血清新型細胞角蛋白聯合腫瘤標志物檢測在非小細胞肺癌診斷中的應用

張宇

【摘要】 目的：探討血清新型細胞角蛋白標志物Monototal聯合其他腫瘤標志物在非小細胞肺癌診斷的臨床價值。方法：檢測非小細胞肺癌患者126例（肺鱗癌67例、肺腺癌59例，非小細胞肺癌組）、肺部良性疾病患者68例（肺部良性疾病組）和健康人群45例（健康對照組）血清中細胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）、糖類抗原153（CA153）、神經元特異烯醇化酶（NSE）及新型細胞角蛋白標志物Monototal水平，并統計分析其敏感性和特異性。結果：非小細胞肺癌組血清CYFRA21-1、CA153、NSE及Monototal水平均顯著高于肺部良性疾病組及健康對照組，比較差異均有統計學意義（P<0.05）;非小細胞肺癌組血清CYFRA21-1、CA153、NSE及Monototal陽性率顯著高于肺部良性疾病組及健康對照組，比較差異均有統計學意義（P<0.05），敏感性分別為66.7%、32.5%、40.4%及77.8%;各項腫瘤標志物單檢對非小細胞肺癌診斷的靈敏度分別為66.7%、32.5%、40.4%和77.8%，4項指標聯合檢測的敏感性為89.7%，顯著高于單項檢測指標，比較差異均有統計學意義（P<0.05）。結論：Monototal聯合CYFRA21-1、CA153、NSE檢測能提高非小細胞肺癌診斷的靈敏性。

【關鍵詞】 新型細胞角蛋白; 非小細胞肺癌; 聯合診斷; 靈敏性; 特異性

【Abstract】 Objective：To observe the clinical value of combined detection of novel cytokeratin biomarker Monototal and tumor markers in diagnosis of non-small cell lung cancer.Method：Levels of serum CYFRA21-1，CA153，NSE and Monototal in 126 non-small cell lung cancer patients（67 squamous carcinoma cases，59 adenocarcinoma cases，non-small cell lung cancer group），68 benign pulmonary diseases patients（benign pulonary diseases group）and 45 healthy volunteers（healthy control group）were measured and their sensitivity and specificity were analyzed.Result：The levels of serum CYFRA21-1，CA153，NSE and Monototal in non-small cell lung cancer group were greatly increased compared with the benign pulmonary diseases group and healthy control group（P<0.05）.The non-small cell lung cancer group had significantly higher positive rate in serum CYFRA21-1，CA153，NSE and Monototal than the benign pulmonary diseases group and health control group（P<0.05），with sensitivity respectively as 66.7%，32.5%，40.4% and 77.8%.Single indicator detection had sensitivity of nonsmall cell lung cancer respectively as 66.7%，32.5%，40.4% and 77.8%，which was 89.7% in combined detection of 4 indicators.The combined detection had higher sensitivity than single indicator detection，the difference had statistical significance（P<0.05）.Conclusion：Combined detection of serum CYFRA21-1，CA153，NSE and Monototal can improve the sensitivity of non-small cell lung cancer diagnosis.

【Key words】 Novel cytokeratin biomarker monototal; Non-small cell lung cancer; Combined detection; Sensitivity; Specificity

First-authors address：Jingzhou Chest Hospital，Jingzhou 434020，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.04.016

