鼻咽癌患者Keap1與Nrf2的表達(dá)及預(yù)后分析

于曉黎 周鋒 夏瑜

【摘要】 目的 探討分析鼻咽癌患者Kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關(guān)蛋白1（Keap1）與核因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）的表達(dá)及預(yù)后。方法 68例鼻咽癌患者作為研究對(duì)象， 切取患者鼻咽癌組織標(biāo)本以及對(duì)應(yīng)的癌旁組織標(biāo)本， 行免疫組化檢測(cè)Keap1、Nrf2， 觀察鼻咽癌患者Keap1與Nrf2的表達(dá)情況， 并對(duì)不同的細(xì)胞核Nrf2、Keap1表達(dá)水平進(jìn)行分組， 細(xì)胞核Nrf2表達(dá)水平低為觀察A組， 細(xì)胞核Nrf2表達(dá)水平高為對(duì)照A組;細(xì)胞質(zhì)Keap1表達(dá)水平低為觀察B組， 細(xì)胞質(zhì)Keap1表達(dá)水平高為對(duì)照B組。比較不同Nrf2、Keap1表達(dá)水平患者預(yù)后情況。結(jié)果 Nrf2、Keap1在鼻咽癌組織中陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。68例患者脫落4例， 共有21例患者死亡， 死亡原因?yàn)楸茄拾?fù)發(fā)7例（33.33%）， 遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移14例（66.67%）。其中觀察A組31例， 對(duì)照A組33例， 觀察A組存活率明顯高于對(duì)照A組， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。觀察B組30例， 對(duì)照B組34例， 觀察B組存活率明顯高于對(duì)照B組， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 Nrf2、Keap1在鼻咽癌癌變組織中高表達(dá)， 且Nrf2、Keap1高表達(dá)是不良預(yù)后的重要因素， 值得臨床重視。

【關(guān)鍵詞】 Kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關(guān)蛋白1;遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移;核因子E2相關(guān)因子2;鼻咽癌;氧化應(yīng)激

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.19.017

Nrf2、Keap1基因通路在神經(jīng)母細(xì)胞瘤以及非小細(xì)胞肺癌中對(duì)代謝酶基因、脫氧核糖核酸（DNA）損傷修復(fù)基因等因子的作用已經(jīng)有諸多研究報(bào)道， 但是Nrf2-Keap1基因通路在鼻咽癌中的表達(dá)、化療藥物敏感相關(guān)性以及與預(yù)后相關(guān)性的報(bào)道較少[1]。基于此， 本次研究中針對(duì)鼻咽癌組織中Keap1、Nrf2行免疫組化檢測(cè)進(jìn)行分析， 旨在為臨床優(yōu)化結(jié)直腸癌細(xì)胞治療方案、預(yù)測(cè)預(yù)后等提供實(shí)驗(yàn)參考依據(jù)， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2010年5月～2015年12月本院收治的68例鼻咽癌患者為研究對(duì)象， 均為鼻咽部非角化性鱗狀細(xì)胞癌患者， 患者均經(jīng)組織病理學(xué)證實(shí)。涉及隨訪調(diào)查內(nèi)容獲倫理委員會(huì)批準(zhǔn)， 所有患者均簽署知情協(xié)議書。納入標(biāo)準(zhǔn)：活檢標(biāo)本滿足診斷要求者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性病變患者;②納入本研究行病理學(xué)檢查時(shí)已經(jīng)過放化療、生物免疫治療患者;③入院評(píng)估Karnofsky評(píng)分≤70分患者。脫落標(biāo)準(zhǔn)：①持續(xù)隨訪期間無法獲得聯(lián)系患者;②移居無法配合研究患者;③意外身故患者。診斷標(biāo)準(zhǔn)：①根據(jù)WHO制定的病理學(xué)分類Ⅱ（非角化鱗狀細(xì)胞癌）～Ⅲ型（未分化癌）[2]。

②TNM分期以及臨床分期均根據(jù)美國癌癥聯(lián)合委員會(huì)（AJCC）與國際抗癌聯(lián)盟（UICC）制定標(biāo)準(zhǔn)。68例患者中男39例，?女29例;TNM分期中T1～T2期患者35例， T3～T4期患者33例;遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移M0期68例;臨床分期Ⅰ～Ⅱ期患者4例， Ⅲ期及以上患者64例;年齡最小42歲， 最大68歲， 平均年齡（53.24±4.92）歲。

