我院參加健康體檢的健康人員1000例，男女各半，年齡不限。收集受試者空腹肝素抗凝靜脈血3ml，尿液10ml。分離PBLs，將細胞濃度調整為105/ml濃度，200μl/管分裝，提取基因組DNA。

PCR反應檢測SV40基因：上游引物5`-GCGTGACAGCCGGCGCAG CACCA-3`，下游引物5`-GTCCATTAGCTGCAAAGATTCCTC-3`（由上海申能博彩合成），反應條件為：94℃預變性5min，94℃變性45s，55℃退火45s，72℃延伸45s，30個循環，72℃7min，擴增目的片段為487bp。取擴增產物于2%瓊脂糖凝膠進行電泳，（陽性質控標本購自解放軍總院），50bp DNA Ladder購自申能博彩。

PCR反應檢測BKV基因：PCR擴增BKV－DNA序列，2.5%瓊脂糖凝膠電泳分離PCR結果，第一次PCR擴增：得到176bp DNA產物，第二次PCR擴增：得到149bp的DNA片段，與預期結果一致。

PCR反應檢測JCV基因：上游引物5`-CCCCATACCAACTTAGC TTTC-3`，下游引物5`-CCAATTTGTAAGGCAGATAG-3`（由上海申能博彩合成），反應條件為：94℃預變性5min，94℃變性45s，55℃退火45s，72℃延伸45s，30個循環，72℃7min，擴增目的片段為251bp。取擴增產物于2%瓊脂糖凝膠進行電泳。

1.3.2 觀察指標及方法 觀察指標：在瓊脂糖凝膠電泳中，在相應區域內出現特異性片段為陽性，無特異性片段為陰性。

觀察方法：全部PCR擴增產物通過瓊脂糖凝膠電泳分析，檢測是否有特異性片段產物產生。

1.3.3 結果判斷標準 采用PCR擴增樣本中的多瘤病毒DNA，在瓊脂糖凝膠電泳中，在相應區域內出現特異性片段為陽性，無特異性片段為陰性（參見《全國臨床檢驗操作規程》第3版）。通過檢測健康成人血標本中多瘤病毒SV40、BKV及JCV的DNA，檢測其陽性率；并統計分析不同性別、不同年齡組健康成人血標本多瘤病毒SV40、BKV及JCV的檢出率及其差別有無顯著性區別。

1.4 統計學方法

應用PENS3.1軟件系統分析，計數資料的比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2.結果

健康成人血標本中多瘤病毒SV40-DNA、BKV-DNA、JCV-DNA的陽性率較高，分別是：23.5%、57.2%、32.1%。不同性別組、不同年齡組差異無顯著性意義（P＞0.05），見表1、表2。

表1 不同性別多瘤病毒的感染率[n（%）]

表2 不同年齡多瘤病毒的感染率[n（%）]

3.討論

多瘤病毒是正常細胞異常增殖、分化的一類DNA病毒，因其能誘導動物產生腫瘤而得名，當人體檢免疫功能低下，HIV感染者或移植等患者中，多瘤病毒可再度激活，引起相關疾病。如HIV患者合并JCV相關的進行性多灶性白質腦病（PML）；腎移植后病人并發BKV相關性腎病（BKVN）等等，目前研究認為多瘤病毒感染和人類多種疾病相關：出血性膀胱炎、間質性腎小球腎炎、輸尿管狹窄、血管病變、肺炎、腦炎、視網膜炎甚至多器官功能衰竭。

多瘤病毒的傳播途徑尚未完全闡明，目前國內在不同地域和不同人群中多瘤病毒感染的發生率的研究報道也較少。正常人群原發性多瘤病毒感染常發生于幼年時，常常無明顯的臨床癥狀，病毒不能完全被機體的免疫系統排除，而潛伏在腎組織和PBLs中。但多瘤病毒抗體對多瘤病毒再次激活并無明顯抵抗作用，當HIV感染者和病人免疫功能下降時，尤其是T細胞功能低下的患者中感染的多瘤病毒可反復激活，其子代病毒開始大量復制，導致腎功能減退乃至腎功能喪失、進行性腦白質病（PML）等各種嚴重病發癥。

為研究多瘤病毒SV40、BKV、JCV在健康人群中的感染率，課題研究組在我院體檢中心隨機選擇1000例健康受檢人員EDTA抗凝靜脈血3ml在我院檢驗科PCR實驗室由專業技術人員進行PCR檢測比較。結果提示：多瘤病毒SV40、BKV及JCV在柳州地區健康人群中存在較高的感染率，證實了PBLs是多瘤病毒在體內的潛伏細胞及傳播載體，應加強對多瘤病毒條件致病性的認識，積極防治、減少多瘤病毒相關性疾病的發生率。