肺癌是我國發病率和死亡率最高的一種惡性腫瘤，其中非小細胞肺癌高達80%，術后5年內生存率較低，主要因為此類腫瘤術后容易復發和轉移[1-2]。當下對于非小細胞肺癌的診斷技術主要依賴于細胞學和組織學檢查，并且組織的獲取會引起患者較大的創傷，還會導致其他并發癥的發生[3]。血清腫瘤標志物的檢測可以很好地避免細胞組織學檢測方法帶來的弊端，具有創傷小、檢測標本來源方便、方法重復性好等優點[4]，并且研究發現血清腫瘤標志物在癌癥診斷、分類及預后等方面都有較好的臨床應用價值[5]。細胞角蛋白（cytokeratin，CK）屬于上皮細胞中特異表達的一種中間微絲蛋白[6]。近年來，一種新型細胞角蛋白Monototal試劑盒能夠同時用于CK8、18和19單克隆片段，并且研究發現Monototal對非小細胞肺癌的診斷具有較好敏感性[7-8]，但其聯合其他腫瘤標志物對非小細胞肺癌的診斷研究尚缺乏。因此，本文研究了Monototal聯合血清中細胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）、糖類抗原153（CA153）、神經元特異烯醇化酶（NSE）檢測在非小細胞肺癌診斷中的臨床價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 非小細胞肺癌組：收集2016年3月-2017年10月本院腫瘤科確診的非小細胞肺癌患者126例，其中男81例，女45例，年齡33～78歲，平均（54.7±14.2）歲，均通過細胞學和組織學確診;其中肺鱗癌患者67例，肺腺癌患者59例。納入標準：（1）非小細胞肺癌組及肺部良性疾病組患者入院確診為該類疾病便被納入研究，在此之前一個月內未服用任何藥物，以排除藥物對血清中各項研究指標的影響;（2）所有研究對象均接受支氣管鏡及臨床病理明確的診斷;（3）不存在其他并發癥、內分泌性疾病及其他惡性腫瘤;（4）簽署知情同意書的患者。排除標準：（1）并發有嚴重器官衰竭性疾病及內分泌性疾病;（2）未能確診的患者;（3）正在接受放化療及拒絕參加的患者;（4）患者病情加重急需馬上治療的患者。肺部良性疾病組：納入同期在本院就診的肺部良性疾病患者68例，男45例，女23例;年齡31～80歲，平均（52.5±12.9）歲，均通過細胞學和組織學檢測確診。健康對照組納入同期本院體檢中心的健康人群45例，男31例，女14例;年齡29～77歲，平均（51.4±11.8）歲，無胃腸道、肝臟和生殖系統病變。三組年齡、性別比較，差異均無統計學有意義（P>0.05），具有可比性。并且此研究獲得醫院倫理委員會批準。

1.2 方法 收集所有研究對象清晨空腹靜脈血4 mL，于5 000 r/min離心8 min，分離血清儲存于-80 ℃超低溫冰箱中待測。采用羅氏Cobas E601電化學發光免疫分析儀檢測血清中細胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）、糖類抗原153（CA153）及神經元特異烯醇化酶（NSE）含量。采用Monototal試劑盒（德國，ILD biotech）檢測血清角蛋白8、18、19濃度。

1.3 觀察指標 觀察非小細胞肺癌患者、肺部良性疾病患者、健康體檢者中CYFRA21-1（0～3.3 ng/mL）、CA153（0～35 U/mL）、NSE（0～25 ng/mL）及Monototal（0～75 U/L）水平差異及陽性率，觀察比較4種腫瘤標志物及聯合檢測對非小細胞肺癌診斷的靈敏度和特異度。4種指標聯合診斷時只要其中1種指標含量為陽性即確定為陽性患者。

1.4 統計學處理 使用SPSS 20.0統計學軟件進行分析，計量資料以（x±s）表示，比較采用t檢驗，計數資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組納入對象腫瘤標志物含量比較 非小細胞肺癌組患者血清CYFRA21-1、CA153、NSE及Monototal水平均顯著高于肺部良性疾病組及健康對照組，三組比較差異均有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2.2 三組納入對象血清腫瘤標志物在各組中陽性率比較 非小細胞肺癌組患者血清CYFRA21-1、CA153、NSE及Monototal陽性率明顯高于肺部良性疾病組和健康對照組，比較差異均有統計學意義（P<0.05）。見表2。

2.3 腫瘤標志物單檢和聯合檢測對非小細胞肺癌的診斷價值 CYFRA21-1、CA153、NSE及Monototal單檢對非小細胞肺癌診斷的靈敏度分別為66.7%、32.5%、40.4%和77.8%，4項指標聯合檢測的敏感性為89.7%，顯著高于單項檢測指標，比較差異均有統計學意義（P<0.05）。4項腫瘤標志物CYFRA21-1、CA153、NSE及Monototal在肺部良性疾病組及健康對照組中均正常的有98例，特異性為86.7%，低于CYFRA21-1、CA153、NSE及Monototal單一指標診斷的特異度（96.5%、98.2%、97.3%和92.3%）。見表3。

