奶牛綠膿桿菌的分離與鑒定

買爾哈巴·吾恩阿里比

（伊寧市農業農村局動物衛生監督所，新疆伊寧 835000）

1 發病情況及臨床癥狀

2019年5月15日，伊寧市某奶牛場一頭奶牛于清晨4時開始陰門流出大量血液，但牛無臨產癥狀，獸醫對牛進行了引產，該牛產下一母犢為死胎，產后該牛飲食欲廢絕，至5月14日胎衣未下，且陰門流出紅褐色血液。14日晚12時該牛出現嚴重的呼吸困難，且有疼痛表現，獸醫對牛進行了強心補液及抗生素治療，在輸液過程中牛因心衰竭呼吸困難而死亡。

2 剖檢變化

肺、子宮子葉嚴重感染，出血性壞死，顏色發黑，切開肺流出黑褐色的液體，小腸黏膜充血、出血嚴重。其他器官基本正常。

3 病料采集

無菌采取病死牛的病理變化明顯的肺、子宮子葉等器官進行分離鑒定。

4 病原菌分類與鑒定

4.1 病原菌的分離培養

4.1.1 組織涂片

取病牛的肺及子宮子葉組織分別涂片，革蘭氏、瑞特氏、堿性美藍染色，鏡檢。在肺組織革蘭氏染色涂片中可見大量兩端鈍圓，無芽孢及莢膜、單在或成對革蘭氏陰性中等大小桿菌，美蘭染色可見著色不均的顆粒或兩端濃染中等桿菌。子宮子葉組織革蘭氏染色可見大量革蘭氏陰性大、中等桿菌，革蘭氏陽性球菌及大桿菌[1]。

4.1.2 增菌培養

將采集的肺、子宮子葉組織分別接種于普通肉湯、厭氣肝湯，37℃培養24小時，觀察生長情況。結果肺組織的肉湯培養物渾濁、在表面形成初期為綠色后期變成淡褐色的薄膜，培養物發綠，染色鏡檢培養物可見革蘭氏陰性中等桿菌。在對子宮子葉厭氣肝湯培養物的染色鏡檢中可見大量革蘭氏陰性大、中等桿菌，革蘭氏陽性球菌及大桿菌。

4.1.3 純培養及分離培養

取肺組織肉湯培養物在普通培養基上劃線進行純培養。取子葉培養物在鮮血瓊脂上用焦性沒食子酸法進行厭氧純培養和在普通瓊脂上劃線進行需氧菌的純培養。染色鏡檢，可見四株菌，即革蘭氏陰性大，中等桿菌，革蘭氏陽性球菌及大桿菌。無菌取上述四株菌的單個菌落分別接種于普通瓊脂，鮮血瓊脂，SS瓊脂，普通肉湯，厭氣肝湯，37°C培養24小時，肺組織的培養物在普通瓊脂上長出，較大、光滑、扁平、濕潤、邊緣整齊的菌落，培養物發綠色，肉湯培養物渾濁呈黃綠色。子葉培養物在SS培養基上長出粉紅色、較大、隆起邊緣整齊的菌落。在普通培養基上長出針尖大小的灰白色菌落，在鮮血培養基上進行的厭氧培養長出不容血且邊緣不整齊的較大菌落。

4.2 生化鑒定

取上述致死小白鼠菌株的普通瓊脂培養物進行氧化酶實驗，結果為陰性。取培養物接種ATB EXPRESSION細菌自動鑒定及藥敏測試儀ID32E試條上37℃培養24h，上機鑒定，其結果見表1。

表1

5 防制

（1）加強飼養管理，立即停止飼喂發霉麩皮，避免因不斷攝入發霉飼料產生的有毒物質引起中毒，為綠膿桿菌的感染提供機會。

（2）牛舍內應用福爾馬林徹底消毒，搞好環境衛生。

（3）本實驗室的藥敏結果顯示，該菌對環丙沙星最敏感，其次為羧芐青霉素、諾氟沙星。氧氟沙星，慶大霉素效果不明顯。對頭孢拉定、氨芐西林、青霉素等藥物不敏感。