Visfatin在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其意義

榮瑋 徐晨 李雪松

【摘要】目的：本研究目的是探討visfatin結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及其與臨床各個(gè)病理因素之間的關(guān)系。方法：以184例結(jié)直腸癌標(biāo)本作為觀察組，對(duì)應(yīng)遠(yuǎn)切端正常腸粘膜組織作為對(duì)照組進(jìn)行visfatin免疫組化檢測(cè)。結(jié)果：visfatin結(jié)直腸癌對(duì)照組和觀察組陽(yáng)性率分別為315%（58/184）、684%（126/184），兩者比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005），visfatin的表達(dá)與患者年齡、性別和腫瘤的部位、大小無(wú)相關(guān)性，與腫瘤的分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、及TNM分期有關(guān)（P<005）。visfatin陽(yáng)性表達(dá)組和陰性表達(dá)組5年生存率分別為302%和776%。Kaplan-Meier生存分析及l(fā)og-rank顯著性檢驗(yàn)（χ2=33757，P<0001）結(jié)論：Visfatin在結(jié)直腸癌高表達(dá)及與腫瘤的分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、及TNM分期的相關(guān)性，表明Visfatin影響結(jié)直腸癌的進(jìn)展； visfatin陽(yáng)性表達(dá)與結(jié)直腸癌患者5年生存期密切相關(guān)，是影響結(jié)直腸癌預(yù)后的因素，visfatin可能成為結(jié)直腸癌的獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】結(jié)直腸癌；Visfatin；免疫組化；

【中圖分類號(hào)】R821.4+1

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號(hào)】

1005-0019（2019）16-038-01

結(jié)直腸癌（colorectalcancer，CRC）為現(xiàn)今高發(fā)的腫瘤之一，而在CRC的發(fā)病危險(xiǎn)因素中，肥胖具有明顯的獨(dú)立性[1]。

Visfatin是 Samal 等在 1994 年篩選淋巴細(xì)胞cDNA文庫(kù)時(shí)克隆成功的，人類該相關(guān)基因位于第7號(hào)染色體，長(zhǎng)約3741 kb，含 11個(gè)外顯子和 10 個(gè)內(nèi)含子，可編碼 473 個(gè)氨基酸，是一類具有類胰島素作用、促炎、促進(jìn)脂肪組織分化和合成等多種生物學(xué)活性的脂肪細(xì)胞因子，廣泛表達(dá)于體內(nèi)多種組織器官。Visfatin血漿水平升高是中國(guó)患者早期和晚期結(jié)直腸癌的一個(gè)重要危險(xiǎn)因素[2]。但在能否成為結(jié)直腸癌的預(yù)后判斷指標(biāo)國(guó)內(nèi)報(bào)道很少。

11標(biāo)本來(lái)源

隨機(jī)選取2012年1月～2013年12月期間在齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院臨床病理檢驗(yàn)中心根治性切除術(shù)的結(jié)直腸癌原發(fā)病例184例作為觀察組，術(shù)前均未經(jīng)任何系統(tǒng)的放療和化療。對(duì)照組為大腸癌遠(yuǎn)切端正常組織184例。所有病例均有五年以上隨訪資料，且用于分析的各項(xiàng)指標(biāo)記錄完整。其中男性94例，女性90例；發(fā)病年齡發(fā)病年齡42～78歲，中位年齡575歲；發(fā)生部位結(jié)腸89例，直腸95例；高中分化119例，低分化65例；浸潤(rùn)小于肌層90例，浸及或超過(guò)肌層94例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者103例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者81例；TNM分期中Ⅰ期-Ⅱ期85例，Ⅲ-Ⅳ期99例，生存期大于等于5年者83例，小于5年者101例。

12主要試劑

鼠抗人CD151、MT1-MMP多克隆抗體購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，工作液濃度為1∶600，免疫組織化試劑盒及DAB顯色液為福州邁新生物技術(shù)公司產(chǎn)品。

13實(shí)驗(yàn)方法

切片常規(guī)脫蠟，水化后，3%H2O2-甲醇封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶20min，枸櫞酸高壓修復(fù)10min，PBS洗3×3分鐘，一抗4℃冰箱過(guò)夜，第二天切片恢復(fù)室溫后，依次滴加試劑A：反應(yīng)增強(qiáng)液，試劑B：酶標(biāo)抗小鼠/兔IgG聚合物，室溫各孵育15min， 中間PBS洗3×3分鐘，DAB顯色，蘇木精復(fù)染。以PBS代替一抗作陰性對(duì)照。

14結(jié)果評(píng)定

采用半定量積分法判定結(jié)果，顯色度按細(xì)胞著色深淺計(jì)分：0分基本無(wú)著色；1分淺黃；2分淺棕，3分深棕。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比計(jì)分，無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞為0分；陽(yáng)性細(xì)胞<10%為1分；陽(yáng)性細(xì)胞≥10%～50%為2分；陽(yáng)性細(xì)胞>50%～75%為3分；陽(yáng)性細(xì)胞>75%以上為4分。

