2型糖尿病伴冠心病患者血清miR-126、CXCL12表達及與冠脈病變的關系

孟佩盈 趙 君 陳莎帥

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(coronary atherosclerotic heart disease，CAD)是由于冠狀動脈血管發生粥樣硬化導致心肌缺血或壞死的一類心臟疾病，簡稱冠心病，其發病機制多樣[1]。2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus，T2DM)是由于機體胰島素受體功能異常產生胰島素抵抗，導致高血糖的一類糖尿病，多發于中老年，常伴有高血脂、高血壓、CAD等疾病[2]。研究表明，糖尿病患者機體長期處于高糖狀態，血管屏障受到損傷，導致血管內皮細胞過度增殖，細胞間連接減弱，伸縮性降低，導致血管閉塞發生硬化，加劇糖尿病患者血管病變[3]。相關研究表明，多種miRNAs參與CAD疾病和T2DM疾病發生過程[4]。另有研究表明C-X-C基趨化因子12(C-X-C motif chemokine 12，CXCL12)在T2DM疾病及其并發癥發生過程中具有重要作用[5]。然而CXCL12與T2DM合并CAD患者冠脈病變程度的關系尚不清楚。因此本研究納入2016年4月～2018年4月筆者醫院接收的CAD患者進行研究，旨在檢測miR-26、CXCL12在T2DM伴CAD患者血清中表達情況，并進一步分析miR-126、CXCL12水平與患者冠脈病變嚴重程度的關系，探究miR-126、CXCL12水平與冠脈病變嚴重程度的關系，以期為早期干預和預后判斷提供一定參考。

資料與方法

1.一般資料：選取2016年4月～2018年4月在筆者醫院進行治療的穩定型CAD患者103例，根據是否伴T2DM分為伴糖尿病組(CADDM組)49例、非伴糖尿病組(CAD組)54例。所有患者均經冠狀動脈造影確定冠狀動脈病變情況，采用Gensini評分標準評估冠脈病變程度[6]。CADDM組男性27例，女性22例；患者平均年齡62.54±7.93歲。CAD組男性31例，女性23例，平均年齡61.29±8.37歲。納入標準：(1)穩定型CAD：以發作性胸骨后疼痛為特點，發作1～3個月內無改變，發作在每日及每周的次數大致一致，誘導發作的情緒和勞累程度無差別，發作時疼痛性質及發作部位每次無改變。(2)T2DM：參照中華醫學會糖尿病學分會的中國T2DM防治指南(2013年)，75g OGTT后2h血糖值≥11.1 mmol/L和(或)FPG≥7.0 mmol/L，且排除1型糖尿病，即診斷為T2DM。排除標準：(1)合并心肌炎等其他心臟病。(2)不穩定型心絞痛，腎臟、肝臟功能異常。(3)合并局部出血性疾病，不能長期進行抗血小板治療。(4)合并血液系統、惡性腫瘤、免疫系統、嚴重感染等疾病。另招募同期健康體檢者50例為對照組，男性28例，女性22例，平均年齡60.29±7.64歲。3組性別、年齡比較，差異無統計學意義(P>0.05)。本研究經筆者醫院倫理學委員會批準通過，且研究對象均簽署知情同意書。

2.血清miR-126水平檢測：所有研究對象均于入院24h內(對照組于體檢當日)抽取靜脈血4ml，離心收集血清，Trizol法提取組織中總RNA，試劑盒富集miRNAs。以反轉錄所得cDNA為模板對miR-126進行實時熒光定量聚合酶鏈反應(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)擴增。每個樣品設置3個復孔，重復3次。以U6作為內參基因，采用2-ΔΔCT，ΔΔCT=(CT目的基因-CT內參基因)研究組-(CT目的基因-CT內參基因)對照組計算miR-126相對表達量。

3.血清CXCL12水平檢測：采用人CXCL12酶聯免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)試劑盒(南京森貝伽生物公司)檢測各研究對象血清中CXCL12蛋白水平。

結 果

1.3組受試者一般資料的比較：3組受試者年齡、性別、BMI、吸煙及高血壓情況比較，差異無統計學意義(P>0.05)。與對照組比較，CAD組和CADDM組患者TC、TG、LDL-C和HOMA-IR均顯著升高，HDL-C水平顯著降低，差異有統計學意義(P<0.05)；與CAD組比較，CADDM組患者TC、TG、LDL-C和HOMA-IR均顯著升高(P<0.05)，HDL-C水平顯著降低(P<0.05),詳見表1。

2.3組受試者血清miR-126、CXCL12水平的比較：與對照組比較，CAD組和CADDM組患者血清中miR-126顯著降低、CXCL12水平明顯增高，差異有統計學意義(P<0.05)；與CAD組比較，CADDM組患者miR-126顯著降低、CXCL12水平明顯增高(P<0.05),詳見表2。

3.CAD組和CADDM組患者Gensini評分的比較：與對照組比較，CAD組和CADDM組患者Gensini評分均顯著增高(P<0.05)；與CAD組比較，CADDM組患者Gensini評分顯著增高(P<0.05)，詳見表3。

表1 3組受試者一般資料的比較

與對照組比較，*P<0.05；與CAD組比較，#P<0.05

表2 CADDM患者與對照組血清免疫球蛋白水平的比較結果

與對照組比較，*P<0.05；與CAD組比較，#P<0.05

表3 3組受試者Gensini評分的比較

與對照組比較，*P<0.05；與CAD組比較，#P<0.05

4.CADDM患者血清miR-126、CXCL12水平與Gensini評分相關性分析：Pearson分析表明，CADDM患者血清miR-126與Gensini評分呈負相關(r=-0.559，P<0.05)，CXCL12水平與Gensini評分呈正相關(r=0.658，P<0.05)，詳見圖1。