3 討論

細胞角蛋白在正常細胞演變為惡性腫瘤細胞后階段過程中是穩定表達的，并且通常持續表達[9-10]。在癌癥演變過程中，角蛋白碎片和其他蛋白水解產物會進入血液循環中，對這些標志物進行檢測分析可以促使非小細胞肺癌的早期診斷。目前，已報道的細胞角蛋白有二十余種，其中CK19可作為上皮惡性腫瘤細胞活性的標志物，并應用于腫瘤的診斷、預后及療效評估[11-13]。細胞角蛋白只有被降解為可溶性小片段后才能釋放入血，血清學檢查只針對某些特異抗體，其中CYFRA21-1就是CK19的一種水解片段[14]。Monototal試劑盒為角蛋白新型檢測方法，可以同時檢測識別CK8、18和19單克隆片段。本文結果提示，非小細胞肺癌組血清Monototal水平均顯著高于肺部良性疾病組及健康對照組，并且血清Monototal陽性率顯著高于肺部良性疾病組及健康對照組，說明新型細胞角蛋白Monototal標志物可以很好地區分非小細胞肺癌和非肺癌患者。血清Monototal診斷非小細胞肺癌的敏感性和特異性分別為77.8%和92.3%。前期也有相關研究探討了Monototal在非小細胞肺癌臨床監測中的價值，表明非小細胞肺癌患者血清Monototal水平與腫瘤負荷存在相關性[15-17]。本試驗發現Monototal對肺鱗癌診斷的敏感性為94.0%，顯著高于肺腺癌，說明Monototal可以很好地區分肺腺癌和肺鱗癌。在理論上Monototal包括細胞角蛋白8、18、19三個單克隆抗體，三種細胞角蛋白片段均屬于細胞角蛋白家族，但三種單克隆抗體之間是否存在相互作用或干擾尚需進一步研究。

同時，本文也檢測分析了血清CYFRA21-1、CA153及NSE腫瘤標志物對非小細胞肺癌診斷的臨床價值，結果發現非小細胞肺癌組血清CYFRA21-1、CA153及NSE水平均顯著高于肺部良性疾病組及健康對照組，非小細胞肺癌組血清CYFRA21-1、CA153及NSE陽性率顯著高于肺部良性疾病組及健康對照組，敏感性分別為66.7%、32.5%及40.4%，各項腫瘤標志物單檢對非小細胞肺癌診斷的靈敏度分別為66.7%、32.5%和40.4%，然而4項指標聯合檢測的敏感性為89.7%，顯著高于單項檢測指標。因此，在以后臨床診斷非小細胞肺癌過程中應將新型細胞角蛋白Monototal聯合其他腫瘤標志物進行檢測，可以更好地提高檢測靈敏度。早期研究也發現CYFRA21-1聯合NSE檢測對非小細胞肺癌診斷的靈敏度和特異度均較高，進一步研究發現CYFRA21-1對鱗癌診斷價值更高，NSE對腺癌診斷價值更高[18]。潘傳四等[19]研究發現CYFRA21-1、CA125及NSE可以發揮互補作用，顯著提高非小細胞肺癌的陽性檢出率，并且非小細胞肺癌陽性檢出率與癌癥發展進程相關。呂翠紅等[20]采用中藥聯合干擾素對晚期非小細胞肺癌患者進行治療發現，治療后患者血清中VEGF、CA153及CYFRA21-1水平均顯著降低，提示CA153及CYFRA21-1可以作為預后判斷的指標。

綜上所述，Monototal對非小細胞肺癌的診斷具有較好的敏感性，可以用于非小細胞肺癌的輔助診斷，而Monototal聯合其他腫瘤標志物可以更好地提高檢測的敏感性。

參考文獻

[1] Poullis M，Shackcloth M，Page R，et al.Metastatic index of non-small-cell lung cancer and long-term survival[J].Asian Cardiovasc Thorac Ann，2015，23（2）：185-190.

[2] Jordá Aragón C，Pe?alver Cuesta J C，Manche?o Franch N，et al.Mortality in early-stage，surgically resected non-small cell lung cancer less than 3 cm of size：Competing risk analysis[J].Med Clin（Barc），2015，145（5）：185-191.