15統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用 IBM SPSS Statistics 250 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。visfatin的表達(dá)與臨床病理參數(shù)間的比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率計(jì)算，visfatin的表達(dá)與生存時(shí)間的關(guān)系采用Kaplan-Meier生存率曲線及l(fā)og-rank檢驗(yàn)，顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)α值等于005。

2結(jié)果

21visfatin在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)

visfatin免疫組化陽(yáng)性產(chǎn)物呈棕褐色顆粒狀位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)（圖1-2）。visfatin visfatin結(jié)直腸癌對(duì)照組和陽(yáng)性率分別為315%（58/184）、684%（126/184），兩者比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0005）。

22visfatin表達(dá)與結(jié)直腸癌的臨床病理因素的關(guān)系

visfatin的表達(dá)與患者年齡、性別和腫瘤的部位、大小無(wú)相關(guān)性，與腫瘤的分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、及Dukes分期有關(guān)（P<005） 見(jiàn)表1。

23visfatin表達(dá)與患者生存期的關(guān)系

184例結(jié)直腸癌患者根據(jù)visfatin陽(yáng)性表達(dá)的情況分為陽(yáng)性組和陰性組進(jìn)行Kaplan-Meier生存分析。visfatin陽(yáng)性表達(dá)組和陰性表達(dá)組5年生存率分別為302%和776%，生存分析函數(shù)曲線和風(fēng)險(xiǎn)函數(shù)曲線（圖3-4）及l(fā)og-rank顯著性檢驗(yàn)（χ2=33757，P<0001）可知， visfatin與結(jié)直腸癌患者5年生存期密切相關(guān)，是影響結(jié)直腸癌預(yù)后的因素。

3討論

Visfatin在CRC患者血清中的水平明顯增高，對(duì)CRC的診斷靈敏度和特異度均在70%左右；Visfatin水平上升與CRC發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，與疾病惡化程度和 腫 瘤 分 期 也 有 關(guān)[3]。本研究通過(guò)免疫組化半定量積分法證實(shí)了visfatin在結(jié)直腸癌過(guò)表達(dá)，與腫瘤的分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、及TNM分期有關(guān)（P<005）。新近研究表明visfatin在胃癌本研究顯示，抵抗素和Visfatin協(xié)同促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖，增強(qiáng)端粒酶基因表達(dá)。這些數(shù)據(jù)表明，胃癌組織中這兩種激素可以通過(guò)增強(qiáng)端粒酶作為癌基因的表達(dá)，協(xié)同促進(jìn)癌細(xì)胞的生長(zhǎng)[4]。乳腺癌組織內(nèi)脂素、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期、年齡和腫瘤大小，被確定為高度相互作用并與乳腺癌進(jìn)展相關(guān)[5]。子宮內(nèi)膜癌高visfatin血清水平預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后差[6]。本研究通過(guò)對(duì)visfatin表達(dá)與患者生存期的關(guān)系的研究表明visfatin與結(jié)直腸癌患者5年生存期密切相關(guān)，是影響結(jié)直腸癌預(yù)后的因素（χ2=33757，P<0001）。visfatin可能成為結(jié)直腸癌的獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)。

參考文獻(xiàn)

[1]JayasekaraH， EnglishDR ，HaydonA，etal. Associations of alcoholintake ，smoking，Physical activity and obesity with survival following colorectal cancer diagnosis by-stage， anatomic site and tumor molecular subtype[J].IntJ Cancer，2018，142（2）：238-250

[2]Chen M1， Wang Y1， Li Y2，etal. Association of plasma visfatin with risk of colorectal cancer： An observational study of Chinese patients. Asia Pac J Clin Oncol. 2016 Mar；12（1）：e65-74 doi： 101111/ajco.12090

[3]孫一帆. Visfatin與消化系統(tǒng)腫瘤的關(guān)系研究進(jìn)展[J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2016，13（16）：2388-2390 Doi：103969/j.issn.1672-9455201616063

[4]Mohammadi M1， Zarghami N2， Hedayati M1， et al. Synergistic Effects of Resistin and Visfatin as Adipocyte Derived Hormones on Telomerase Gene Expression in AGS Gastric Cancer Cell Line.Acta Med Iran. 2017 Oct；55（10）：621-627

[5]Moi SH#1， Lee YC#2，3， Chuang LY4， et al. Cumulative receiver operating characteristics for analyzing interaction between tissue visfatin and clinicopathologic factors in breast cancer progression.Cancer Cell Int. 2018 Feb 9；18：19 doi： 101186/s12935-018-0517-z.

[6]Cymbaluk-Poska A1， Chudecka-Gaz A1， Pius-Sadowska E2， et al. Circulating Serum Level of Visfatin in Patients with Endometrial Cancer. Biomed Res Int. 2018 Jan 4；2018：8576179 doi： 101155/2018/8576179