宮腔粘連患者COX-2、VEGF及MVD表達(dá)水平研究

陳 超 劉志勤 夏偉蘭 陸 洋 孫 靜 陳芳芳 彭珊珊

1.深圳市寶安區(qū)婦幼保健院婦科，廣東深圳 518100；2.深圳市龍華區(qū)人民醫(yī)院婦科，廣東深圳 518100；3.深圳市寶安區(qū)婦幼保健院病理科，廣東深圳 518100

研究顯示，宮腔粘連主要是指宮頸管、子宮峽部、子宮腔由于感染、放射線、宮腔手術(shù)操作等因素從而導(dǎo)致人體子宮腔閉塞或者狹窄，以閉經(jīng)、復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、經(jīng)量減少、不孕作為主要表現(xiàn)，而導(dǎo)致宮腔粘連高危因素主要包括死胎清宮術(shù)、人工流產(chǎn)術(shù)、子宮黏膜下肌瘤電切術(shù)以及子宮內(nèi)膜去除術(shù)等，而近年來有研究顯示宮腔黏連與COX-2、VEGF、MVD 表達(dá)水平密切相關(guān)[1]。因此我院對(duì)宮腔粘連患者COX-2、VEGF 及MVD 表達(dá)水平進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選 擇2015 年1 月～2017 年1 月宮腔粘連患者，觀察組80 例，再選取同期女性健康體檢者80 例作為對(duì)照組。觀察組80 例，年齡20 ～45 歲，平均（32.0±1.2）歲，病程1 ～12 個(gè)月，平均（6.01±0.15）個(gè)月。對(duì)照組80 例，年齡21 ～45 歲，平均（32.2±1.3）歲。觀察組宮腔粘連患者與對(duì)照組女性健康體檢者比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05），具有可比性。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）以不明原因不孕、月經(jīng)減少作為主訴；（2）患者進(jìn)行宮腔鏡檢查結(jié)果確診為宮腔粘連。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）在3 個(gè)月內(nèi)采用促性腺激素；（2）伴有繼發(fā)惡性病變或者子宮內(nèi)膜原發(fā)病變[2]。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑 二抗-HRP 多聚體、兔抗人VEGF 單克隆抗體濃縮液、鼠抗人CD34 單克隆抗體濃縮劑、SP 試劑盒、濃縮型DAB 顯色試劑盒、EDTA 抗原修復(fù)液。

1.2.2 COX-2、VEGF 及MVD 染色方式 按照SP 染色試劑盒說明書操作，所有抗體均為即用型抗體，染色時(shí)采用EDTA 抗原修復(fù)液實(shí)施微波修復(fù)抗原，按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，對(duì)人體COX-2、VEGF及MVD 水平進(jìn)行測(cè)定，并詳細(xì)記錄。

MVD 計(jì)數(shù)：在光鏡下，CD34 染色陽性細(xì)胞呈現(xiàn)棕黃色，在低倍視野下對(duì)整個(gè)組織切片進(jìn)行掃視，取患者微血管數(shù)量密集、內(nèi)皮細(xì)胞染色清晰視野，取高倍視野6 個(gè)，對(duì)微血管數(shù)量進(jìn)行計(jì)算，計(jì)算平均值為MVD。任何呈現(xiàn)棕黃色陽性內(nèi)皮細(xì)胞，只要和鄰近血管、腫瘤細(xì)胞分界清楚、則可作為微血管數(shù)1 個(gè)。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)比觀察組宮腔粘連患者、對(duì)照組女性健康體檢者的COX-2 陽性率、VEGF、MVD 表達(dá)水平、MVD 陽性率、VEGF 陽性率。分析VEGF 在宮頸粘連程度中的表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 兩組COX-2陽性率、VEGF、MVD表達(dá)水平比較

觀察組宮腔粘連患者COX-2 陽性率、VEGF、MVD 表達(dá)水平與對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。見表1。

表1 兩組COX-2陽性率、VEGF、MVD表達(dá)水平比較

2.2 兩組MVD陽性率、VEGF陽性率比較

觀察組宮腔粘連患者M(jìn)VD 陽性率、VEGF 陽性率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組MVD陽性率、VEGF陽性率比較[n（%）]

2.3 VEGF在宮頸粘連程度中的表達(dá)比較

VEGF 在宮頸粘連不同程度中的陽性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05），見表3。

表3 VEGF在宮頸粘連程度中的表達(dá)[n（%）]

3 討論

宮腔粘連發(fā)生和感染、宮腔手術(shù)操作以及放射線密切相關(guān)，以胎盤剝離不全、閉經(jīng)、復(fù)發(fā)率流產(chǎn)、不孕、經(jīng)量減少作為主要臨床表現(xiàn)，而導(dǎo)致宮腔粘連高危因素主要包括子宮內(nèi)膜去除術(shù)、感染性流產(chǎn)后清宮術(shù)、死胎清宮術(shù)、人工流產(chǎn)術(shù)等。目前研究顯示，人體宮腔粘連部位子宮內(nèi)膜血管生長情況、子宮內(nèi)膜微血管密度、血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)之間具有相關(guān)性。而宮腔粘連患者粘連部位VEGF 表達(dá)顯著高于正常部位，對(duì)粘連部位產(chǎn)生一定影響[3]。

在臨床試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，雌激素治療前和手術(shù)切開前粘連部位相比正常組織部位的VEGF 表達(dá)較強(qiáng)，本次研究應(yīng)用免疫組化方式的抗原修復(fù)時(shí)間、一抗?jié)舛取AB 顯色時(shí)間等，上述因素均可對(duì)染色強(qiáng)度造成影響。將表達(dá)陽性細(xì)胞的百分率納入雙盲讀片和計(jì)分中，能夠使染色強(qiáng)度的分級(jí)誤差明顯減少[4]。