[3] Kerr K M，Bubendorf L，Edelman M J，et al.Second ESMO consensus conference on lung cancer：pathology and molecular biomarkers for non-small-cell lung cancer[J].Ann Oncol，2014，25（9）：1681-1690.

[4] Zeng Y C，Wu R，Wang S L，et al.Serum CA125 level predicts prognosis in patients with multiple brain metastases from non-small cell lung cancer before and after treatment of whole-brain radiotherapy[J].Med Oncol，2014，31（7）：48-54.

[5] Zhang Z H，Han Y W，Liang H，et al.Prognostic value of serum CYFRA21-1 and CEA for non-small-cell lung cancer[J].Cancer Med，2015，4（11）：1633-1638.

[6] Moritani S，Ichihara S，Yatabe Y，et al.Immunohistochemical expression of myoepithelial markers in adenomyoepithelioma of the breast：a unique paradoxical staining pattern of high-molecular weight cytokeratins[J].Virchows Arch，2015，466（2）：191-198.

[7]陳永康，王鳭杰，齊軍.血清新型細胞角蛋白標志物在非小細胞肺癌診斷中的價值[J].中國腫瘤，2015，24（5）：426-429.

[8] Prazakova M，Vrzalova J，Auge J M，et al.The role of MonoTotal in the primary diagnosis，prognosis and follow-up of patients with non-small cell lung cancer（NSCLC）[J].Anticancer Res，2017，31（9）：3107-3012.

[9] Eivani D，Mortazavi P.The relationship between basal and luminal cytokeratins with histopathologic characteristics of canine mammary gland cancer[J].Pol J Vet Sci，2016，19（2）：261-269.

[10]謝斌，周贅君.血清癌胚抗原和細胞角質蛋白水平對非小細胞肺癌化療患者預后的預測價值[J].實用心腦肺血管病雜志，2014，22（8）：145-146.

[11] Kawai T，Yasuchika K，Ishii T，et al.Keratin 19，a cancer stem cell marker in human hepatocellular carcinoma[J].Clin Cancer Res，2015，21（13）：3081-3091.

[12] Vieites B，López-García M ?，Castilla C，et al.CK19 expression in breast tumours and lymph node metastasis after neoadjuvant therapy[J].Histopathology，2016，69（2）：239-249.

[13] Yu X F，Yang H J，Lei L，et al.CK19 mRNA in blood can predict non-sentinel lymph node metastasis in breast cancer[J].Oncotarget，2016，7（21）：30504-30510.

[14] Zhao H，Shi X，Liu J，et al.Serum cyfra21-1 as a biomarker in patients with non small celllung cancer[J].J Cancer Res Ther，2014，10（14）：215-217.

[15] Eriksson P，Brattstrm D，Hesselius P，et al.Role of circulating cytokeratin fragments and angiogenic factors in NSCLC patients stage Ⅲa-Ⅲb receiving curatively intended treatment[J].Neoplasma，2006，53（4）：285-290.

[16] Prazakova M，Vrzalova J，Auge J M，et al.The role of Monototal in the primary diagnosis，prognosis and followup of patients with non-small cell lung cancer（NSCLC）[J].Anticancer Research，2011，31（9）：3107-3112.

[17] Kwok R，Tse Y K，Wong G L，et al.Systematic review with meta-analysis：non-invasive assessment of non-alcoholic fatty liver disease--the role of transient elastography and plasma cytokeratin-18 fragments）[J].Aliment Pharmacol Ther，2014，39（3）：254-269.

[18]裴峰，宋立彪，宋瑛，等.血清CYFRA21-1、NSE和CEA對非小細胞肺癌輔助診斷的價值分析[J].海南醫學院學報，2015，21（4）：530-533.

[19]潘傳四，吳惠.CYFRA21-1、CA125與CEA聯檢對非小細胞肺癌診斷的臨床應用[J].放射免疫學雜志，2015，20（5）：422-424.

[20]呂翠紅，胡利宏，程瑞波，等.中藥結合干擾素聯合化療治療晚期非小細胞肺癌對患者血清VEGF、CA153 及CYFRA21-1水平的影響[J].臨床合理用藥，2016，9（4）：61-62.

（收稿日期：2018-07-17） （本文編輯：周亞杰）