圖1 Pearson相關性分析結果

5.CADDM患者血清miR-126、CXCL12水平對Gensini評分的影響：多元線性回歸分析表明，Gensini評分與miR-126、CXCL12、TC、TG、HDL-C、LDL-C、HOMA-IR水平呈線性回歸關系。回歸系數顯示，miR-126、CXCL12水平對Gensini評分影響較大(r=-0.587、r=0.561，P<0.05)，詳見表4。

討 論

近年來，隨著生活水平的提高和飲食習慣的改變，心腦血管類疾病在我國發生率逐年增加，冠心病具有高致殘率、高病死率等特征，嚴重威脅人類身體健康和生命安全，給家庭和社會造成沉重的精神和經濟負擔[7]。糖尿病尤其是2型糖尿病(T2DM)，能促進心血管發生炎性反應，導致心血管病變的發生，是冠心病的一種危癥[8]。臨床多以冠狀動脈嚴重程度衡量CAD疾病嚴重程度，作為制定治療方案和判斷預后的主要參考，然而，動脈粥樣硬化的機制尚不清楚。因此，尋找與冠狀動脈病變程度相關的生物指標，探究其與冠狀病變的關系，可為臨床治療和預后判斷提供一定參考。

表4 多元線性回歸分析結果

微小RNA(microRNA，miRNA)是真核生物中一種包含17～25個堿基的非編碼RNA，其作用是靶向和誘導目標mRNA的降解或翻譯抑制，從而在轉錄后水平引起基因沉默。miRNA參與了基因表達的體內轉錄后控制，對血管組織發育、粥樣斑塊的形成、免疫和炎性反應具有調節作用[9]。在心肌梗死和動脈粥樣硬化的發生和發展過程中，各種miRNAs發揮著重要的調控作用。Zhao等[10]發現，miR-214在缺血性心臟病及心力衰竭患者血清中低表達，通過調節參與細胞增殖和凋亡的靶基因轉錄和表達，參與心臟病理變化。Elton等[11]發現，miR-155-5p在心血管疾病患者及病毒感染等患者血清中表達上調，與疾病的嚴重程度有關，推測可采用減弱miR-155-5p水平的方式進行治療。以上研究表明，多種miRNAs參與心血管疾病發生過程，然而miR-126在糖尿病伴心血管疾病中作用研究相對較少。

miR-126是哺乳動物一種常見miRNA，一般情況在血管內皮細胞中特異性表達，維持血管穩定性。Wei等[12]研究發現，miR-126可通過調節內皮細胞凋亡過程，影響炎癥所致血管內皮結構損傷，其表達下調可導致血管發生炎性反應，促進動脈粥樣硬化病變，提示miR-126可能是評估動脈硬化的一種潛在血清標志物。Mondadori等[13]研究表明，層流剪切應力作用下人內皮細胞中miR-126表達上調，采用miR-126模擬物處理可促進間質細胞因子的表達，調節動脈粥樣硬化相關基因表達，提示miR-126與動脈粥樣硬化的發生相關。Pishavar等[14]進一步研究發現，miR-126在T2DM患者血清中低表達，可通過調節血管生成和血管完整性參與糖尿病疾病發生。以上報道提示，miR-126既與動脈粥樣硬化類疾病發生有關，又可參與糖尿病疾病發生，但其在糖尿病伴心血管疾病發生中作用暫時未知。本研究發現，CADDM患者和CAD患者血清中miR-126表達量均顯著低于健康受試者，且T2DM伴CAD患者降低更加顯著，與Al-Kafaji等[15]在T2DM合并CAD患者中發現一致，提示miR-126下調可能參與2型糖尿病伴心血管疾病發生。進一步研究發現，血清miR-126水平與CADDM患者Gensini評分呈負相關，提示血清miR-126水平一定程度上可反應T2DM伴CAD患者冠狀動脈病變的嚴重程度。

曾有研究者提出，炎性反應在心血管疾病和糖尿病的免疫學機制中具有重要作用[16]。C-X-C基趨化因子12(C-X-C motif chemokine 12，CXCL12)是趨化因子家族中的一種小細胞因子，表達于多種組織和細胞中，通常由TNF-α等促炎性刺激因子誘導表達，也被稱為基質細胞來源因子1(stromal cell-derived factor 1，SDF1)[17，18]。Tavakolian等[19]對88例冠狀動脈阻塞患者進行研究，結果顯示冠狀動脈阻塞患者血清中CXCL12水平顯著身高，與冠狀動脈閉塞的嚴重程度呈明顯正相關。Zhang等[20]研究顯示，缺血性腦卒中患者梗死區域中SDF1蛋白表達量明顯高于臨近正常組織和對照組，進一步研究顯示，SDF1蛋白主要表達于神經元細胞和星狀膠質細胞，提示SDF1蛋白表達上調可能與缺血性腦損傷有關。與Tavakolian等在冠狀動脈阻塞患者中研究一致的是，本研究發現，與對照組比較，CAD組和CADDM組患者血清CXCL12水平均明顯升高，其中CADDM患者升高更顯著，且與CADDM患者Gensini評分呈正相關，提示血清CXCL12水平升高可能與T2DM伴CAD患者冠狀動脈病變發生和嚴重程度有關。

綜上所述，CAD患者血清中miR-126表達下調，CXCL2表達上調，合并T2DM患者下調或上調更顯著，冠狀動脈病變嚴重程度與miR-126水平呈負相關，與CXCL12水平呈正相關，推測檢測CAD合并T2DM患者血清miR-126、CXCL12水平可為臨床診治和預后判斷提供一定參考。