研究結(jié)果可能與粘連部位的炎癥反應(yīng)具有密切關(guān)聯(lián)，雖然在宮腔粘連的形成過程中與發(fā)生機(jī)制在臨床尚無明確機(jī)制，但炎癥反應(yīng)仍為形成粘連的重要因素，能夠增強(qiáng)其局部血管的滲透性，使其炎性細(xì)胞組織盡快滲出，促進(jìn)纖維蛋白機(jī)制的形成。而在纖維蛋白的降解過程中，缺血、炎癥、感染和損傷均可對(duì)其產(chǎn)生抑制效果，能夠利于纖維蛋白粘連帶的形成[5]。在炎癥過程中，首先是將多型核中性粒細(xì)胞滲出，其能夠表達(dá)較多的VEGF，在雌激素主導(dǎo)的增生期，上述炎癥細(xì)胞能夠附著于功能層的血管邊緣，會(huì)隨著時(shí)間的延長而發(fā)生消失，能夠?yàn)樽訉m內(nèi)膜中的血管新生提供較為直接的VEGF 來源。對(duì)于存在炎癥反應(yīng)的粘連細(xì)胞，其具有十分多的中性粒細(xì)胞，而正是這些中性粒細(xì)胞，其能夠增強(qiáng)粘連部位的子宮內(nèi)膜VEGF 的表達(dá)[6]。另外，子宮內(nèi)膜對(duì)VEGF 的刺激也十分敏感，女性的子宮內(nèi)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞在濃度為2%的血清內(nèi)即可培養(yǎng)成毛細(xì)胞血管結(jié)構(gòu)，其原因是是由于人體子宮內(nèi)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞上具有較強(qiáng)表達(dá)的尿激酶樣的纖維蛋白溶酶原表達(dá)和VEGF-2。將VEGF 加入后，女性子宮內(nèi)膜的基質(zhì)金屬蛋白酶以及尿激酶纖維蛋白溶酶原明顯增加，可使用尿激酶的封閉行抗體和MMP 的抑制劑，能夠有效減少毛細(xì)血管的形成[7-10]。VEGF 具有較多的生物學(xué)功能，比如增加血管通透性、促進(jìn)有絲分裂、促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增生和遷移、細(xì)胞外基質(zhì)的改變等。具體內(nèi)容：（1）與通過刺激和激活磷脂酶C，能夠使其第二信使直接促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的有絲分裂。（2）對(duì)鈣離子內(nèi)流具有介導(dǎo)作用，能夠使血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿內(nèi)鈣離子濃度明顯增加，進(jìn)而對(duì)磷酸激酶的形成產(chǎn)生刺激。人體新生血管能夠被多種因子所調(diào)控，其中最為常見的因子為VEGF-血管內(nèi)皮生長因子，其在臨床被認(rèn)為是特異性最高、作用最強(qiáng)的調(diào)控因子，也是血管內(nèi)皮細(xì)胞的特異性有絲分裂原[11-12]。

當(dāng)逆流經(jīng)血子宮內(nèi)膜粘附在人體腹膜層時(shí)，需要新生血管建立才能維持人體內(nèi)膜的發(fā)展和生存，因此血管生成十分重要。COX-2 也可以稱作為環(huán)氧合酶-2，為炎癥過程重要誘導(dǎo)酶，能參與人體子宮內(nèi)膜異位癥血管形成，具有密切相關(guān)性，而血管內(nèi)皮生長因子為人體血管生成中所需要的參與因子，具有顯著促血管形成能力，COX-2 高表達(dá)被認(rèn)為與人體宮腔粘連病理過程相關(guān)，可通過不同途徑發(fā)揮作用[13-14]。COX-2 為膜結(jié)構(gòu)蛋白，為前列腺素合成的重要限速酶，能將花生四烯酸轉(zhuǎn)代謝成PG產(chǎn)物，COX-2 在人體正常組織中均呈現(xiàn)穩(wěn)定表達(dá)，但是COX-2 在細(xì)胞受到刺激時(shí)能迅速合成，被認(rèn)為是瞬時(shí)早基因或者快速反應(yīng)基因。COX-2 表達(dá)能由多種因素進(jìn)行誘導(dǎo)，例如細(xì)胞因子、生長因子以及炎性介質(zhì)等，能參與炎癥過程和發(fā)生。在女性多種疾病中，COX-2 表達(dá)呈增高趨勢(shì)，在本次研究中對(duì)人體 COX-2 表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，研究顯示，在異常組織中COX-2 陽性表達(dá)顯著高于正常組織陽性表達(dá)，可能和人體自身免疫反應(yīng)密切相關(guān)。COX-2、VEGF 在宮腔粘連患者中均呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，同時(shí)COX-2 陽性率、MVD 表達(dá)水平也與宮腔黏連具有相關(guān)性。MVD 為衡量血管生成定量指標(biāo)，能對(duì)宮腔粘連疾病預(yù)后進(jìn)行判斷，其與宮腔粘連預(yù)后呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)關(guān)系，研究結(jié)果顯示，宮頸粘連患者M(jìn)VD 陽性率高于健康人群，從而提示其能促進(jìn)宮頸粘連形成，促進(jìn)宮頸粘連發(fā)展，和疾病預(yù)后具有密切相關(guān)性，能對(duì)宮頸粘連進(jìn)行判定[15-16]。

綜上所述，宮腔粘連患者COX-2、VEGF 及MVD 表達(dá)水平具有密切的相關(guān)性，COX-2、VEGF均呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，值得在臨床中推廣及運(yùn)用。