1. 2 研究方法 ①選取68例患者切取的鼻咽癌組織標(biāo)本以及對(duì)應(yīng)的癌旁組織標(biāo)本， 具體方法為：第一步：鼻咽癌組織標(biāo)本行福爾馬林液脫水固定;第二步：常規(guī)石蠟包埋;第三步：切片、免疫組化染色， 采用SP兩步法進(jìn)行免疫組化染色（染色強(qiáng)度評(píng)分共3分， 無著色為0分， 低度染色計(jì)1分，?3分為重度著色;陽性判定標(biāo)準(zhǔn)以細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核著色即顯示為棕色為陽性）。0<腫瘤細(xì)胞陽性比例<100%。將其與染色強(qiáng)度評(píng)分相乘， 因重度著色為3分， 所以總體得到最大評(píng)分為300%[3]。操作者共有兩位， 均為有豐富的臨床工作經(jīng)驗(yàn)者， 并且對(duì)本次研究不知情， 不了解患者的基線資料， 為單盲法判斷。②對(duì)不同的細(xì)胞核Nrf2表達(dá)水平、細(xì)胞質(zhì)Keap1表達(dá)水平進(jìn)行分組， 即細(xì)胞核Nrf2表達(dá)水平低為觀察A組（Nrf2表達(dá)水平依據(jù)著色評(píng)分與腫瘤細(xì)胞陽性比例綜合評(píng)定， 鑒于平均值50%， 總得分<50%則為細(xì)胞核Nrf2低表達(dá)）， 細(xì)胞核Nrf2表達(dá)水平高為對(duì)照A組（總得分≥50%則為細(xì)胞核Nrf2高表達(dá)）。細(xì)胞質(zhì)Keap1表達(dá)水平低為觀察B組（鑒于細(xì)胞質(zhì)Keap1平均值150%， 總得分<150%則為細(xì)胞質(zhì)Keap1低表達(dá)）， 細(xì)胞質(zhì)Keap1表達(dá)水平高為對(duì)照B組（總得分≥150%則為細(xì)胞質(zhì)Keap1高表達(dá)）。持續(xù)3年， 隨訪調(diào)查鼻咽癌患者預(yù)后（預(yù)后調(diào)查內(nèi)容為存活率）。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 鼻咽癌組織、癌旁組織標(biāo)本Nrf2、Keap1陽性表達(dá)情況比較 Nrf2、Keap1在鼻咽癌組織中陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2. 2 不同Nrf2表達(dá)水平患者預(yù)后情況比較 68例患者脫落4例， 共有21例患者死亡， 死亡原因?yàn)楸茄拾?fù)發(fā)7例（33.33%）， 遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移14例（66.67%）。其中觀察A組31例， 對(duì)照A組33例， 觀察A組存活率明顯高于對(duì)照A組， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

2. 3 不同Keap1表達(dá)水平患者預(yù)后情況比較 觀察B組

30例， 對(duì)照B組34例， 觀察B組存活率明顯高于對(duì)照B組， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

3 討論

Keap1的主要作用為調(diào)控細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)， 其中與器官組織再生相關(guān)的干細(xì)胞即受到Nrf2-Keap1基因通路調(diào)控[4]。與Nrf2-Keap1基因通路調(diào)控細(xì)胞增殖相關(guān)的作用機(jī)制導(dǎo)致細(xì)胞癌變的觀點(diǎn)目前已經(jīng)得到了臨床廣泛認(rèn)同， 但關(guān)于鼻咽癌中Nrf2-Keap1基因通路的作用鮮有研究報(bào)道[5-7]。

本研究中， 68例鼻咽癌患者切取其鼻咽癌組織標(biāo)本以及對(duì)應(yīng)的癌旁組織標(biāo)本， 對(duì)其中Nrf2、Keap1進(jìn)行免疫組化檢測(cè)， 結(jié)果表明Nrf2、Keap1在鼻咽癌病變組織其具有較高的表達(dá)， 而癌旁組織陽性率較低。Nrf2主要表達(dá)于鼻咽癌腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核中， 具有一定限制性， 而Keap1主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中， 表達(dá)率高達(dá)60.29%。馬行凱等[8]研究表明Keap1表達(dá)率為58.30%， 這與本次研究結(jié)果較為相似， 也警示了Keap1、Nrf2高表達(dá)的情況下具有較高風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生鼻咽癌。本研究結(jié)果提示， Nrf2-Keap1基因通路參與了鼻咽癌腫瘤細(xì)胞細(xì)胞增殖與遷移間的信號(hào)傳導(dǎo)， 而細(xì)胞癌變、鼻咽癌腫瘤細(xì)胞增殖涉及到信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑異常， Nrf2-Keap1基因通路發(fā)揮加強(qiáng)轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄活性， 使信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑異常， 進(jìn)而過度調(diào)節(jié)鼻咽癌腫瘤細(xì)胞的增殖。該作用機(jī)制與患者的預(yù)后相關(guān)， Nrf2-Keap1基因通路可促使鼻咽癌復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移， Nrf2、Keap1高表達(dá)的患者普遍預(yù)后不良， 提示Nrf2、Keap1聯(lián)合診斷對(duì)判斷預(yù)后具有重要作用。

綜上所述， Nrf2、Keap1在鼻咽癌癌變組織中高表達(dá)， 且Nrf2、Keap1高表達(dá)是不良預(yù)后的重要因素， 值得臨床重視。

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[收稿日期：2019-01-25]